이 프로토콜은의 고립을 설명 지방 - 파생 lipoaspirate과 골격 재생을 평가하는 4mm 중요한 크기 calvarial 결함의 생성의 stromal 세포를.
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방법 논문
Lipoaspirate에서 수확 지방 - 파생 Stromal 셀을 사용하여 임계 크기 Calvarial 결함 모델의 수리
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
Craniofacial 골격 수리 및 재생은 줄기 세포를 이용한 세포 기반의 접근 방식을 통해 드 노보 조직 형성의 약속을 제공합니다. 지방 - 파생 stromal 세포는 (ASCs) osteogenic, chondrogenic adipogenic 및 myogenic 차별화를 진행 할 수 multipotent 줄기 세포의 풍부한 소스로 입증되었습니다. 많은 연구가 세포 전달을위한 다양한 비계의 biomaterials를 이용하여 생체에서 이러한 세포의 osteogenic 가능성을 살펴 보았다. 이 입증 된 그 osteoconductive, 히드 록시 아파타이트 코팅 폴리 (락트산 - 공동 glycolic 산성) (HA-PLGA) ASCs있는 발판 시드, 중요한 크기 calvarial 결함, 자연 받아야하기위한 무능력으로 정의됩니다 결함을 활용하여 , 동물의 수명 동안 치료하면 효율적으로 강력한 뼈의 재생을 표시 할 수 있습니다. 생체 모델에서이 뼈 조직을 다시 생성하기위한 병진 접근의 기초를 보여줍니다 - 세포구성 요소 및 생물학적 매트릭스. 이 방법은 특정 조직 결함의 수리에 대한 전구 세포의 궁극적 인 임상 응용 프로그램에 대한 모델 역할을합니다.
프로토콜
1. 셀 절연 및 확장
- 모든 환자의 동의 및 실험 프로토콜은 스탠포드 대학 (Stanford University) 기관 검토위원회 (프로토콜 # 2188과 # 9999)에 의해 검토 및 승인되었습니다.
- 일반 / 국소 마취하에 선택 lipoaspiration 절차에서 인간의 피하 지방 조직을 가져옵니다.
- lipoaspirate 두 레이어 (그림 1A)이 될 것입니다. 표면에 뜨는는 가공 세포 물질의 대부분이 포함되어 있습니다. 아래 층은 대부분 stromal 세포가 어느 계층에서 수확 할 수 지방 - 유래. 생리 주입하지만, 수율은 표면에 뜨는에서 훨씬 더 있습니다.
- stromal 혈관 분율 (SVF)를 분리하려면, 1X의 동등한 볼륨 생리 (PBS)가 betadine없이 1X PBS (1 개)의 동등한 양에 이어 2.5 % betadine (X2)를 포함하는 인산염 버퍼와 깊이 lipoaspirate을 씻는다. 침전물을 세척 할 수 있습니다.
- 멸균 테를 유지하기 위해주의가공 인체 조직과 오염 등의 과정에서 chnique가 발생할 수 있습니다.
- 맨 아래 레이어를 기음과 각 세척 후에는 폐기합니다....
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토론
의 고립 때문에 지방은 - 파생 lipoaspirate에서 stromal 세포 2를,이 세포는 세포 lineages 다양한으로 차별화되었습니다. 지방 조직은 mesodermal 기원에서이므로, multipotent 지방 파생 stromal 세포 가능성이 mesodermal 계보 (Lineage)에 대한 응용 프로그램 가장 효과적입니다. 골격 조직을 생성하는 기능을 기증 autograft에 대한 사이트 및 감염, 거부, 시간 3 이상 고장 등의 합성 재료의 고유 제한 부족 주어진 특히 중요합니다. 지방 파생 stromal 세포는 수술 수확 당 상대적으로 큰 항복 4 잠재적 인 자생 multipotent 세포 라인을 제공합니다.
stromal 혈관 분수와 지방 세포 조직을 처리하는 동안, 그것은 뛰어난 살균 기술을 유지하는 것이 중요합니다. lipoa의 대량 자연 주어진 주요 문화의 오염의 큰 위험이 있습니다무균 세포 배.......
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공개 사항
관심 없음 충돌이 선언 없습니다.
감사의 글
우리는 우리의 연구의 지원과 협력 박사 조지 커먼즈 박사 딘 Vistnes 감사드립니다. 세인트 조셉 머시 병원 GME에서 지원하는이 작품은 치과와 Craniofacial 연구 기금 1 R21 DE019274-01, R01EB009689 및 RC2 DE020771-02, MTL 박사 현에 소아 재생 의료에 대한 오크 재단과 Hagey 연구소의 국립 연구소에 의해 지원됩니다 .
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 시약의 이름 : | 회사 | 카탈로그 번호 | 코멘트 (선택 사항) |
| 수확을 Lipoaspirate | |||
| PBS | Gibco | 10010-023 | |
| 행크의 균형 소금 솔루션 | Cellgro | 21-023 - CV | |
| Collagenase | 시그마 | C6885-500MG | |
| 셀 스트레이너 100 μm | BD 팔콘 | 352360 | |
| Steri-500 ML 0.22 μm 필터 | Millipore | SCGPT05RE | |
| Calvarial 결함 | |||
| Z500 브러시리스 MicromotorsUM50C | NSK | NSKZ500 | |
| 원형 나이프 4.0 mm | Xemax 외과 | CK40 |
참고문헌
- Levi, B., James, A. W., Nelson, E. R. Human adipose-derived stromal cells heal critical size mouse calvarial defect. PLoS One. 5, (2010).
- Zuk, P. A., Zhu, M., Ashjia, P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 13, 42....
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재인쇄 및 허가
