Granulocyt-afhankelijke auto-antilichaam-geïnduceerde blaarvorming

Samenvatting

In het diermodel beschreven in onze huidige werk gezuiverde IgG antilichamen tegen een stuk van 200 aminozuren (aa 757-967) van collageen VII herhaaldelijk geïnjecteerd in muizen reproduceren blaarvorming fenotype en de histo-en immunopathologische kenmerken vertonen de menselijke epidermolysis bullosa acquisita (EBA) ¹.

Samenvatting

Auto-immune verschijnselen optreden bij gezonde personen, maar als zelf-tolerantie mislukt, de auto-immune reactie kan resulteren in specifieke pathologie. Volgens Witebsky postulaten, een van de criteria in de diagnose van auto-immuun ziekte als de reproductie van de ziekte bij proefdieren door passieve overdracht van autoantilichamen. Voor epidermolysis bullosa acquisita (EBA), een prototype orgaanspecifieke auto-immuunziekte van huid en slijmvliezen werden verschillende experimentele modellen onlangs. In het diermodel beschreven in onze huidige werk gezuiverde IgG antilichamen tegen een stuk van 200 aminozuren (aa 757-967) van collageen VII herhaaldelijk geïnjecteerd in muizen reproduceren blaarvorming fenotype en de histo-en immunopathologische kenmerken vertonen de menselijke EBA ^1. Volwaardige wijdverspreide ziekte wordt meestal 5-6 dagen na de eerste injectie en de omvang van de ziekte correleert met de dosis van de toegediende collagen VII-specifieke IgG. De weefselbeschadiging (blaarvorming) in de experimentele EBA is afhankelijk van de rekrutering en activering van granulocyten door weefsel-gebonden antistoffen ^{2, -4.} Daarom dit model het mogelijk om de ontleding van de granulocyt-afhankelijke inflammatoire pathway betrokken bij de auto weefselbeschadiging als model reproduceert alleen de T-cel-onafhankelijke efferente fase van de auto-immuunreactie. Verder wordt de waarde onderstreept door een aantal studies waaruit de blister-inducerende vermogen van autoantilichamen in vivo onderzoeken en het mechanisme van de blaarvorming in EBA ^{1,3, -6.} Tenslotte zal dit model sterk de ontwikkeling van nieuwe anti-inflammatoire therapieën in autoantilichaam-geïnduceerde ziekten. Over het geheel genomen de passieve overdracht diermodel van EBA is een toegankelijke en leerzaam ziekte model en zal onderzoekers helpen om niet alleen EBA pathogenese te analyseren, maar om te antwoorden fundamenteel biologisch en klinischessentiële auto-immuniteit vragen.

Protocol

1. Voorbereiding van Pathogene Antilichaam

Opmerking: zuivering en concentratie van de antilichamen worden uitgevoerd op dezelfde dag als antilichamen niet worden opgeslagen in 0,1 M glycine pH van 2,5-3 (elutiebuffer) gedurende de nacht (ON).

Affiniteitszuivering van IgG: gebruik 25 ml immune konijnenserum:

1. Ontdooi de konijnenserum ON bij 4 ° C, mengen 1:1 met 1xPBS (loopbuffer) en Centrifugeer bij 1260 g gedurende 10 min bij 20 ° C. Eventueel kan een filtratiestap met filtreerpapier worden opgenomen na centrifugeren bij het serum vet is.
2. Ondertussen was de proteïne G matrix kolom gevuld ....

Resultaten

De passieve overdracht van antigeen specifieke antilichamen resulteert in een full blown ziekte in muizen, die lijkt op de klinische, histologische en immunopathologische niveaus van de menselijke EBA. Blaren, korsten, erosies en alopecia ontwikkelen op de oren, snuit, poten, benen, rug en rond de ogen van de muizen. De eerste klinische tekenen van de ziekte zal waarschijnlijk op de oren en / of hoofdgebied. Depositie van specifieke konijn IgG, en de muis complement C3 wordt gedetecteerd door directe IF op de huid epide.......

Discussie

De passieve overdracht van antistoffen in proefdieren is een belangrijke benadering voor het demonstreren van hun pathogeniciteit ^{7, -12.} Diermodellen verkregen door deze methode, naast het feit dat het indirect bewijs voor autoimmuniteit ^13, zodat het onderzoek van de efferente fase van de pathogenese. De passieve transfer model van antilichaam-geïnduceerde granulocyt-afhankelijke blaarvorming van epidermolysis bullosa acquisita (EBA) werd gebruikt om de mechanismen van weefselschade in autoimmune.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Naam van het reagens	Vennootschap	Catalogusnummer	Reacties
recombinant antigen			De plasmiden coderen voor de recombinante vormen van murine collageen VII zijn bij de desbetreffende auteur.
immuun konijnenserum	www.eurogentec.com		We hadden New Zealand White konijnen geïmmuniseerd met 200 ug antigeen, 3 keer op 2 weken. Hiervoor hebben we gebruik gemaakt van de diensten van Eurogentec SA, België.
Proteïne G agarose	Roche Applied Science	11243233001
Balb / c muizen	Charles River Laboratories
Oktober verbinding, Tissue-Tek	Sakura Finetek	4583	LGO, optimale snijtemperatuur
Cryomold standaard	Sakura Finetek	4557	25 mm x 20 mm x 5 mm
Cryomold intermediaire	Sakura Finetek	4566	15 mm x 15 mm x 5 mm
Uni-Link-Einbettkassette	R. Langenbrinck	09 tot 0503	Histologie verwerking en inbedcassettes
Spezial-Tatowierfarbe Schwarz	H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co KG	71492000	tatoeëren pasta
Tatowierzange TZ1	Ebeco E. Becker & Co GmbH		tatoeëren apparaat
Heparine	Carl Roth GmbH & Co	7692,1
Formaldehyde 37%	Carl Roth GmbH & Co	7386
Ketamine hydrochloride	Sigma-Aldrich Chemie GmbH	K2753-1G
Xylazinehydrochloride	Sigma-Aldrich Chemie GmbH	X1251-1G
steriele PBS	Biochrom	L182-50
digitale camera	Nikon	Coolpix 5400
Injectiespuit aangedreven filtereenheid 0,45 urn	Millipore
Caliper	Mitutoyo 7309	1667338	Farnell (distributeur)
ziekte scoreblad			Bijvoorbeeld kastsed