לשעבר vivo מתואר על הבידוד של השרירים הגדולים gracilis arterioles ההתנגדות לחקירה של שני כלי דם התגובות לגירויים vasoactive והערכת תכונות מבניות בסיסיות באמצעות מכניקת קיר פסיביים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
לשעבר vivo הכנה מבודדת Microvessel השלד לחקירות תגובתיות כלי דם
במאמר זה
סיכום
תקציר
הכנה microvessel מבודד הוא הכנה vivo לשעבר המאפשר בחינה של תרומות שונות של גורמים בקוטר כלי שליטה, וכך, התנגדות זלוף 1-5. זהו תכשיר ניסיוני קלאסי זה היה, במידה רבה, תיאר בתחילה על ידי אושידה et al. 15 לפני כמה עשורים. זה תיאור ראשוני סיפק את הבסיס הטכניקות שונה בהרחבה משופרת, בעיקר במעבדה של ד"ר בריאן Duling באוניברסיטת וירג'יניה 6-8, ואנחנו מציגים גישה הנוכחי בעמודים הבאים. הכנה זו באופן ספציפי מתייחסים עורקיק gracilis בחולדה כמו microvessel של בחירה, אבל ההכנה הבסיסית יכול בקלות להיות מיושם על כלי מבודדים מרקמת כמעט כל איבר אחר או על פני מינים 9-13. מכני (כלומר, מימדי) שינויים microvessels בודד יכול בקלות לעבור הערכהבתגובה מגוון רחב של פיזיולוגיים (למשל, לחץ היפוקסיה, intravascular, או גזירה) או אתגרים תרופתי, והוא יכול לספק תובנות לגבי האלמנטים המרכיבים מכניסטית תגובות המשולבים ללא פגע, אם כי רקמת vivo לשעבר. המשמעות של שיטה זו הוא שהיא מאפשרת מניפולציה קליל של ההשפעות על תקנה משולבת של קוטר microvessel, תוך המאפשר שליטה של רבים תרומות ממקורות אחרים, כולל לחץ intravascular (myogenic), עצבוב האוטונומית, hemodynamic ( למשל, מאמץ גזירה), גירויים התלויים או עצמאית אנדותל, הורמונליים, והשפעות parenchymal, כדי לספק רשימה חלקית. תחת תנאי הניסוי מתאימים ועם המטרות המתאימות, זה יכול להוות יתרון על פני in vivo או ברקמות / איברים ההכנות באתרו, שאינם מאפשרים בקלות עבור קליל של משתנים מערכתיות רחבות יותר.
תואר שניהגבלה יור הכנה זו היא למעשה תולדה של נקודות החוזק שלה. על פי ההגדרה, את ההתנהגות של הכלים האלה הוא נחקר בתנאים בהם רבים התורמים המשמעותיים ביותר בוויסות של התנגדות כלי הדם הוסרו, כולל עצבית, הלחות, חילוף החומרים וכו 'על כן, החוקר הוא הזהיר, כדי למנוע יתר פרשנות אקסטרפולציה של הנתונים אשר נאספו תוך שימוש בתכשיר זה. אזור משמעותי אחר של דאגה לגבי הכנה זו היא כי זה יכול להיות קל מאוד לגרום נזק לרכיבים תאיים כמו רירית האנדותל או השריר החלק בכלי הדם, כגון מקור משתנה הטעות יכול להיות מוצג. מומלץ מאוד כי החוקר הפרט לנצל מדידות מתאימים כדי להבטיח את איכות של התכשיר, הן התחלת הניסוי ומדי פעם במהלך כל פרוטוקול.
פרוטוקול
1. לפני הניסוי
- לפני יום הניסוי, צינורות זכוכית נימי של ממדים המתאימים עבור תחנת נמשכים לתוך micropipettes (או חולץ אופקי או אנכי ניתן להשתמש). קוטר קצה ניתן להתאים בקלות בהתאם כלי בידוד, למרות שאנו בדרך כלל להשתמש במגוון קוטר בין 50-150 מיקרומטר. אלה מכופפים אז לתצורה המתאימה לחימום הבאה microvessel תחנת על אש בוטאן. טיפים micropipette שבורים פיזית קוטר משוער (עם מלקחיים עדינים) עבור microvessel המדובר ויכול הקרקע או מלוטשת על תצורות המתאימות, לפי הצורך עבור יישום ספציפי. לסקירה נרחבת מצטיין על הליכים אלה, הקורא מופנה דייויס ואח'.....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול הציג מתאר cannulation, בידוד הסרת כפולה של microvessel שרירי השלד, אם כי טכניקה זו בכלל ניתן ליישם בקלות ברוב הרקמות. על כתב היד הנוכחי, המונח "עורקיק" נוצל בעבר על ידי החוקרים לתאר כלי התנגדות נע בין 70-120 מיקרומטר בקוטר תחת הטון פעיל מנוחה, שהיא גם תורמת רבות תקנה ההתנגדות זלוף לאיבר או רקמות.
עם כמה שינויים, מערכת זו ניתן להתקין על מספר יישומים עבור חוקר ספציפי בקלות מאפשר שילוב של טכניקות .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגוד עניינים הצהיר.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי איגוד הלב האמריקני (EIA 0740129N) ו NIH T32 HL90610.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| חומרים כימיים וציוד | חברה | תגובות / קטלוג # | |
| כלי הקאמרית | מנהג | דייב Eick (MCW) | |
| מים מחוממת מחזורי אמבטיה | PolyScience ו Haake | Haake DC 10 | |
| Pipets | פרדריק Haer ושות' | נימי Tubing 2.0 מ"מ OD x 1.0 מ"מ מזהה (27-33-1) | |
| לחץ צג | Precision של מכשירים בעולם | ||
| מאגר מים במקטורן | מנהג | ||
| מקור אור חיצוני | Precision של מכשירים בעולם | Novaflex | |
| Pipet פולר | MicroData מכשירים | PMP102 Micropipet פולר | |
| מלא משליםment של כלים כירורגיים | מדע כלים עדינים | דומון | |
| מלקחיים עדינים במיוחד | מדע כלים עדינים | Inox # 5 | |
| קשירת משי נושא | Ethilon | # 10-0 או 9-0 | |
| סטריאו מיקרוסקופ | אולימפוס | אולימפוס SZ-11 | |
| מחוגה וידאו אנלוגי | Boeckeler | באמצעות בקר (Via-100) | |
| מצלמה ברזולוציה גבוהה אנלוגי | Panasonic | GP-MF 602 | |
| חמצן טנק | אזורי | חנקן האיזון 21% ו 5% CO 2 וחנקן איזון | |
| צנור | Tygon | ||
| מסננים משאבה | קול בן הזוג Instrument ושות | ||
| עכברוש PSS שונה | ראו מתכון בהמשך | ||
| PSS להרפיית ואן Breemen של | ראו מתכון בהמשך |
טבלה 1. רשימת הרכיבים העיקריים של ההתקנה תחנת מבודד microvessel מוצגים הנתונים.
| שונה PSS עכברוש מתכון | כדי להפוך את שני ליטרים של PSS | 20X צילומים של מלח (2L) | 20X למלאי (2L) |
|---|---|---|---|
| NaCl | 278.0 גרם | ||
| KCl | 14.0 גרם | ||
| MgSO 4-7H 2 O | 11.5 גרם | ||
| CaCl 2-H 2 O | 9.4 גרם | ||
| NaHCO 3 | 80.8 גרם | ||
| EDTA | 0.4 גרם | ||
| לאא 2 PO 4 | 0.28 גר ' | ||
| גלוקוז | 1.98 גר ' | ||
| 20x מלח במלאי | 100 מ"ל | ||
| 20x מאגר צילומים | 100 מ"ל | ||
| מים מזוקקים | 1800 מ"ל |
טבלה 2. מתכון הפתרון הסטנדרטי מלח פיזיולוגית (PSS) בשימוש בפרוטוקולים microvessel מבודדים.
תגובות על המתכון: להפוך 2 ליטר של צילומים של מלח 2 ליטר של למלאי. אלה גלהיות בקירור, כאשר לא בשימוש, אבל לנער אותם היטב ולעתים קרובות לפני הכנת PSS. המרכיבים הנוספים מתווספים בעת הכנת PSS האחרונים.
| PSS להרפיית ואן Breemen של | כדי להפוך את 2 ליטרים של PSS | 20X מלח במלאי (1 ליטר) | 20X מאגר צילומים (1 ליטר) |
|---|---|---|---|
| NaCl | 107.4 גרם | ||
| KCl | 7.0 גרם | ||
| MgSO 4-7H 2 O | 5.76 גר ' | ||
| MgCl 2-6 שעות 2 O | 81.32 גרם | ||
| NaHCO 3 | 40.4 גרם | ||
| EDT | 0.2 גרם | ||
| EGTA | 15.22 | ||
| לאא 2 PO 4 | 0.28 גר ' | ||
| גלוקוז | 1.98 גר ' | ||
| 20x מלח במלאי | 100 מ"ל | ||
| 20x מאגר צילומים | 100 מ"ל | ||
| מים מזוקקים | 1800 מ"ל |
לוח 3. מתכון תמיסת מלח פיזיולוגית להרפיית ואן Breemen (PSS) שימוש בפרוטוקולים microvessel מבודדים בתנאים של בטון פעיל אפס.
תגובות על המתכון: עשה 1 ליטר של צילומים של מלחND 1 ליטר של למלאי. אלה יכולים להיות בקירור, כאשר לא בשימוש, אבל לנער אותם היטב ולעתים קרובות לפני הכנת PSS. המרכיבים הנוספים מתווספים בעת הכנת PSS להרפיית האחרונים.
מקורות
- Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome. Microcirculation. , 1-18 (2009).
- Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
