Summary
أم الدم نزيف تحت العنكبوتية (SAH) والذي يحدث نزيف في الفضاء تحت العنكبوتية عندما تمزق تمدد الأوعية الدموية. في حين كانت معدلات الاعتلال والوفيات من هذا الحدث على انخفاض بسبب النهج تحسين العلاج، وخطر بالتشنج بعد نزيف تحت العنكبوتية لا يزال هو نفسه كما كان قبل عدة سنوات. كانت أهمية إنشاء نموذج حيواني شاملة وقابلة للتكرار لتحديد بدء الأحداث من تشنج وعائي دماغي محور البحوث منذ أول استخدام للالفئران في نموذج بالتشنج التجريبية في عام 1979 من قبل باري
Abstract
الهدف: تحديد الخصائص ووضع نموذج يمكن استنساخه تشنج وعائي دماغي الذي يوضح تأخر بعد نزيف تحت العنكبوتية أم الدم (SAH) في الفئران، من أجل تحديد بدء الأحداث، والتغيرات المرضية في جسم المريض والأهداف المحتملة لتلقي العلاج.
تم تعيين تعسفا إلى واحدة من مجموعتين - ثمانية وعشرون من الذكور سبراغ داولي الفئران (300 ز 250) - SAH أو السيطرة المالحة: طرق. كان بفعل الجرذان نزيف تحت العنكبوتية SAH في المجموعة (ن = 15) عن طريق الحقن المزدوج من الدم الذاتي، 48 ساعة على حدة، في صهريج للماجنا. تم حقن وبالمثل، ملحي (ن = 13) في ماجنا صهريج للمن السيطرة على المجموعة المالحة. تمت التضحية الفئران في اليوم الخامس بعد الحقن الثاني والدم والحفاظ على العقول للتحليل النسيجي. وقد تم قياس درجة بالتشنج باستخدام مقاطع من الشريان القاعدي، عن طريق قياس اللمعية عبر منطقة الداخلية باستخدام قطاعات NIH-J صورة البرنامج. كان مغزىاختبار توكي باستخدام / كرامر 'ق التحليل الإحصائي.
النتائج: بعد تحليل المقاطع النسيجية، الشريان القاعدي المنطقة عبر اللمعية قطاعات كانت أصغر في SAH من المياه المالحة في المجموعة، بما يتفق مع تشنج وعائي دماغي في المجموعة الأولى. في المجموعة SAH، كانت منطقة الشريان القاعدي الداخلي (0.056 ميكرون ± 3) أصغر بكثير من بالتشنج بعد خمسة أيام من الحقن بالدم الثانية (سبعة أيام بعد الحقن الدم الأولي)، مقارنة مع مجموعة التحكم المالحة مع منطقة الداخلية (0،069 ± 3، P = 0.004). لم تكن هناك وفيات من تشنج وعائي دماغي.
الاستنتاج: نموذج الفئران SAH مزدوجة يدفع، النجاة خفيفة، بالتشنج الشريان القاعدي التي يمكن استخدامها لدراسة آليات المرضية في جسم المريض من تشنج وعائي دماغي في نموذج حيوان صغير. A معدل وفيات منخفضة ومقبولة هو معيار هام ليكون راضيا عن نموذج مثالي الحيوان بحيث SAH آليات بالتشنج يمكن أن يكون elucidated 7 و 8. ويمكن إجراء المزيد من التعديلات لنموذج لضبط شدة زيادة بالتشنج والعصبية الامتحانات.
Protocol
1. جراحة الفئران لSAH الموضوع حقنوا 0،15 مل الدم الشرياني ذاتي
- الفأر هو تخدير باستخدام 0.1 مجم / كجم من الكيتامين كوكتيل القوارض / زيلازين ويسمح للجلوس لمدة 5 دقائق.
- وأكد التخدير الكافي من انخفاض في أطرافهم هند منعكس.
- باستخدام ماكينة حلاقة الإلكترونية وحلق لعنق الأنف مجال الشعر حول المنطقة الفرعية القذالي.
- يتم وضع الحيوان مستلق على طاولة الجراحة وممسوح الذيل مع betadine لضمان شق العقيمة.
- يتم أخذ مستقيم خط الوسط 1 سم على الجانب شق بطني من الذيل
- يتم توسيع تشريح حتى يتم التعرف على الشريان الذيل ومعزولة.
- باستخدام مقياس العقيمة 26-القسطرة، ومقنى الشريان الذيل ويتم سحب 0،15 مل من الدم الشرياني في حقنة.
- واختتم شاش معقم حول شق لضمان الإرقاء قبل تطبيق vetbond لختم الجرح.
- Tوهو تحول الفئران المعرضة على الطاولة ومنطقة حلق فوق منطقة شبه القذالي وممسوح مع betadine.
- باستخدام العمودي الوصول شق خط الوسط لاكتساب ماجنا صهريج لل.
- يتم إدراج المحددة مرة واحدة في إبرة قياس 25 إلى ماجنا صهريج ويتم سحب 0،15 مل من السائل النخاعي في حقنة لتجنب الضغوط داخل الجمجمة مع زيادة حجم الدم حقن ذاتي.
- الآن، يتم حقن 0.15 مل من الدم المستخرج من الشريان الذيل ببطء إلى ماجنا صهريج لل.
- تبقى الإبرة في مكانها لمدة 30 ثانية لضمان تخثر في الفضاء تحت العنكبوتية ومن ثم سحب بعناية.
- وتكفل الإرقاء ويتم إغلاق الجرح باستخدام جهاز تدبيس.
- الآن يتم وضع الحيوان عرضة على سطح الاحترار مع رئيس 20 درجة أسفل المنصب لمدة 20 دقيقة للسماح لتحجر الدم في الشريان الصهاريج في جميع أنحاء القاعدي.
- وتتكرر الخطوات 1،1 حتي 1،15 خلال ساعة الثانية 48 عملية جراحية على حدة.
2. جراحة الفئران لSAH الموضوع حقنوا المالحة مل 0،15
- الفأر هو تخدير باستخدام 0.1 مجم / كجم من الكيتامين كوكتيل القوارض / زيلازين ويسمح للجلوس لمدة 5 دقائق.
- وأكد التخدير الكافي من انخفاض في أطرافهم هند منعكس.
- باستخدام ماكينة حلاقة الإلكترونية وحلق لعنق الأنف مجال الشعر حول المنطقة الفرعية القذالي.
- يتم وضع الحيوان مستلق على طاولة الجراحة وممسوح الذيل مع betadine لضمان شق العقيمة.
- يتم أخذ مستقيم خط الوسط 1 سم على الجانب شق بطني من الذيل
- يتم توسيع تشريح حتى يتم التعرف على الشريان الذيل ومعزولة.
- باستخدام مقياس العقيمة 26-القسطرة، ومقنى الشريان الذيل ويتم سحب 0،15 مل من الدم الشرياني في حقنة.
- واختتم شاش معقم حول شق لضمان الإرقاء قبل تطبيق vetbond لختم الجرح.
- رعيتم تشغيل ر عرضة على الطاولة ومنطقة حلق فوق منطقة شبه القذالي هي التي رسمت مع betadine.
- باستخدام العمودي الوصول شق خط الوسط لاكتساب ماجنا صهريج لل.
- يتم إدراج المحددة مرة واحدة في إبرة قياس 25 إلى ماجنا صهريج ويتم سحب 0،15 مل من السائل النخاعي في حقنة ويتم تخزين العينة.
- الآن، يتم حقن 0.15 مل من المحلول الملحي العادي (37 ° C) ببطء في ماجنا صهريج لل.
- تبقى الإبرة في مكانها لمدة 30 ثانية وسحب بعناية.
- وتكفل الإرقاء ويتم إغلاق الجرح باستخدام جهاز تدبيس.
- الآن يتم وضع الحيوان عرضة على سطح الاحترار مع رئيس أسفل 20 درجة لمدة 20 دقيقة موقف.
- وتتكرر الخطوات 2،1 حتي 2،15 خلال ساعة الثانية 48 عملية جراحية على حدة.
3. الفئران النحر
- في يوم 5 بعد اجراء عملية جراحية ثانية، يتم التضحية الفئران عن طريق نضح القلب.
- يتم إعطاء الفئران جرعة قاتلة (00.2 مل / كجم) من زائد فادح (نوادي المضاربة والإستثمار PHARMACEUTICALS LTD.، ديربورن، MI)
- مع شق خط الوسط الرأسي، واقترب من تجويف البطن ويتم فتح الغشاء البريتوني.
- يتم تنفيذ بضع الصدر الأمامي ويتعرض القلب.
- باستخدام قسطرة قياس 26-متصلة الفوسفات العازلة الحل (PBS درجة الحموضة 7.4 وعلى درجة 37) يتم تصريف الدم من الحيوان وperfused ثم مع بارافورمالدهيد 4٪.
- بعد التأكد من نضح كافية، يتم إيقاف نضح ويتم إحضارها على الفئران الى طاولة قطع الرأس.
- بعد قطع الرأس، يتم استخدام مقراض العظم لإزالة الجمجمة لإزالة الدماغ.
- يتم استخراج بعناية الدماغ والدماغ من الجمجمة قبو، ووضع في حل بارافورمالدهيد 4٪ وتخزينها في C ° 4 لمدة 48 ساعة.
4. إنشاء أقسام لتقييم بالتشنج
- يتم إحضارها الدماغ الفئران التي تم الآن غارقة في السكروز 30٪ لمدة 4 أيام إلى عشرةه ناظم البرد لتقطيع.
- يتم إنشاء cryoprotected مرة واحدة، أقسام ميكرومتر 12 باستخدام ناظم البرد، مع الشريان الأمامي السفلي مخيخي (الأيكا) كنقطة انطلاق لضمان الاتساق بين الموضوع.
- يتم إنشاء 20 من الأقسام لكل حيوان، وتنتهي في الشريان مخيخي فخمة (SCA).
- يتم وضع الأقسام على شريحة زجاجية والمقررة لبالتشنج باستخدام منهجية النسيجية
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ضمن البروتوكولات المذكورة أعلاه، هناك العديد من الخطوات التي نعتقد أنها تتطلب أفضل توصيف للنموذج من ما وصف سابقا في الأدب. هنا علينا أن نركز على الخطوات التي لا غنى عنها من أجل تحقيق استنساخه وفيات منخفضة الدماغي نموذج بالتشنج الحيوانات الصغيرة وتجنب المزالق المحتملة المرتبطة مع هذا النموذج إذا لم تفعل بشكل صحيح.
1. ذاتي سحب الدم من الشريان الذيل:
وضع دقيق للangiocatheter في الشريان الذيل هو خطوة أولى أساسية في النموذج. الشكل-1 يبين وضع قسطرة قياس 26 في الشريان ذيل الفأر. هذا يمثل موضع جيدة مع الحد الأدنى من الصدمة وفقدان الدم. ويمكن التأكد من تحديد المكان المناسب للangiocatheter الدم عن طريق العودة جيدة.
2. حقن الدم الذاتي في ماجنا صهريج لل:
تشريح عميق روالذي كان يقوم به المنطقة تحت القذال حتى الغشاء الفهقي القذالي هو تصور وبيضاء لامعة غشاء (الشكل-2). يتم الوصول إلى الصهريج الكبير عن طريق ثقب غشاء من خلال بإبرة 25-قياس. وتجدر الإشارة بعد انسحاب الإبرة، وتجميع الدم، لضمان وجود حجم كاف من الدم الذاتي يبقى داخل الفضاء تحت العنكبوتية من ماجنا صهريج لل. تجميع الدم المفرط على الجانب الخارجي للغشاء الفهقي القذالي غير مرغوب فيها لنموذجنا يستخدم كميات منخفضة نسبيا (0.15 مل) من الدم الذاتي مقارنة النماذج القائمة وتجمع يمكن أن يؤدي إلى كميات من الدم غير فعالة في الفضاء تحت العنكبوتية. زيادة حجم الدم في كثير من الأحيان أدى فشل الجهاز التنفسي في الضغط داخل الجمجمة من المفترض مرتفعة ومنتجات الدم بعد وقت قصير من الحقن. جمع الدم حول الشرايين في الفضاء تحت العنكبوتية هي واحدة من عدة طرق ممكنة لبدء بالتشنج التجريبية 8
3. عينة
الرقم يبين-3 على عينة من الدماغ استرجاع الفئران دون (الشكل 3A-) ومع نزيف تحت العنكبوتية (الشكل 3B-). لاحظ جمع الدم في الفضاء تحت العنكبوتية حول الشريان القاعدي في الشكل 3B-. هذا يمثل حجم كاف من الدم للحث على بالتشنج من الشريان القاعدي. الأسهم في الشكل 3A-3B-الشكل وتحديد مدى الشريان القاعدي (BA). تؤخذ أقسام (12 ميكرون) من طول BA تمتد من الأيكا إلى SCA.
4. النسيجي الأقسام
وقد تم تحليل والعشرين أقسام لكل عينة الشريان القاعدي في السيطرة SAH والمالحةمجموعات (الشكل-4). كانت معي عبر مساحة المقطع الداخلي من الشريان القاعدي أصغر وكان هناك تمويج كبيرة من الصفيحة المرنة الداخلية وتوحي بالتشنج، في المجموعة SAH (الشكل 4A-). وكان الشريان القاعدي من المجموعة الضابطة المالحة أكبر في منطقة ولم يكن لديك مرونة الصفيحة المموجة الداخلية (الشكل-4B). ويمكن الاطلاع على القياس الكمي لدرجة الانخفاض في المنطقة الواقعة بين المجموعتين في الشكل 5. هذه الدراسات تؤكد أن هذا النموذج لا تنتج SAH بالتشنج الدماغي التي يمكن تقييمها باستخدام أساليب النسيجية. كان يستخدم لمعي منطقة المقطعية لتحديد بالتشنج لأن معالجة الأنسجة أحيانا نتائج غير متبلور في المقاطع العرضية للسفن، مما يجعل من الصعب تحديد قطرها المناسبة لقياس واستخدامها لتحليل البيانات. أجريت جميع القياسات باستخدام صورة NIH-J البرمجيات. في المجموعة SAH، الشريان القاعدي هيكانت (0.056 ميكرون الداخلية = ± 3) أصغر بكثير من السيطرة على المجموعة المالحة (الداخلية = 0.069 ميكرون ± 3، P = 0.004) بسبب تشنج وعائي. تم اختبار توكي أهمية استخدام / كرامر 'ق التحليل الإحصائي. يوضح الجدول 1 هذه القيم مع الانحرافات المعيارية وحساب الأخطاء المعيارية لكلتا المجموعتين.
يتم إدراج الرقم 1. ادخال قسطرة قياس 26 في الشريان الذيل.
الشكل 2. ظهور الغشاء الفهقي القذالي (السهم) في الفئران.
الشكل 3. السطح البطني للحمالة الصدر الفئرانالشريان القاعدي instem (الأسهم) مع (A)، ودون SAH، (B).
الشكل 4. أقسام نسيجية تظهر الشريان القاعدي في SAH (A) والسيطرة المالحة (B) مجموعات. لاحظ أن اللمعية منطقة المقطعية من الشريان القاعدي أصغر والصفيحة المرنة الداخلية هو المموج (السهم) في المجموعة SAH، سواء بما يتفق مع بالتشنج.
الشكل 5. مقارنة بين المناطق عبر الشريان باسيلار قطاعات اللمعية بين مجموعات المراقبة SAH والمالحة.
| عد | يعني (اللمعية منطقة المقطعية) | الأمراض المنقولة جنسيا. ديف. | الأمراض المنقولة جنسيا. يخطئ. | |
| SAH | 15 | 0،056 مم | 0.01 | 0،003 |
| ملحي | 13 | 0،069 مم | 0،012 | 0،003 |
الجدول 1. المحسوبة الوسائل والانحرافات المعيارية من SAH ومجموعات المراقبة salien.
| الكتاب | 2 الثانية SAH | مصدر | حقن المجلد (1 ST / الثانية 2) | التضحية (آخر 2 الثانية SAH) | تحليل طرق | معدل الوفيات |
| Ryba وآخرون (1999) | 48 | شرياني | 0.1/0.1 مل | اليوم 5 | EM | 25٪ |
| سوزوكي وآخرون (1999) | 48 | الشريانL | 0.3/0.3 مل | اليوم 5 | تصوير الأوعية | غير معروف |
| ساتو وآخرون. (2002) | 48 | شرياني | 0.35/0.35 مل | اليوم 5 | علم الأنسجة | 20٪ |
| Aladag وآخرون (2003) | 48 | وريدي | 0.3/0.3 مل | يوم 4 | علم الأنسجة | 18٪ |
| Vatter وآخرون (2006) | 24 | شرياني | 0.2/0.2 مل | اليوم 3 | تصوير الأوعية، التصوير بالرنين المغناطيسي | 47٪ |
| لي وآخرون (2008) | 24 | شرياني | 0.3/0.2ml (ن = 15) 0.2/0.1 مل (ن = 54) | أيام 1/3/4/7/9 * | علم الأنسجة | 40٪ (ن = 15) 1.5٪ (ن = 54) |
| تمت التضحية تفاضلي * الجرذان يوم 1 (ن = 7)، يوم 3 (ن = 7)، يوم 5 (ن = 7)، يوم 7 (ن = 7)، يوم 9 (ن = 7) وآخرون (2008) | ||||||
الجدول 2. موجز للنشر النماذج المزدوجة تحت العنكبوتية نزف الفئران.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الرئيسيات، وجود أكثر تكوين مماثلة الوراثية والخصائص التشريحية للإنسان، بشكل وثيق تقليد أحداث بالتشنج الدماغي وتأخر بسهولة أكبر الخضوع غير الغازية التصوير (MRI وتصوير الأوعية) لمراقبة التغييرات في الشرايين، من القوارض 8. ومع ذلك، ونماذج الرئيسيات من حيث التكلفة الباهظة والمرتبطة الرعاية أكثر تعقيدا والقضايا الأخلاقية، من نماذج حيوانية صغيرة. الحيوانات الصغيرة النماذج SAH التي تم وضعها سابقا ركزت على ثلاث وسائل للتحريض SAH: 1) ثقب الشرايين اللف من الشريان داخل الجمجمة مما يسمح للدم للهروب الى الفضاء تحت العنكبوتية وجمع نحو الشريان المصاب، 2) من التعرض للعمليات الجراحية والشريان جلطة المحلية حقن ذاتي، 3) الحقن المباشر للفي الدم (ذاتي أو المانحة) في الفضاء تحت العنكبوتية 8. كل نموذج له مزاياه وعيوبه. على سبيل المثال، نموذج ثقب اللف أوثق يحاكي الأحداث من aneurysويرتبط م تمزق ولكن مع معدل وفيات عالية جدا وتشنج وعائي في وقت مبكر، في حين ان النهج الجراحية مفتعلة ولا تقليد أحداث العرض الإنسان نموذجية من SAH أم الدم. نموذج الحقن المباشر التي وصفنا هنا لا يقل لديهم معدل وفيات من طراز ثقب اللف وأكثر من ذلك عن كثب يحاكي حالة SAH الإنسان من نموذج جراحي مفتوحة. وقد وصفت على الرغم من نماذج مماثلة في السابق، كان لدينا منحنى التعلم كبير مع نموذج التنمية SAH لأن المضاعفات المحتملة من الفروق الدقيقة للنموذج، لم تكن وصفا جيدا من قبل في أي مكان. كان لدينا نية لتحديد أفضل لهذه الفخاخ المحتملة بحيث يمكن المحققين المستقبل أكثر سهولة استخدام هذا النموذج SAH استنساخه.
في حين نقترح نموذجا بسيطا وفعالة من حيث التكلفة لدراسة آثار تأخر بالتشنج، فإنه لا يخلو من حدوده. نظرا لقدرة الفئران لمسح بسرعة الدم من الفضاء تحت العنكبوتية،والاختلافات التشريحية في الشرايين الدماغية نفسها، وتعتبر الفئران نموذج الفقيرة لدراسة نزيف تحت العنكبوتية تأخر 6 و 8. هناك بضع خطوات حاسمة من شأنها أن تؤثر على نتائج النموذج. ينبغي أن جرعة من الكيتامين / زيلازين كوكتيل لا تتجاوز 0.1 مل / كغ لضمان التخدير الكافي. وتجدر الإشارة إلى أي مبلغ من تجميع الدم بعد الحقن في ماجنا صهريج وموثقة كما لاحظنا أن تجميع الدم يؤدي إلى درجة أقل من بالتشنج 9، 13، 15. دراسات أخرى قد أظهرت أن حقن الثاني من الدم على مدار 24 ساعة وبصرف النظر يمكن أن تحدث درجة كبيرة من أكثر بالتشنج 6، نعتقد أنه لن تحاكي بالطبع وقت بالتشنج في البشر حيث نادرا ما يحدث تشنج وعائي قبل ثلاثة أيام بعد SAH. من أجل مزيد من كثب تقليد هذه الدورة مرة جعلنا من الحقنة الثانية من 48 ساعة الدم بعد الحقنة الأولى.
إمكانية إدخال تعديلات على النموذج الذي describه تشمل ضخ كميات أكبر من الدم إلى الفضاء تحت العنكبوتية، وتغيير مصدر الدم، وتغيير مسار زمني لحقن الثانية، وكذلك إلى التضحية من خمسة أيام بعد الحقن الدم الثاني. ويمكن الاطلاع على هذه الاختلافات في النماذج السابقة أعلاه في الجدول 2. أثناء تطوير نموذجنا، استخدمنا كلا النموذجين حقنة واحدة ومزدوجة وغيرت الوقت بين الحقن مع النموذج SAH مزدوجة، اختبار أحجام مختلفة من الدم، اختبار آثار الدم hemolysed، حاول الوريدي مقابل الشرايين وذاتي مقابل التبرع بالدم الحقن. كل من هذه التعديلات تؤدي إلى المضاعفات التي أدت إلى نموذج غير قابل للاستخدام لاختبار تأخر بالتشنج. وصف النموذج أعلاه تنتج باستمرار انخفاض معدلات الوفيات القاعدي الشريان SAH الصغيرة نموذج حيواني من تشنج وعائي دماغي المتأخرة (CV) 6 و 7 و 11 و 13 و 15.
معدلات وفيات منخفضة تسمح لفهم أشمل لENآلية تمل من تشنج وعائي دماغي 13. Bederson وآخرون. 1 لقد استخدم النموذج ثقب اللف، مسجلا معدل وفيات بنسبة 50٪ في غضون 24 ساعة من المراقبة. وصف Veelken وآخرون 16 مع نموذجهم خيوط اللف ثقب ICA معدل وفيات بنسبة 100٪ في المجموعة نضح العادية بعد 3 ساعة من هذا الإجراء. وأظهرت نموذج ثقب اللف يقوم بها لي وآخرون .. 7 درجة كبيرة من تشنج وعائي (BA 230 ميكرون قطر ± 70) مقارنة مع نموذج نزف مزدوجا داخل نفس الدراسة (BA 320 ميكرون قطر ± 36)، ومعدل وفيات لل وأفادت التقارير أن يكون نموذج ثقب 44٪. وزيادة خمسة أضعاف في مستويات الجلوتامات، فضلا عن الزيادات في تركيزات اللاكتات والأحماض الدهنية الحرة هي بعض من الآثار الضارة الأيض ينظر بضع دقائق بعد تحريض SAH التي تسهم في زيادة معدل الوفيات في نموذج ثقب 10. وإعادة أدلة كافية لدعم هذا النموذج ثقب يحتاج إلى مزيد من التنقيح من أجل السيطرة على معدلات وفيات عالية.
معدلات وفيات باستخدام نموذج نقرا مزدوجا SAH تختلف اختلافا كبيرا تبعا لحجم حقن الدم ومعدل الحقن. وجدنا أن كميات أكبر من الدم ومعدلات أسرع الحقن، تؤدي كلها إلى توقف التنفس والموت في كثير من الأحيان أثناء أو مباشرة بعد حقن الدم. خلال تطوير النماذج، وتراوحت معدلات وفيات من 1.5٪ إلى 47٪ مع حجم الدم كونها أهم العوامل المؤثرة الوفيات. مع الكمال من النموذج الحالي وصفنا هنا، ونحن التقرير حدوث أي نفوق. هناك العديد من الأدوات المتاحة لتحديد بنجاح وتقييم درجة CV؛ الأنسجة، المجهر الإلكتروني، تصوير الأوعية، والتصوير بالرنين المغناطيسي 5 و 6 و 11 و 12 و 15. في نموذجنا، لم يبذل أي محاولة لاستخدام أي وسائل أخرى جانبا من الأنسجة.
في السعي من أجل فهم أفضل للالفيزيولوجيا المرضية الكامنة وراء تأخر CV من النماذج في الفئران، يمكن للمرء القيام عدد لا يحصى من التطبيقات المستقبلية امتدادا للنموذجنا. الهدف الأساسي هو تطوير العوامل التي يمكن أن تحول دون وبنجاح علاج CV في البشر. من أجل القيام بذلك يجب على المرء أن يفهم التفاعلات المعقدة متعددة العوامل والعمليات التي تبدأ ويديم CV في البشر 17. مع إنشاء مناسبة النجاة نموذج الفئران SAH، يمكن التركيز على آليات المحققين على المدى القصير والطويل من بالتشنج الدماغي وتجنب تضارب بيانات نموذجية من الأضرار الدماغية الثانوية في الفئران الخلايا العصبية 2، 4، 8. ونحن نعتقد أن نموذج SAH الموصوفة هنا سوف يكون أداة مفيدة لتحقيق فهم العمليات التي تبدأ والحفاظ CV.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
ليس لدينا شيء في الكشف عن هذه الدراسة المتعلقة.
Acknowledgments
نود أن نعترف بجهود الدكتور ماري لو Vallano، قسم العلوم العصبية وعلم وظائف الأعضاء، على المدخلات لها قيمة في الكتابة لهذا المخطوط.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Male SD rats (250-300 g) | Taconic | SD-M | |
| 26 G Catheters | Webster | 8416683 | |
| 25 G Needles | Buffalo | 305122 | |
| 1 cc Syringes | Central stores | 54245 | |
| Ketamine/Xylazine cocktail | Animal Care (SUNY)* | - | |
| Betadine | Central stores | 51458 | |
| Sucrose | Sigma | S9378-1kg | |
| Paraformaldehyde | Sigma | P6148-500G | |
| Phosphate buffer solution | Fisher | BP-399-4 | |
| Surgical Table | Harvard | PY2 72-2590 | |
| OCT Compound (cryoprotection) | VWR | 25608-930 | |
| Superfrost Slides | Fisher | 12-550-15 | |
* Synthesized at Department of Laboratory Animal Care, SUNY Upstate Medical University. Add 1 cc [100 mg/ml] of Xylazine to 10 ml [100 mg/ml] of Ketamine. |
|||
References
- Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat. Stroke. 26, 1086-1091 (1995).
- Cheng, G., Wei, L., Zhi-Dan, S., Shi-Guang, Z., Xiang-Zhen, L. Atorvastatin ameliorates cerebral vasospasm and early brain injury after subarachnoid hemorrhage and inhibits caspase-dependent apoptosis pathway. BMC Neurosci. 10, 7-17 (2009).
- Jackowski, A., Crockard, A., Burnstock, G., Russell, R. R., Kristek, F. The time course of intracranial pathophysiological changes following experimental subarachnoid hemorrhage in the rat. J. Cereb. Blood Flow Metab. 10, 835-849 (1990).
- Kaoutzanis, M., Yokota, M., Sibilia, R., Peterson, J. W. Neurologic evaluation in a canine model of single and double subarachnoid hemorrhage. J. Neurosci. Methods. 50, 301-307 (1993).
- Karaoglan, A., Akdemir, O., Barut, S., Kokturk, S., Uzun, H., Tasyurekli, M., Colak, A. The effects of resveratrol on vasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage in rats. Surg. Neurol. 70, 337-343 (2008).
- Lee, J. Y., Huang, D. L., Keep, R., Sagher, O. Characterization of an improved double hemorrhage rat model for the study of delayed cerebral vasospasm. J. Neurosci. Methods. 168, 358-366 (2008).
- Lee, J. Y., Sagher, O., Keep, R., Hua, Y., Xi, G. Comparison of experimental rat models of early brain injury after subarachnoid hemorrhage. Neurosurgery. 65 (2), 331-343 (2009).
- Megyesi, J. F., Vollrath, B., Cook, D. A., Findlay, J. M. In vivo animal models of cerebral vasospasm: a review. Neurosurgery. 46, 448-460 (2000).
- Prunell, G. F., Mathiesen, T., Diemer, N. H., Svendgaard, N. A. Experimental subarachnoid hemorrhage: Subarachnoid blood volume, mortality rate, neuronal death, cerebral blood flow, and perfusion pressure in three different rat models. Neurosurgery. 52, 165-176 (2003).
- Prunell, G. F., Mathiesen, T., Svendgaard, N. A. Experimental subarachnoid hemorrhage: Cerebral blood flow and brain metabolism during the acute phase in three different models in the rat. Neurosurgery. 54, 426-436 (2004).
- Ryba, M. S., Gordon-Krajcer, W., Walski, M., Chalimoniuk, M., Chrapusta, S. J. Hydroxylamine attenuates the effects of simulated subarachnoid hemorrhage: implication for the role of oxidative stress in cerebral vasospasm. Neurol. Res. 31, 195-199 (1999).
- Satoh, M., Parent, A. D., Zhang, J. H. Inhibitory effect with antisense mitogen-activated protein kinase oligodeoxynucleotide against cerebral vasospasm in rats. Stroke. 33, 775-781 (2002).
- Suzuki, H., Kanamaru, K., Tsunoda, H., Inada, H., Kuroki, M., Sun, H., Waga, S., Tanaka, T. Heme oxygenase-1 gene induction as an intrinsic regulation against delayed cerebral vasospasm in rats. J. Clin. Invest. 104, 59-66 (1999).
- Swift, D. M., Solomon, R. A. Subarachnoid hemorrhage fails to produce vasculopathy or chronic blood flow changes in rats. Stroke. 19, 878-882 (1988).
- Vatter, H., Weidauer, S., Konczalla, J., Dettmann, E., Zimmermann, M., Raabe, A., Preibisch, C., Zanella, F., Seifert, V. Time course in the development of cerebral vasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage: clinical and neuroradiological assessment of the rat double hemorrhage model. Neurosurgery. 58, 1190-1197 (2006).
- Veelken, J. A., Laing, R. J., Jakubowski, J. The Sheffield model of subarachnoid hemorrhage in rats. Stroke. 26, 1279-1283 (1995).
- Zubkov, A. Y., Nanda, A., Zhang, J. H. Signal transduction pathways in cerebral vasospasm. Pathophysiology. 9, 47-61 (2003).
