Summary
I djurmodellen som beskrivs i vårt nuvarande arbete, renade IgG-antikroppar mot en sträcka av 200 aminosyror (aa 757-967) av kollagen VII injiceras upprepade gånger i möss återger blåsbildning fenotypen samt histo-och immunopatologiska egenskaper karakteristiska för humant epidermolysis bullosa acquisita (EBA)
Abstract
Autoimmuna fenomen förekommer hos friska individer, men när självtolerans misslyckas kan det autoimmuna svaret resultera i särskilda patologi. Enligt Witebsky s postulat, ett av kriterierna för att diagnostisera en sjukdom som autoimmun är reproduktion av sjukdomen i försöksdjur genom passiv överföring av autoantikroppar. För epidermolysis bullosa acquisita (EBA), en prototyp organspecifik autoimmun sjukdom av hud och slemhinnor, har flera experimentella modeller nyligen etablerade. I djurmodellen som beskrivs i vårt nuvarande arbete, renade IgG-antikroppar mot en sträcka av 200 aminosyror (aa 757-967) av kollagen VII injiceras upprepade gånger i möss återger blåsbildning fenotypen samt histo-och immunopatologiska egenskaper karakteristiska för humant EBA 1. Fullt utvecklad utbredd sjukdom ses vanligen 5-6 dagar efter den första injektionen och omfattningen av sjukdomen korrelerar med dosen av den administrerade collagen VII-specifikt IgG. Den vävnadsskada (blåsbildning) i den experimentella EBA beroende på rekrytering och aktivering av granulocyter av vävnadsinrättningar bundna autoantikroppar 2, -4. Därför medger denna modell för dissektion av granulocyt-beroende inflammatorisk väg involverad i autoimmuna vävnadsskada, som modell återger endast den T-cell-oberoende fasen av efferenta autoimmunt svar. Dessutom är dess värde understryks av ett antal studier som visar blister-inducerande potentialen av autoantikroppar in vivo och undersöka mekanismen för blåsbildning i EBA 1,3, -6. Slutligen kommer denna modell kunna underlätta utvecklingen av nya anti-inflammatoriska terapier i autoantikropp-inducerade sjukdomar. Totalt sett är passiv överföring djurmodell av EBA en tillgänglig och lärorik sjukdomar modell och kommer att hjälpa forskare att analysera inte bara EBA patogenes utan att svara grundläggande biologiskt och klinisktväsentliga autoimmunitet frågor.
Protocol
1. Beredning av Patogena Antikropp
Obs: Rening och koncentrering av antikropparna skall utföras på samma dag, som antikroppar är inte förvaras i 0,1 M glycin pH 2,5-3 (elueringsbuffert) över natten (ON).
Affinitetsrening av IgG: använd 25 ml immun kaninserum:
- Tina kaninserum PÅ vid 4 ° C, blanda det 1:1 med 1 x PBS (rinnande buffert) och centrifugera den vid 1260 xg under 10 minuter vid 20 ° C. Eventuellt kan ett filtreringssteg med filterpapper inkluderas efter centrifugering i fall serum är fet.
- Samtidigt, tvätta protein G-matris fylld kolonn med 10 bäddvolymer (bäddvolym = matris volym) av 1 x PBS (rinnande buffert).
- Applicera späddes och filtrerades serum till kolonnen och inkubera 1 timme på den svängbara plattformen vid rumstemperatur (RT).
- Samla genomflödet (FT) i en 50 ml tub flacon. Kasta inte det till koncentrationenoch titer av renat IgG är känd.
- Tvätta matrisen med 5 bäddvolymer 1 x PBS och under tiden förbereda 50 ml Falcon-rör för att samla den eluerade IgG-fraktionen. Pipettera 1 ml pH neutraliserande buffert: 1 M Tris pH 10 i varje rör (annars andelen 1:20 TRIS-buffert i förhållande till mängden av eluatet som skall samlas).
- Applicera 100-150 buffert ml eluering: 0,1 M glycin pH 2,5-3 till kolonnen och samla 50 ml fraktion (er). Vänd röret 2-3x, mäta pH och lägga neutraliserande buffert tills du har nått pH 7,2-7,4.
- Samla några droppar IgG-eluat och använda elueringsbufferten som etalon mäta OD vid 280 nm. Om OD är <0,1 sluta samla.
- Regenerera proteinet G-matrisen och lagra det i enlighet med tillverkarens instruktioner.
Koncentration genom ultrafiltrering med Amicon rör:
- Tvätta Amicon Ultra (15 ml / 30kDa) ultrafiltrering rör med 1 x PBS genom centrifugering 15-20 minvid 3.220 xg vid 4 ° C. Kasta FT från Amicon.
- Fyll Amicons med 15 ml eluerade IgG fraktionen och centrifugera under 25-30 min vid 3.220 x g och 4 ° C, centrifugering tid alltid beror på proteinhalten i eluatet.
- Kasta FT och upprepa ultrafiltrering tills du har ingen eluerade fraktionen kvar.
- Tvätta den koncentrerade IgG utsträckning, två gånger, med 1 x PBS 25-30 min genom centrifugering.
- Samla "klibbiga", gulaktig antikroppslösning från Amicon filtret i en slutlig volym av 1,500-2,000 il 1 x PBS.
- Mät koncentrationen av IgG-preparat med en spektrofotometer eller NanoDrop:
Konc. (Mg / ml) = A (280 nm) x spädningsfaktor / 1,4 - Tvätta och lagra Amicons efter tillverkarens anvisningar.
2. Injektion av kollagen VII-specifikt IgG i möss
Innan du börjar själva försöksförfarandet, se till att den experimentella proprotokoll skrivs och alla material är förberedda för experimentet.
- Förbered datablad för sjukdomen poäng, ELISA, immunofluorescens (IF) analys och myeloperoxidas (MPO)-analys 4.
- Märk rören för blod och organ, cryomolds samt histologi bearbetning och inbäddning kassetter.
- De antikroppar lösningar bör beredda färska eller tinade från lager och kännetecknas med avseende på deras reaktivitet (titer av IF mikroskopi och / eller ELISA). Den sterila filtrerade antikroppar lösning bör spädas i PBS på ett sätt att den erforderliga dosen för injektion varierar mellan 250-1000 ul. Se till att du har tillräckligt med IgG för att utföra hela experimentet.
- Bered färsk antikoagulerande: heparin 20 U / ml och 8,7 mg / ml ketamin / 1,3 mg / ml xylazin blandningen för anestesi. När offra mössen har märkt rör med 3,7% beredd formaldehyd.
- Sterilisera kirurgiska instrument (skalpell, sax, fin spets och Curved forcipes) och förbereda sprutor (insulinsprutor, 1 och 2 sprutor ml), nålar, digitalkamera och extra minneskort.
Obs: Utför alla förfaranden för ketamin / xylazin eller isofluran narcotized möss Isofluran är att föredra anestesi alternativet för den dagliga hud kontroller som möss återhämta sig snabbt.. Dock när du tar bilder, 87 mg / kg ketamin och 13 mg / kg xylazin vanligtvis injiceras subkutant. För dödshjälp på ketamin / xylazin ökas doseringen till 130 mg / kg ketamin och 20 mg / kg xylazin.
- Kontrollera redan markerade djuren för deras allmänna hälsotillstånd, hud och päls utseende, väga dem och mäta deras örontjocklek (alltid hålla sig till samma öra).
- Registrera observerade värden och förändringar i den kliniska utvärderingen arket.
- Samla 20-30 pl (2-3 droppar) blod från svansvenen i en spruta innehållande samma volym av antikoagulans.
- Desinficera päls ochhuden med 80% etanol.
- Injicera antikroppslösningen subkutant i ryggen med en insulinspruta. (För vissa områden (t.ex. öronen) endast små mängder (10-50 ni) är möjligt att injiceras.)
Injektionerna bör upprepas varannan dag, 4 gånger. Balb / c och C57BL6 möss med en kroppsvikt på cirka 20 g börja utveckla sjukdomen 3-4 dagar efter den första administreringen av 400-500 upp till 750 pg / g kroppsvikt / insprutning autoantikroppar.
När avslutat experimentet:
- Sätt mössen under djup narkos genom att injicera 130 mg / kg och 20 mg / kg ketamin / xylazin subkutant, exsanguinate dem från den bakre hålvenen och skär hjärta.
- Samla organ / vävnadsprover såsom hud: svans, öron, blod och matstrupe och lägg dem i tidigare märkta och PBS eller 3,7% formaldehyd fyllda rör.
När han återvände tilllaboratorium:
- Centrifugera blodet vid 1.200 x g, 10 min vid RT för att separera plasma, överför plasma till korrekt märkta rör och lagra dem därefter.
- Bädda in hudbiopsi i Optimal Cut Temperatur medium med användning cryomolds, korrekt etikett, och lagra dem vid -80 ° C.
- Placera vävnadsproverna avsedda för histologi i de märkta inbäddning formar och hålla dem i 3,7% formaldehyd till paraffininbäddning.
3. Klinisk utvärdering av sjukdomens svårighetsgrad
Möss bör undersökas dagligen för skador på hud och slemhinnor och resultaten bör registreras med hjälp av lämpliga former. Kriterierna för tidig eutanasi är hudskador påverkar mer än 20% av kroppsytan och en viktförlust av 5-10% av den totala kroppsvikten i tre på varandra följande dagar, räknat för en sjukdom poäng av 5 (tabell 1).
- Placera musen på magen. Börja med huvudet område, nämligen med rättörat och kontrollera blåsor, erosioner, skorpa på den inre såväl som på utsidan. Fortsätt på samma sätt med vänster öra.
- Vänster och höger öga kontrolleras för tecken på erytem, alopeci, frätskador och / eller skorpa.
- Panna och nos område borstas genom nästa, fortsätter med den ventrala delen av nosen, läppen och slemhinna i munnen.
- Undersök höger ben från tassen, rör sig uppåt, växla till vänster ben. Samma förfarande med de högra och vänstra bakben.
- Borsta igenom pälsen på halsen och ryggen med en böjd fin spets pincett.
- Vänd musen på dess baksida och kontrollera den ventrala delen liksom de ventrala sidor armar och ben på samma sätt som tidigare.
- Kontrollera svansen.
- Ta bilder av relevanta kroppsdelar där möss utvecklar sjukdom. Uppmärksamhet måste ägnas åt kvaliteten och kvantiteten på bilderna.
- Beräkna de kliniska sjukdomar poäng.
4. Analys av hud och plasmaprover
- Förbered, lagra och / eller bearbeta alla insamlade vävnader enligt plan.
- Skär frysta vävnadssnitt för IF detektion av kaninantikroppar och mus komplement systemkomponenter.
- Analysera annat protein och enzyminnehåll (MPO-analys) av fryst vävnad och / eller extrakt organ.
- Sektion av paraffininbäddad vävnad och färgas med H & E för att visualisera graden av vävnadsskada.
- Analysera plasman genom ELISA, immunblot.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den passiv överföring av antigenspecifika antikroppar resulterar i en fullt utvecklad sjukdom i möss, som liknar vid kliniska, histologiska och immunopatologiska nivå den mänskliga EBA. Blåsor, skorpor, erosioner och alopeci utvecklas på öronen, nos, tassar, ben, rygg och runt ögon mössen. De första kliniska tecknen på sjukdomen kommer med största sannolikhet att visas på öronen och / eller huvud område. Deponering av specifik kanin-IgG och mus komplement C3 detekteras genom direkt Om det vid dermal epidermala föreningspunkten i kryosnitt av perilesional hud. I lesionell hud subepidermal blåsor och inflammatoriska infiltrera ses av histologi.
Men om injektionen av VII-specifika patogena kollagen antikroppar avbryts blir sjukdomsaktiviteten gradvis lägre, och inom några veckor lesioner läka. Icke desto mindre kan en viss grad av postinflammatory cikatriciell alopeci kvarstår på obestämd tid.
Characterizring av rekombinant autoantigenet (och patogena IgG)
Murin kollagen specifik IgG binder vid den dermala-epidermala förbindelsen (figur 2B). Specificiteten bedöms med immunoblot (Fig. 2C, raderna 3, 4 och 7).
Scoring sjukdomsaktivitet
Den kliniska utvärderingen av sjukdomen är baserad på ett poängsystem som vi utvecklat (Tabell 1): 0, inga lesioner, 1, mindre än 1% av hudytan, 2, 1-5% av hudytan, 3, 5 - 10% av hudytan, 4, 10-20% av hudytan påverkas. IgG mot murin kollagen VII inducerar kutana lesioner såsom erytem, alopeci, blåsor, erosioner, skorpor på öron, ögon, nos, lemmar och bål i Balb / c-möss (Figur 3).
Analys av vävnads-bundna och cirkulerande kollagen-specifika antikroppar
Deponering av kanin-IgG och mus komplement C3 är upptäcktTed i frysta, perilesional vävnadssnitt (Figur 4D och E respektive). De subepidermal blåsor och det inflammatoriska infiltrera ses i histologiska prover (Figur 4F). Cirkulerande kaninantikroppar analyseras genom ELISA (figur 5). Fryst vävnad och / eller extrakt orgel analyseras genom olika analyser för deras protein-och enzym-halt (MPO-analys).
Figur 1. Övergripande system av in vivo blåsbildning induceras genom passiv överföring av kollagen Vll-specifika antikroppar. Immuniseras med murin kollagen VII och kanin-IgG Kaniner renas från immunsera. Därefter är de specifika autoantikroppar injiceras subkutant i möss efter en injektion / blödning schema. Möss som kontrolleras för allmän hälsotillstånd och skyltar sjukdomar dagligen.
Figur 2. Karakterisering av patogena kollagen VII-IgG. Indirekt om analys av salt-split normala sektioner mushud inkuberade med pre-immunt kaninserum och med murina kollagen Vll-specifika immun kaninserum resulterar i ingen avlagring (A) och nedfall av autoantikroppar vid dermal epidermala förbindelsen (B), respektive. De specifika antikropparna känner igen antigen (er) de restes mot när immunoblotting med en uppsättning av överlappande rekombinanta murina kollagen VII fragmenten utförs (C, spår 3, 4 och 7).
Figur 3. Klinisk utvärdering av möss. IgG till murin kollagen VII inducerar kutana lesioner som håravfall, blåsor, erosioner, skorpor på öronen, ögonen, tryne, liMBS och bålen av Balb / c-möss (AD). Möss som injicerats med specifika autoantikroppar når en poäng av 4, medan de som injicerats med NRIgG eller ABS mot en likgiltig protein hade en poäng 0 (E). Den kliniska poäng beräknades enligt följande: 0, inga lesioner, 1, mindre än 1% av hudytan, 2, 1-5% av hudytan, 3, 5-10% av hudytan, 4, 10 - 20% av hudytan påverkas. Viktminskning med 5-10% av den totala kroppsvikten under tre på varandra följande dagar räknas som en extra punkt i slutresultatet.
Figur 4. Histo-och immunopatologiska fynd hos möss som injicerats med kollagen VII-IgG. Deponering av kanin-IgG (D) och mus komplement C3 (E) detekteras genom direkt Om det vid dermal epidermala föreningspunkten i kryosnitt av perilesional hud, in vivo. I lesionell hud subepidermal blåsor och inflammatoriska infiltrate ses genom histologi (F). Ingen avsättning av kanin-IgG (A), mus komplement C3 (B), inte heller är subepidermal blåsbildning ses i kontrollerna (C).
Figur 5. Immunoassay av plasma från möss injicerade med kollagen VII-specifikt IgG. Plasmanivåerna av cirkulerande kanin-antikroppar mättes med ELISA.
Tabell 1. Hudblåsor ark sjukdom poäng. Klicka här för att se större tabell .
Poängsystem:
- 0, inga lesioner;
- 1, mindre än 1% av hudens yta;
- 2, 1-5% av hudens yta;
- 3, 5-10% av huden Surface;
- 4, är 10-20% av hudytan påverkas.
Extra tips när poängsättning:
- Viktminskning med 5-10% av den totala kroppsvikten under tre på varandra följande dagar räknas som en extra punkt i slutresultatet 17.
- Erythema på öronen, runt ögonen på tassar är bara de första tecknen på en pågående immunreaktion, om inte paras ihop med blåsor eller alopeci de inte kvantifierade, bara tagit under observation.
- Märken på svansen kan vara bett eller märken slåss, så om de är närvarande från början sina försämring kanske inte nödvändigtvis bero på sjukdomen. Tänk noga väder för att räkna dem!
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den passiv överföring av autoantikroppar i försöksdjur är en stor strategi för att demonstrera sin patogenitet 7, -12. Djurmodeller erhållits genom denna metod, förutom att vara den indirekta bevis för autoimmunitet 13, tillåter undersökning av den efferenta fasen av patogena mekanismen. Den passiva överföringen modell antikroppsinducerad granulocyt-beroende hudblåsor av epidermolysis bullosa acquisita (EBA) användes för att dissekera mekanismerna för vävnadsskada vid autoimmuna dermatoser. Det framkom också som ett utsökt lärorik modell sjukdom att studera grundläggande, biologiskt och kliniskt viktiga aspekter av antikroppsmedierad organspecifika autoimmuna sjukdomar som sträcker sig långt bortom gränserna för autoimmunitet mot kollagen VII. Slutligen kan denna modell användas för att studera grundläggande biologiska och patofysiologiska processer, inklusive basalmembran biologi, granulocyt aktivering av immunkomplex end. komplementaktivering.
Även om flera experimentella inställningar, inklusive ex vivo och djurmodeller, är tillgängliga för den autoimmuna hudsjukdom EBA 14, den i särklass mest lämpade att studera granulocyt-beroende inflammatoriska vägar är passiv överföring av autoantikroppar i djur. I motsats till den ex vivo-modell, där granulocyter till huden sektionerna tidigare inkuberats med autoantikropparna 15, här infiltration av leukocyter spontant återges av mössen. Dessutom, om vi väljer att arbeta med specifika antikroppar mot antigenet i andra organismer, såsom kanin och get, undviker vi problemet med begränsad patientsera tillgänglighet och vi har också en bättre chans att reproducera komplementaktivering och granulocyt rekrytering 16.
För en framgångsrik reproduktion av granulocyt-beroende blåsbildning i passiv överföring lägetl EBA, är det viktigt att kunna tillräckligt poäng tecken på sjukdom, till att börja med erytem och ödem genom blåsor, erosioner med skorpor och håravfall. Utvärderingen av möss är en process som måste tidigare lärt. Den poängsättning av sjukdomen måste utföras av samma person, under hela experimentet och alltid utstationeras av en medarbetare eller stöd person. Utveckling och användning av ett standardiserat poängsystem för varje experimentell sjukdom är av yttersta vikt. Den medföljande poäng bladet bör ge läsaren en inblick hur huden dermatoser utvärderas i möss.
När som utförts visas i videon, kommer modellen autoantikropp-inducerad subepidermal blåsbildning i hög grad underlätta ytterligare dissektion av granulocyt-beroende inflammatoriska vägar utlöses av autoantikroppar och resulterar i vävnadsskada. Dess värde i medicinsk forskning stöds av lovande perspektiv att utveckla och testa nya antigen-sÄRSKILDA T-och B-cell riktade antiinflammatoriska terapier. Slutligen kommer det att hjälpa att besvara grundläggande biologiskt och kliniskt viktiga autoimmunitet frågor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga intressekonflikter deklareras.
Acknowledgments
Författarna bekräftar stöd av bidrag från Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 och BIOS från den medicinska fakulteten vid Freiburg University (till CS).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund Richard Herberholz GmbH Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
- Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
- Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
- Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
- Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
- Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
- Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
- Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
- Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
- Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
- Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
- Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
- Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
- Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
- Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
- Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
- Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
- Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).
