خلايا الشعر Mechanosensory هي الخلايا المستقبلة في الأذن الداخلية. وأفضل وصف في المختبر نظام نموذج ناضج خلايا الشعر الثدييات ويستخدم الجهاز من الثقافات utricles من فئران بالغة. نقدم تشريح utricle فأر بالغ، وعلينا أن نبرهن اتش بوساطة العدوى من الخلايا في دعم utricles مثقف.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تشريح Utricle الفأر الكبار واتش بوساطة العدوى الداعم الخلية
في هذه المقالة
إشعار تصحيح
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
ملخص
الملخص
وغالبا ما تسبب فقدان السمع واضطرابات التوازن عن طريق موت خلايا الشعر mechanosensory، والتي هي الخلايا المستقبلة في الأذن الداخلية. اذ لا يوجد اي خط الخلية التي تمثل مرض خلايا الشعر الثدييات، والبحث عن خلايا الشعر يعتمد على الثقافات الجهاز الرئيسي. وأفضل في نظام يتسم نموذج المختبر من خلايا ناضجة شعر الثدييات ويستخدم الجهاز من الثقافات utricles من الفئران (الشكل 1) 1-6. وutricle هي جهاز الدهليزي، وخلايا الشعر من utricle مماثلة في كل من التركيب والوظيفة للخلايا الشعر في الجهاز السمعي، وجهاز كورتي. وutricle الماوس إعداد الكبار يمثل ظهارة حسية للدراسات ناضجة من الاشارات الجزيئية التي تنظم بقاء على قيد الحياة، التوازن، وموت هذه الخلايا.
متباينة عضال الثدييات خلايا الشعر قوقعة وليس مجدد عندما ضائعون. في الثدييات غيرويتبع الفقاريات مالي، أو السمعي الدهليزي موت الخلايا الشعر عن طريق تجديد قوي الذي يعيد السمع والتوازن وظائف 7 و 8. وتوسطت الشعر تجديد الخلايا الدبقية التي تشبه الخلايا الداعمة، الذي اتصل السطوح basolateral من خلايا الشعر في ظهارة حسية 9 و 10. خلايا دعم تتجلى أيضا من بقاء الخلية الشعر والموت 11. وقد وضعنا مؤخرا تقنية لإصابة في دعم الخلايا في utricles مثقف باستخدام اتش. باستخدام نوع اتش 5 (dE1/E3) لتقديم التحوير التي تحتوي على GFP تحت سيطرة المروج CMV، نجد أن اتش على وجه التحديد ويصيب الخلايا بكفاءة دعم. خلية دعم كفاءة إصابة ما يقرب من 25-50٪، وعدم إصابة خلايا الشعر (الشكل 2). الأهم من ذلك، نجد أن عدوى الفيروسة الغدانية دعم الخلايا لا ينتج سمية للخلايا الشعر أو الخلايا الداعمة، وعدد الخلايا في AD-GFP INFutricles ected مكافئة لتلك التي في غير المصابة utricles (الشكل 3). وبالتالي اتش بوساطة التعبير الجيني في دعم خلايا utricles مثقف يوفر أداة قوية لدراسة دور كل من دعم خلايا وسطاء من بقاء الخلية الشعر، والموت، والتجدد.
البروتوكول
1. تشريح Utricle والثقافة
- الموت ببطء بالغ (4 أسابيع من العمر أو أكثر) فأر باستخدام بروتوكول تمت الموافقة عليها وقطع رأس.
- قص القناة السمعية الخارجية في كلا الجانبين من الرأس وسحب الجلد إلى الأمام نحو الأنف. شطر الرأس من الخلف إلى الأمام وإزالة الدماغ من كلا الجانبين لتكشف عن نفق عظمي.
- تقليم الجمجمة بعيدا عن القوقعة العظمية ونقل المتاهة عظمي (بما في ذلك الفقاعة) إلى غطاء محرك السيارة الأنسجة ثقافة مجهزة مجهر تشريح (ملاحظة: يجب أن يتم تنفيذ ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
خلايا الشعر الحسية هي عرضة للموت بسبب مجموعة متنوعة من الضغوط، بما في ذلك الشيخوخة، والصدمات النفسية الضوضاء، والتعرض للالعقاقير السامة، بما في ذلك المضادات الحيوية أمينوغليكوزيد وسيسبلاتين وكيل موانع الأورام. النتائج في الثدييات شعر موت الخلايا في فقدان السمع الدائم و / أو اضطراب التوازن في أنظمة نموذج المختبر هي أدوات حاسمة لدراسات تهدف الى تحديد الآليات الخلوية والجزيئية الكامنة وراء موت الخلايا الشعر، فضلا عن تلك التي تهدف إلى منع أو عكس الشعر موت الخلايا . خ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل من قبل شعبة البحوث ضمن الجدران في المعهد القومي للصمم واضطرابات التواصل الأخرى. وقدم دعم إضافي من قبل 5R01 NIDCD DC007613.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الكاشف شركة كتالوج عدد | |||
| متوسط 199 | Gibco / إينفيتروجن | 12350 | |
| DMEM/F12 | Gibco / إينفيتروجن | 11320 | |
| الجميلة ملقط (# 55) | أدوات العلم الجميلة | 11255-20 | |
| الجميلة ملقط (# 5) | أدوات العلم الجميلة | 11252-30 | |
| الملقط (# 3) | أدوات العلم الجميلة | 11231-30 | |
| البنسلين G | سيجما | P3032 | |
| مصل بقري جنيني | إينفيتروجن | 10082-139 | |
| نونك صغيرة صينية | فيشر | 12-565-68 | |
| اتش-GFP | ناقل Biolabs | 1060 * | |
| كال السابقين decalcifier | فيشر | CS510-1D | |
| بوروهيدريد الصوديوم | سيجما | 452882 | |
| مكافحة الميوسين 7A (بولكلونل) | بروتيوس العلوم البيولوجية | 25-6790 | |
| مكافحة الميوسين 7A (وحيدة النسيلة) | الدراسات التنموية ورم هجين البنك | MYO7A 138-1 | |
| مكافحة كالمودولين | سيجما | C 3545 | |
| مكافحة Calbindin | Chemicon | AB1778 | |
| Fluoromount G | جنوب شركاء التكنولوجيا الحيوية | 0100-01 |
الجدول 1. الكواشف والأدوات المستخدمة في ثقافة utricle وعدوى اتش.
* ملاحظة: يتم توفيرها عادة AD-GFP بواسطة Biolabs المتجهات في الأوراق المالية من عيار 1x10 10 PFU / مل. وطلبت لدينا التضخيم مخصصة من أجل توفير مخزون الفيروس في عيار من 10 × 1.2 11 PFU / مل.
المراجع
- Cunningham, L. L. The adult mouse utricle as an in vitro preparation for studies of ototoxic-drug-induced sensory hair cell death. Brain Res. , (2006).
- Schmitt, N. C., Rubel, E. W., Nathanson, N. M. Cisplatin-induced hair cell death ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
تصحيح
Formal Correction: Erratum: Dissection of Adult Mouse Utricle and Adenovirus-mediated Supporting-cell Infection
Posted by JoVE Editors on 4/17/2012. Citeable Link.
null
