La cataratta è la principale causa di cecità nel mondo. Radiazione ultravioletta solare (UVR) è il principale fattore di rischio per lo sviluppo della cataratta. Un modello animale di gran lunga raggi UV-B indotta da cataratta è stato sviluppato. In questo articolo si descrivono i metodi di indagine della cataratta: l'esposizione a raggi UV, RT-PCR e immunoistochimica.
La cataratta è la principale causa di cecità nel mondo 1. L'Organizzazione Mondiale della Sanità definisce cataratta come una opacità del cristallino dell'occhio che impedisce il trasferimento della luce. La cataratta è una patologia multifattoriale associata al diabete, il fumo, le radiazioni ultraviolette (UVR), alcool, radiazioni ionizzanti, gli steroidi e l'ipertensione. Vi è una forte evidenza sperimentale 2-4 e 5,6 epidemiologica che UVR causa della cataratta. Abbiamo sviluppato un modello animale per UVR B cataratta indotta sia anestetizzati 7 e non animali anestetizzati 8.
L'unica cura per la cataratta è l'intervento chirurgico, ma questo trattamento non è accessibile a tutti. È stato stimato che un ritardo di insorgenza della cataratta per 10 anni potrebbe ridurre la necessità di chirurgia della cataratta del 50% 9. Per ritardare l'incidenza di cataratta, è necessario per comprendere i meccanismi di formazione della cataratta e trovare strategia efficace di prevenzionegie. Tra i meccanismi di sviluppo della cataratta, apoptosi svolge un ruolo cruciale nella apertura di cataratta nell'uomo e negli animali 10. La nostra attenzione è stata recentemente apoptosi nella lente come meccanismo per la cataratta sviluppo 8,11,12. Si prevede che una migliore comprensione dell'effetto della UVR sul percorso apoptosi fornirà possibilità per la scoperta di nuovi farmaci per prevenire la cataratta.
In questo articolo, si descrive come la cataratta può essere indotta sperimentalmente dalla esposizione in vivo a raggi UV-B. Inoltre RT-PCR e immunoistochimica sono presentati come strumenti per lo studio dei meccanismi molecolari di raggi UV-B indotta da cataratta.
Questo articolo descrive i metodi che consentono di studiare gli eventi molecolari che si verificano durante raggi UV-B indotta da cataratta.
Considerando, che più le informazioni disponibili in vivo UVR cataratta indotta è stato derivato da esperimenti su albino Sprague-Dawley 7, 16, 17, 18, 19, abbiamo deciso di utilizzare l'albino ratto Sprague-Dawley nel presente studio. Età dei ratti aveva sei settimana fa. Il genere è stato scelto per essere femm…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto dal Karolinska Institutet KID-finanziamento, Autorità svedese per la protezione dalle radiazioni, Karolinska Institutet Eye Research Foundation, Gun och Bertil Stohnes Stiftelse, Occhio di St. Erik Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Gustav V: s och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
Agarose | Sigma | A5093 | |
Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
Vectashield | Vector Laboratories | ||
Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
TBE buffer 10x | Promega | V4251 |