Perfusione retrograda e riempimento del sistema vascolare coronarico mouse come preparazione per la Micro Computed Tomography Imaging

Sommario

Visualizzazione dei vasi coronarici è fondamentale per avanzare la nostra comprensione delle malattie cardiovascolari. Qui si descrive un metodo per la perfusione vascolare coronarica murino con una gomma di silicone radiopaco (Microfil), in preparazione per le micro-Tomografia Computerizzata (μCT) imaging.

Abstract

Visualizzazione della vascolarizzazione sta diventando sempre più importante per capire molti stati patologici diversi. Mentre esistono diverse tecniche per l'imaging vascolare, pochi sono in grado di visualizzare la rete vascolare nel suo insieme, mentre si estende a una risoluzione che include il ^1,2 imbarcazioni più piccole. Inoltre, molte tecniche di fusione vascolari distruggere il tessuto circostante, impedendo ulteriori analisi del campione ^3-5. Un metodo che elude questi temi è micro-Tomografia Computerizzata (μCT). μCT possibile eseguire la scansione di immagini con risoluzione inferiore a 10 micron, è capace di produrre ricostruzioni 3D della rete vascolare, e lascia intatto il tessuto per l'analisi successiva (ad esempio, l'istologia e la morfometria) ^6-11. Tuttavia, navi imaging di ex vivo metodi μCT richiede che i vasi da riempire con un composto radiopaco. Come tale, la rappresentazione accurata di vasi prodotta da μCT immagini è subordinatoriempimento affidabile e completa dei vasi. In questo protocollo, si descrive una tecnica per il riempimento di vasi coronarici del mouse in preparazione per l'imaging μCT.

Due tecniche predominano esistono per il riempimento del sistema vascolare coronarico: in vivo via cannulazione e perfusione retrograda dell'aorta (o di un ramo dell'arco aortico) ^12-14, o ex vivo mediante un sistema di perfusione Langendorff ^15-17. Qui si descrive un metodo in cannulazione aortica vivo che è stato specificamente progettato per garantire il riempimento di tutte le navi. Usiamo un composto a bassa viscosità radiopaco chiamato Microfil che può perfondere attraverso i piccoli vasi per riempire tutti i capillari, nonché entrambi i lati arterioso e venoso della rete vascolare. Le navi sono perfusi con tampone utilizzando un sistema di pressione di perfusione, e poi riempito con Microfil. Per garantire che Microfil riempie i piccoli vasi di resistenza superiori, abbiamo legare i rami di grandi dimensioni emanating dall'aorta, che devia il Microfil nelle coronarie. Una volta che il riempimento è completata, per impedire la natura elastica del tessuto cardiaco da spremere fuori Microfil di alcuni vasi, si legare accessibili i punti importanti uscita vascolari immediatamente dopo il riempimento. Pertanto, la nostra tecnica è ottimizzato per il riempimento completo e la ritenzione massimo dell'agente di riempimento, permettendo la visualizzazione della completa rete vascolare coronarico -, capillari, arterie e vene simili.

Protocollo

1. Preparativi prima di iniziare

1. Riempire ciascun lato dell'apparecchio perfusione pressione con tampone Vasodilator (4 mg / L papaverina + 1 g / L adenosina in PBS) o 4% paraformaldeide (PFA) in PBS, rispettivamente.
2. Preparare una siringa 1/2cc insulina (con una 29G permanentemente attaccato ½ "needle), riempiendolo con 0,1 ml di eparina 1:100 (stock 5000U/ml) e piegando l'ago ~ 120 gradi con il smussata. Do the stesso con una siringa da 1 ml (con 26G ½ "spillo) riempita con 0,3 ml di soluzione satura di KCl.

2. L'esposizione del cuore e dell'aorta cannulating

1. Anestetizzare il mouse u....

Discussione

Tessuto cardiaco ha una forte domanda metabolica, e richiede pertanto un costante rifornimento di sostanze nutritive e ossigeno dal sangue erogata dal sistema vascolare coronarico. Malattie dei vasi coronarici, che riducono la funzione a causa di stenosi coronarica nave e blocco, possono portare a ipossia tissutale e di ischemia, e mettere i pazienti affetti a rischio di infarto miocardico e danni irreparabili al muscolo cardiaco. Una migliore comprensione dello stato di malattia di questi vasi è necessario, e critico p.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Nome del reattivo	Azienda	Numero di catalogo	Comments
1 ml siringhe	Becton Dickinson	BD-309602
Siringhe da insulina 1/2cc con aghi fissi ½ 29G '	Becton Dickinson	BD-309306
Garza 2 "x 2" pastiglie	Med101store.com	SKU 2208
24G ¾ "Angiocath IV catetere	Becton Dickinson	BD-381112
26G ½ "aghi calibro	lank "> Becton Dickinson	BD-305111
L'adenosina	Sigma	A9251	1 g / L in PBS per Buffer Vasodilatazione (con papaverina)
Pinze angolari Graefe	Strumenti di Scienza Fine	11052-10
Cotton-punte: 6 applicatori "non sterile	Cardinal Health	C15055-006
Forbici chirurgiche curve	Strumenti di Scienza Fine	14085-09
Stereoscopio dissezione e la sorgente di luce	Nikon	NA	NA
Vassoio dissezione, 11,5 x 7,5 pollici	Cole-Parmer	YO-10.915-12	Riempito con tar per appuntare premuto il mouse
Fine pinze curve	Aesculap	FD281R	Hai bisogno di due
L'eparina, 5000 U / ml magazzino	APP Pharmaceuticals LLC	NDC 63323-047-10	Diluizione 1:100 in acqua
KCl	Pescatore	P217	Soluzione satura di H2O
Ketamina (Ketaset), 100 mg / ml magazzino	Fort Dodge, Overland Park, KS, USA	NDC 0856-2013-01	Misto di 130 mg / kg di peso corporeo, con Xylazina allo 0,9% sAline
Microfil	Flusso Tech	MV-122 (giallo). Altre opzioni di colore sono inoltre disponibili.	Mescolare 01:01 in peso, con il 10% in volume di catalizzatore. Preparare immediatamente prima dell'iniezione, e vortex per assicurarsi che sia ben amalgamato
Non sterile di sutura: 6-0, seta intrecciata	Harvard Apparatus	723287
Papaverina	Americano Regent Inc.	NDC 0517-4010-01	4 mg / L in PBS per Buffer Vasodilatazione (con adenosina)
Paraformaldeide	Sigma	P6148	Preparato come soluzione al 4%
Perfusione Apparatus			Vedere la figura 2
Primavera Forbici	Strumenti di Scienza Fine	15018-10
Xilazina (Anased), 20 mg / gl magazzino	Lloyd Labs	NADA # 139-236	Misto di 8,8 mg / kg di peso corporeo, con ketamina in soluzione salina 0,9%