Summary
In het diermodel beschreven in onze huidige werk gezuiverde IgG antilichamen tegen een stuk van 200 aminozuren (aa 757-967) van collageen VII herhaaldelijk geïnjecteerd in muizen reproduceren blaarvorming fenotype en de histo-en immunopathologische kenmerken vertonen de menselijke epidermolysis bullosa acquisita (EBA)
Abstract
Auto-immune verschijnselen optreden bij gezonde personen, maar als zelf-tolerantie mislukt, de auto-immune reactie kan resulteren in specifieke pathologie. Volgens Witebsky postulaten, een van de criteria in de diagnose van auto-immuun ziekte als de reproductie van de ziekte bij proefdieren door passieve overdracht van autoantilichamen. Voor epidermolysis bullosa acquisita (EBA), een prototype orgaanspecifieke auto-immuunziekte van huid en slijmvliezen werden verschillende experimentele modellen onlangs. In het diermodel beschreven in onze huidige werk gezuiverde IgG antilichamen tegen een stuk van 200 aminozuren (aa 757-967) van collageen VII herhaaldelijk geïnjecteerd in muizen reproduceren blaarvorming fenotype en de histo-en immunopathologische kenmerken vertonen de menselijke EBA 1. Volwaardige wijdverspreide ziekte wordt meestal 5-6 dagen na de eerste injectie en de omvang van de ziekte correleert met de dosis van de toegediende collagen VII-specifieke IgG. De weefselbeschadiging (blaarvorming) in de experimentele EBA is afhankelijk van de rekrutering en activering van granulocyten door weefsel-gebonden antistoffen 2, -4. Daarom dit model het mogelijk om de ontleding van de granulocyt-afhankelijke inflammatoire pathway betrokken bij de auto weefselbeschadiging als model reproduceert alleen de T-cel-onafhankelijke efferente fase van de auto-immuunreactie. Verder wordt de waarde onderstreept door een aantal studies waaruit de blister-inducerende vermogen van autoantilichamen in vivo onderzoeken en het mechanisme van de blaarvorming in EBA 1,3, -6. Tenslotte zal dit model sterk de ontwikkeling van nieuwe anti-inflammatoire therapieën in autoantilichaam-geïnduceerde ziekten. Over het geheel genomen de passieve overdracht diermodel van EBA is een toegankelijke en leerzaam ziekte model en zal onderzoekers helpen om niet alleen EBA pathogenese te analyseren, maar om te antwoorden fundamenteel biologisch en klinischessentiële auto-immuniteit vragen.
Protocol
1. Voorbereiding van Pathogene Antilichaam
Opmerking: zuivering en concentratie van de antilichamen worden uitgevoerd op dezelfde dag als antilichamen niet worden opgeslagen in 0,1 M glycine pH van 2,5-3 (elutiebuffer) gedurende de nacht (ON).
Affiniteitszuivering van IgG: gebruik 25 ml immune konijnenserum:
- Ontdooi de konijnenserum ON bij 4 ° C, mengen 1:1 met 1xPBS (loopbuffer) en Centrifugeer bij 1260 g gedurende 10 min bij 20 ° C. Eventueel kan een filtratiestap met filtreerpapier worden opgenomen na centrifugeren bij het serum vet is.
- Ondertussen was de proteïne G matrix kolom gevuld met 10 bed volumes (bedvolume = matrix volume) van 1XPBS (lopende buffer).
- Breng de verdund en gefiltreerd serum aan de kolom en incubeer 1 uur op de schommelende platform bij kamertemperatuur (RT).
- Verzamel de doorstroom (FT) in een 50 ml tube Flacon. Gooi het tot de concentratieen titer van de gezuiverde IgG bekend.
- Was de matrix met 5 bedvolumes 1XPBS en in de tussentijd 50 ml Falcon buizen voor te bereiden voor het verzamelen van de geëlueerde IgG-fractie. Pipetteer 1 ml pH neutraliserende buffer: 1 M TRIS pH 10 in elke buis (anders de verhouding van 1:20 TRIS buffer opzichte van de hoeveelheid eluaat te verzamelen).
- Toepassing 100-150 ml elutiebuffer: 0,1 M glycine pH van 2,5-3 de kolom en verzamel 50 ml fractie (s). Draai de buis 2-3x, het meten van de pH-waarde en voeg neutraliserende buffergeheugen totdat u hebt bereikt de pH 7,2-7,4.
- Verzamel enkele druppels IgG eluaat en met de elutiebuffer als etalon de OD te meten bij 280 nm. Als de OD is <0,1 stop verzamelen.
- Regenereren proteïne G matrix en bewaar de instructies van de fabrikant.
Concentratie door ultrafiltratie met Amicon tubes:
- Was de Amicon Ultra (15 ml / 30 kDa) ultrafiltratie buizen met 1XPBS door centrifugeren 15-20 minbij 3.220 xg bij 4 ° C. Gooi de FT van de Amicon.
- Vul de Amicons met 15 ml geëlueerde IgG fractie en centrifugeer gedurende 25-30 min bij 3.220 xg en 4 ° C; centrifugeertijd altijd afhankelijk van het eiwitgehalte van het eluaat.
- Gooi FT en herhaal ultrafiltratie tot je hebt geen geëlueerde fractie verlaten.
- Was de geconcentreerde IgG uitgebreid, tweemaal, met 1XPBS 25-30 min. door centrifugeren.
- Verzamel de "sticky" gelige antilichaamoplossing uit de Amicon filter in een eindvolume van 1500-2000 ui 1XPBS.
- Meet de concentratie van IgG preparaat met behulp van een spectrofotometer of NanoDrop:
Conc. (Mg / ml) = A (280 nm) x verdunningsfactor / 1,4 - Wassen en opslaan Amicons de instructies van de fabrikant.
2. Injectie van collageen VII-specifieke IgG in Mice
Voor het eigenlijke experimentele procedure, zorg ervoor dat de experimentele proprotocol is geschreven en alle materialen worden voorbereid voor het experiment.
- Bereid de data sheets voor de ziekte scoren, ELISA, immunofluorescentie (IF) analyse en myeloperoxidase (MPO) test 4.
- Label de buizen voor bloed en organen, cryomolds en histologie verwerking en inbedding cassettes.
- Het antilichaam oplossingen worden bereid vers of ontdooid uit voorraden en gekarakteriseerd met betrekking tot hun reactiviteit (titer door IF microscopie en / of ELISA). De steriele gefilterde antilichaam oplossing worden verdund in PBS zodanig dat de vereiste dosis voor injectie varieert tussen 250-1000 ui. Zorg ervoor dat u voldoende IgG aan het hele experiment uit te voeren.
- Bereid anticoagulant: heparine 20 U / ml en 8,7 mg / ml ketamine / 1,3 mg / ml xylazine mengsel anesthesie. Wanneer het opofferen van de muizen buizen gelabeld met 3,7% formaldehyde bereid.
- Steriliseer chirurgische instrumenten (scalpel, schaar, fijne punt en Curved forcipes) en de voorbereiding van spuiten (insuline spuiten, 1 en 2 ml spuiten), naalden, digitale camera en extra geheugenkaart.
Let op: Voer alle procedures op ketamine / xylazine of isofluraan verdoofd muizen Isofluraan de voorkeur verdoving optie voor de dagelijkse verzorging controles, zoals muizen snel te herstellen.. Echter, bij het nemen van foto's, 87 mg / kg ketamine en 13 mg / kg xylazine gewoonlijk subcutaan geïnjecteerd. Voor euthanasie de ketamine / xylazine dosering verhoogd tot 130 mg / kg ketamine en 20 mg / kg xylazine.
- Controleer de reeds gemarkeerde dieren voor hun algemene gezondheidstoestand, de huid en de vacht voorkomen, wegen en meten hun oor dikte (altijd vasthouden aan hetzelfde oor).
- Registreer waargenomen waarden en veranderingen in de klinische evaluatie sheet.
- Verzamel 20-30 pl (2-3 druppels) bloed uit de staartader in een spuit met hetzelfde volume van antistollingsmiddel.
- Desinfecteer de vacht enhuid met 80% ethanol.
- Injecteer het antilichaam oplossing subcutaan in de rug met behulp van een insulinespuit. (Voor bepaalde plekken (zoals de oren) slechts kleine hoeveelheden (10-50 pi) die haalbaar zijn om te worden geïnjecteerd.)
Injecties moeten worden herhaald om de tweede dag, 4 keer. Balb / c en C57BL6 muizen van een lichaamsgewicht van ongeveer 20 g begint de ziekte ontwikkelen 3-4 dagen na de eerste toediening van 400-500 tot 750 ug / g lichaamsgewicht / injectie autoantilichamen.
Bij het afwerken van het experiment:
- Zet de muizen onder diepe narcose door injectie 130 mg / kg en 20 mg / kg ketamine / xylazine subcutaan, exsanguinate ze de posterior vena cava en knip het hart uit.
- Verzamel organen / weefsels monsters, zoals de huid: staart, oren, bloed en slokdarm en zet ze in eerder gelabeld en PBS of 3,7% formaldehyde gevulde buisjes.
Bij terugkeer naar delaboratorium:
- Centrifugeer het bloed op 1.200 xg, 10 min bij RT om afzonderlijke plasma, de overdracht van de plasma correct geëtiketteerd buizen en dienovereenkomstig te slaan.
- Embedden de huid biopsie in optimale cut Temperatuur medium met behulp van cryomolds, goed label en bewaar ze bij -80 ° C.
- Plaats de weefselmonsters bestemd voor histologie in het gelabelde inbedding mallen en bewaar ze op 3,7% formaldehyde tot paraffine inbedding.
3. Klinische evaluatie van ernst van de ziekte
Muizen moet dagelijks worden onderzocht op beschadigingen van huid en slijmvliezen en de bevindingen moeten worden geregistreerd met behulp van passende vormen. De criteria voor vroege euthanasie huidletsels bij meer dan 20% van het lichaamsoppervlak en een gewichtsverlies van 5-10% van het totale lichaamsgewicht in drie opeenvolgende dagen gerekend voor een ziekte score van 5 (tabel 1).
- Plaats de muis op zijn buik. Begin met het hoofd gebied, namelijk met de juisteoor en controleer blaren, erosie, korst aan de binnenzijde als aan de buitenzijde. Ga op dezelfde manier met het linker oor.
- Rechts en links de ogen worden gecontroleerd op tekenen van erytheem, alopecia, erosies en / of korst.
- Voorhoofd en snuit gebied worden geborsteld door volgende, verder te gaan met het ventrale deel van de snuit, lippen en het slijmvlies van de mond.
- Onderzoek de rechter voorpoot vanaf de poot, het verplaatsen naar boven, naar het linker voorpoot. Dezelfde procedure met de rechter en linker achterpoten.
- Borstel door de vacht op de hals en rug met een gebogen fijne punt tang.
- Draai de muis op de rug en controleer de ventrale deel en de ventrale kanten van de benen op dezelfde manier als eerder.
- Controleer de staart.
- Neem foto's van de relevante delen van het lichaam waar de muizen ontwikkelen ziekte. Er moet aandacht worden besteed aan de kwaliteit en kwantiteit van de foto's.
- Bereken de klinische ziekte scores.
4. Analyse van de Huid en plasmamonsters
- Bereid, opslaan en / of verwerken van alle verzamelde weefsels volgens het plan.
- Snijd bevroren weefsel secties voor IF detectie van konijn antilichamen en muis complement systeem componenten.
- Analyse van de verschillende eiwitten en enzymgehalte (MPO assay) van bevroren weefsel en / of orgaan extracten.
- Gedeelte paraffine ingebed weefsel en kleuren met H & E de mate van weefselbeschadiging te visualiseren.
- Analyseren plasma door ELISA, immunoblot.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
De passieve overdracht van antigeen specifieke antilichamen resulteert in een full blown ziekte in muizen, die lijkt op de klinische, histologische en immunopathologische niveaus van de menselijke EBA. Blaren, korsten, erosies en alopecia ontwikkelen op de oren, snuit, poten, benen, rug en rond de ogen van de muizen. De eerste klinische tekenen van de ziekte zal waarschijnlijk op de oren en / of hoofdgebied. Depositie van specifieke konijn IgG, en de muis complement C3 wordt gedetecteerd door directe IF op de huid epidermale verbinding in vriescoupes van perilesionale huid. In letselhuid subepidermale blaren en ontstekingsinfiltraat worden gezien door histologie.
Indien echter de injectie van pathogene collageen VII-specifieke antilichamen wordt stopgezet, de ziekte effect geleidelijk lager, en binnen enkele weken genezen laesies. Toch kan een zekere mate van post-cicatricial alopecia voor onbepaalde tijd blijven bestaan.
Characterizatie van de recombinant autoantigeen (en pathogene IgG)
Murine collageen specifieke IgG bindt aan het dermale-epidermale grensvlak (Figuur 2B). De specificiteit wordt bepaald door immunoblot (fig. 2C, lanen 3, 4 en 7).
Scoren ziekte-activiteit
De klinische evaluatie van de ziekte is gebaseerd op een scoringssysteem we ontwikkeld (tabel 1): 0, geen laesies, 1, minder dan 1% van het huidoppervlak, 2, 1-5% van het huidoppervlak, 3, 5 - 10% van het huidoppervlak, 4, 10-20% van het huidoppervlak wordt beïnvloed. IgG tegen muizen collageen VII induceert cutane laesies, zoals erytheem, alopecia, blaren, erosies, korsten op de oren, ogen, snuit, ledematen en de romp van Balb / c muizen (figuur 3).
Analyse van weefsel-gebonden en circulerende collageen-specifieke antilichamen
Depositie van konijn IgG, en de muis aanvulling C3 zijn detectieted in bevroren perilesionale weefselsecties (Figuur 4D en E respectievelijk). De subepidermale blisters en ontstekingsinfiltraat worden gezien in histologische monsters (figuur 4F). Circulerende konijnenantilichamen geanalyseerd door ELISA (figuur 5). Bevroren weefsel en / of orgaan extracten geanalyseerd door verschillende assays voor hun proteïne en enzymgehalte (MPO assay).
Figuur 1. Opzet van de in vivo blaarvorming geïnduceerd door de passieve overdracht van collageen VII-specifieke antilichamen. Konijnen worden geïmmuniseerd met collageen VII muizen en konijnen IgG wordt gezuiverd uit de immune sera. Vervolgens worden de specifieke autoantilichamen subcutaan geïnjecteerd in muizen na een injectie / bloeding schema. Muizen worden gecontroleerd voor de algemene gezondheidstoestand en ziekte tekenen dagelijks.
Figuur 2. Karakterisering van pathogene collageen VII-specifieke IgG. Indirect wanneer analyse van zout-split normale muis huidsecties geïncubeerd met pre-immuun konijnenserum en murine collageen VII-specifieke immuun konijnenserum resulteert in geen afzetting (A) en afzetting van auto-antilichamen bij het dermale epidermale grensvlak (B), respectievelijk. De specifieke antilichamen herkennen het antigeen (s) die werden opgewekt tegen bij immunoblot met een set van overlappende recombinant murine collageen VII fragmenten uitgevoerd (C, lanen 3, 4 en 7).
Figuur 3. Klinische evaluatie van muizen. IgG aan murine collageen VII induceert cutane laesies, zoals alopecia, blaren, erosies, korsten op de oren, ogen, snuit, limbs en de stam van Balb / c muizen (AD). Muizen geïnjecteerd met specifieke autoantilichamen komen tot een score van 4, terwijl degenen geïnjecteerd met NRIgG of Abs tegen een onverschillige eiwit had een score van 0 (E). De klinische score werd berekend als volgt: 0, geen laesies, 1, minder dan 1% van het huidoppervlak, 2, 1-5% van het huidoppervlak, 3, 5-10% van het huidoppervlak, 4, 10 - 20% van het huidoppervlak wordt beïnvloed. Gewichtsverlies van 5-10% van het totale lichaamsgewicht gedurende drie opeenvolgende dagen geldt als een extra punt in de eindscore.
Figuur 4. Histo-en immunopathologische bevindingen in muizen geïnjecteerd met collageen VII-specifieke IgG. Deposition of konijn IgG (D) en muis complement C3 (E) wordt gedetecteerd door directe IF op de huid epidermale grensvlak in cryosecties van perilesionale huid in vivo. In letselhuid subepidermale blaren en inflammatoire infiltrate wordt door histologie (F). Geen afzetting van konijn IgG (A), muis complement C3 (B), noch subepidermale blaarvorming gezien in de controles (C).
Figuur 5. Immunoassay van plasma uit muizen geïnjecteerd met collageen VII-specifieke IgG. Plasmaspiegels van circulerende konijn antilichamen werden gemeten met ELISA.
Tabel 1. Huid blarenziekte scoreblad. Klik hier om een grotere tafel te bekijken .
Scoren systeem:
- 0, geen laesies;
- 1, minder dan 1% van het huidoppervlak;
- 2, 1-5% van het huidoppervlak;
- 3, 5-10% van de huid surface;
- 4, 10-20% van het huidoppervlak aangetast.
Extra tips bij het scoren van:
- Gewichtsverlies van 5-10% van het totale lichaamsgewicht gedurende drie opeenvolgende dagen geldt als een extra punt in de eindscore 17.
- Erythema op de oren, rond de ogen op poten zijn slechts de eerste tekenen van een doorlopend immuunreactie, indien niet gecombineerd met blaren of alopecia ze niet gekwantificeerd, maar die op grond van observatie.
- Marks op de staart kan beet of bestrijding merktekens, dus als ze aanwezig zijn vanaf het begin de verslechtering wellicht niet noodzakelijkerwijs door de ziekte. Denk goed na het weer naar ze te tellen!
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De passieve overdracht van antistoffen in proefdieren is een belangrijke benadering voor het demonstreren van hun pathogeniciteit 7, -12. Diermodellen verkregen door deze methode, naast het feit dat het indirect bewijs voor autoimmuniteit 13, zodat het onderzoek van de efferente fase van de pathogenese. De passieve transfer model van antilichaam-geïnduceerde granulocyt-afhankelijke blaarvorming van epidermolysis bullosa acquisita (EBA) werd gebruikt om de mechanismen van weefselschade in autoimmune dermatosen ontleden. Het bleek ook, als een prachtig leerzaam modelziekte de fundamentele, biologisch en klinisch cruciale aspecten van antilichaam-gemedieerde orgaan-specifieke auto-immuunziekten die zich uitstrekken tot ver buiten de grenzen van auto-immuniteit tegen collageen VII bestuderen. Tenslotte kan dit model worden gebruikt om fundamentele biologische en pathofysiologische processen, inclusief basaalmembraan biologie, granulocyt activering door immune complexen studie eend complement activatie.
Hoewel verschillende experimentele instellingen, waaronder ex vivo en diermodellen beschikbaar zijn voor de auto-immune huidziekte EBA 14, veruit het meest geschikt om de granulocyt-afhankelijke ontstekingsreacties studie is de passieve overdracht van auto-antilichamen in dieren. In tegenstelling tot de ex vivo model, waarbij de granulocyten worden toegevoegd aan de huidsecties vooraf geïncubeerd met de auto-antilichamen 15, hier de infiltratie van leukocyten spontaan weergegeven door de muizen. Bovendien, als we ervoor kiezen om te werken met specifieke antilichamen opgewekt tegen het antigeen in andere organismen, zoals konijn en geit, vermijden we het probleem van de beperkte patiëntensera beschikbaarheid en we hebben ook een betere kans om complement activatie en granulocyten werving 16 reproduceren.
Voor de succesvolle reproductie van granulocyt-afhankelijke blaarvorming in de passieve transfer model EBA, is het belangrijk om adequaat kunnen scoren de ziektesymptomen, beginnend met erytheem en oedeem met blaren, erosies met korsten en alopecia. De evaluatie van muizen is een proces dat moet vooraf worden geleerd. De scoring van de ziekte moet worden uitgevoerd door dezelfde persoon, gedurende het experiment en altijd gedetacheerd door een medewerker of steun persoon. De ontwikkeling en het gebruik van een gestandaardiseerd scoresysteem voor elke experimentele ziekte is van het grootste belang. De bijgevoegde scoreblad moet de lezer een inzicht hoe de huid dermatosen worden geëvalueerd in muizen.
Wanneer uitgevoerd zoals in de video, wordt het model van auto-antilichaam geïnduceerde subepidermale blaarvorming sterk de verdere ontleding van de granulocyt-afhankelijke ontstekingsreacties veroorzaakt door auto-antilichamen en als gevolg weefselbeschadiging. De waarde ervan in medisch onderzoek wordt ondersteund door de veelbelovende perspectief van ontwikkelen en testen van nieuwe antigen-siedere specifieke T en B cel gerichte anti-inflammatoire therapieën. Tot slot zal het helpen bij het beantwoorden van fundamentele biologisch en klinisch essentiële auto-immuniteit vragen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Geen belangenconflicten verklaard.
Acknowledgments
De auteurs erkennen ondersteuning door subsidies van de Deutsche Forschungsgemeinschaft SI-1281/4-1 en BIOSS van de Medische Faculteit van de universiteit van Freiburg (CS).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund Richard Herberholz GmbH Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
- Sitaru, C., Mihai, S., Otto, C., Chiriac, M. T., Hausser, I., Dotterweich, B. Induction of dermal-epidermal separation in mice by passive transfer of antibodies specific to type VII collagen. J. Clin. Invest. 115, 870-878 (2005).
- Kopecki, Z., Arkell, R. M., Strudwick, X. L., Hirose, M., Ludwig, R. J., Kern, J. S. Overexpression of the Flii gene increases dermal-epidermal blistering in an autoimmune ColVII mouse model of epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 225, 401-413 (2011).
- Kulkarni, S., Sitaru, C., Jakus, Z., Anderson, K. E., Damoulakis, G., Davidson, K. PI3Kβ plays a critical role in neutrophil activation by immune complexes. Sci. Signal. 4, 23-23 (2011).
- Chiriac, M. T., Roesler, J., Sindrilaru, A., Scharffetter-Kochanek, K., Zillikens, D., Sitaru, C. NADPH oxidase is required for neutrophil-dependent autoantibody-induced tissue damage. J. Pathol. 212, 56-65 (2007).
- Mihai, S., Chiriac, M. T., Takahashi, K., Thurman, J. M., Holers, V. M., Zillikens, D. The alternative pathway of complement activation is critical for blister induction in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Immunol. 178, 6514-6521 (2007).
- Sesarman, A., Sitaru, A. G., Olaru, F., Zillikens, D., Sitaru, C. Neonatal Fc receptor deficiency protects from tissue injury in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Mol. Med. 86, 951-959 (2008).
- Huang, X. R., Holdsworth, S. R., Tipping, P. G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis. J. Am. Soc. Nephrol. 8, 1101-1108 (1997).
- Matsumoto, I., Staub, A., Benoist, C., Mathis, D. Arthritis provoked by linked T and B cell recognition of a glycolytic enzyme. Science. 286, 1732-1735 (1999).
- Oswald, E., Sesarman, A., Franzke, C., Wölfle, U., Bruckner-Tuderman, L., Jakob, T. The flavonoid luteolin inhibits Fcγ-dependent respiratory burst in granulocytes, but not skin blistering in a new model of pemphigoid in adult mice. PLoS One. 7, e31066 (2012).
- Liu, Z., Diaz, L. A., Troy, J. L., Taylor, A. F., Emery, D. J., Fairley, J. A. A passive transfer model of the organ-specific autoimmune disease, bullous pemphigoid, using antibodies generated against the hemidesmosomal antigen, BP180. J. Clin. Invest. 92, 2480-2488 (1993).
- Anhalt, G. J., Labib, R. S., Voorhees, J. J., Beals, T. F., Diaz, L. A. Induction of pemphigus in neonatal mice by passive transfer of IgG from patients with the disease. N. Engl. J. Med. 306, 1189-1196 (1982).
- Toyka, K. V., Brachman, D. B., Pestronk, A., Kao, I. Myasthenia gravis: passive transfer from man to mouse. Science. 190, 397-399 (1975).
- Rose, N. R., Bona, C. Defining criteria for autoimmune diseases (Witebsky's postulates revisited. Immunol. Today. 14, 426-430 (1993).
- Sitaru, C. Experimental models of epidermolysis bullosa acquisita. Exp. Dermatol. 16, 520-531 (2007).
- Sitaru, C., Kromminga, A., Hashimoto, T., Bröcker, E. B., Zillikens, D. Autoantibodies to type VII collagen mediate Fcgamma-dependent neutrophil activation and induce dermal-epidermal separation in cryosections of human skin. Am. J. Pathol. 161, 301-311 (2002).
- Sesarman, A., Oswald, E., Chiriac, M. T., Csorba, K., Vuta, V., Feldrihan, V. Why human pemphigoid autoantibodies do not trigger disease by the passive transfer into mice. Immunol. Lett. , (2012).
- Ishii, N., Recke, A., Mihai, S., Hirose, M., Hashimoto, T., Zillikens, D. Autoantibody-induced intestinal inflammation and weight loss in experimental epidermolysis bullosa acquisita. J. Pathol. 224, 234-244 (2011).
