A biossíntese da matriz extracelular cartilaginosa por condrócitos podem ser afectadas pela aplicação de estímulos mecânicos. Este método descreve a técnica de aplicação de dinâmicas tensões compressivas para condrócitos encapsulados em construções em 3D e de avaliação de alterações induzidas no metabolismo dos condrócitos.
A cartilagem articular sofre de uma capacidade limitada de reparação quando danificadas por insulto mecânico ou degradada pela doença, tais como a osteoartrite. Para sanar esta deficiência, várias intervenções médicas têm sido desenvolvidos. Um tal método é a ressurgir a área danificada com o tecido de cartilagem artificial, no entanto, a engenharia de tecidos tipicamente não tem as propriedades bioquímicas e durabilidade da cartilagem nativa, questionar a sua sobrevivência a longo prazo. Isto limita a aplicação de engenharia de tecidos de cartilagem para a reparação de pequenos defeitos focais, baseando-se o tecido circundante para proteger o material implantado. Para melhorar as propriedades do tecido desenvolvido, estimulação mecânica é um método popular utilizado para aumentar a síntese de matriz extracelular cartilaginosa, assim como as propriedades mecânicas dos resultantes da engenharia de tecidos. Estimulação mecânica aplica forças ao tecido constrói análoga àquelas experimentadas in vivo. Estebaseia-se na premissa de que o ambiente mecânico, em parte, regula o desenvolvimento e manutenção de 1,2 tecido nativo. A forma mais vulgarmente aplicado de estimulação mecânica na engenharia de tecidos de cartilagem é de compressão dinâmica em estirpes fisiológicas de aproximadamente 5-20%, com uma frequência de 1 Hz 1,3. Vários estudos investigaram os efeitos de compressão dinâmica e têm mostrado que para ter um efeito positivo sobre o metabolismo dos condrócitos e a biossíntese, em última análise afectar as propriedades funcionais do tecido desenvolvido 4-8. Neste artigo, vamos ilustrar o método para estimular mecanicamente construções condrócitos-agarose hidrogel sob compressão dinâmica e analisar as alterações na biossíntese através de testes bioquímicos e radioisótopo. Este método também pode ser facilmente modificado para avaliar as alterações potencialmente induzidos em resposta celular, como resultado de estímulos mecânicos.
O método descrito para a aplicação de estímulos mecânicos controlados de hidrogéis de agarose de células-seeded permite a investigação directa sobre os efeitos de forças de compressão dinâmica sobre o metabolismo dos condrócitos. A utilização do equipamento de teste de costume em conjunto com os anéis de retenção fornecido restrição lateral para as construções, para evitar potenciais problemas de amostra de inflexão. O uso de placas mortos ponderados carregamento garantidos pelas tripulaçõ…
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ham’s F-12 | Thermo Fisher Scientific | SH3001002 | |
Collagenase A | Sigma Aldrich Ltd. | C0130 | |
Protease | Sigma Aldrich Ltd. | P5147 | |
Fetal Bovine Serum | Sigma Aldrich Ltd. | F1051 | |
Ascorbate | Sigma Aldrich Ltd. | A4034 | |
Antibiotics/antimycotics | Sigma Aldrich Ltd. | A5955 | |
HEPES | Bioshop Canada Ltd. | HEP001 | |
Trypan blue | Sigma Aldrich Ltd. | 93595 | |
Reichert Bright-Line Hemacytometer | Hausser Scientific | 1490 | |
Quant-iT PicoGreen | Invitrogen | P7589 | |
Papain from papaya latex | Sigma Aldrich Ltd. | P3125 | |
Ammonium Acetate | Sigma Aldrich Ltd. | A1542 | |
Ethyldiaminetetraacetic Acid | Sigma Aldrich Ltd. | E9884 | |
DL-Dithiothreitol | Sigma Aldrich Ltd. | 43819 | |
Low Melting Point Agarose, Type VII | Sigma Aldrich Ltd. | A9045 | |
Mesh Screen (200) Filter | Sigma Aldrich Ltd. | S4145 | |
Mach-1 Micromechanical Tester | Biomomentum Inc. | V500cs | |
Compression Loading Jig | Custom-built | Similar product could be supplied by Biomomentum Inc. | |
Falcon 24 Well Culture Plate | Thermo Fisher Scientific | B353047 | |
β-Liquid Scintillation Counter | Beckman Coulter | LS6500 | |
[3H] Proline | Perkin-Elmer | NET323005MC | |
[35S] Sulfur | Perkin-Elmer | NEX041005MC |