Granulocytes-dépendante boursouflures la peau induite par autoanticorps

Résumé

Dans le modèle animal décrit dans notre travail actuel, purifié des anticorps IgG contre un tronçon de 200 acides aminés (aa 757-967) de collagène VII sont injectés à plusieurs reprises dans des souris reproduisant le phénotype des cloques ainsi que les caractéristiques de l'histo-et immunopathologiques caractéristiques pour la santé humaine l'épidermolyse bulleuse acquise (EBA) ¹.

Résumé

Phénomènes auto-immunes surviennent chez des personnes en bonne santé, mais quand la tolérance au soi échoue, la réponse auto-immune peut entraîner une pathologie spécifique. Selon Witebsky postulats, l'un des critères de diagnostic d'une maladie auto-immune est que la reproduction de la maladie chez les animaux de laboratoire par le transfert passif d'autoanticorps. Pour l'épidermolyse bulleuse acquise (EBA), un prototype spécifique d'organe maladie auto-immune de la peau et des muqueuses, plusieurs modèles expérimentaux ont été récemment mis en place. Dans le modèle animal décrit dans notre travail actuel, purifié des anticorps IgG contre un tronçon de 200 acides aminés (aa 757-967) de collagène VII sont injectés à plusieurs reprises dans des souris reproduisant le phénotype des cloques ainsi que les caractéristiques de l'histo-et immunopathologiques caractéristiques pour la santé humaine EBA ^1. Véritable maladie répandue est généralement considérée 5-6 jours après la première injection et l'étendue de la maladie est en corrélation avec la dose administrée de la collagen VII IgG spécifiques. Les lésions tissulaires (formation de bulles) dans le groupe expérimental EBA est en fonction sur le recrutement et l'activation des granulocytes par des tissus assortis autoanticorps ^{2, -4.} Par conséquent, ce modèle permet la dissection de la voie de granulocytes-dépendante inflammatoire impliquée dans les lésions tissulaires auto-immunes, comme le modèle ne reproduit que la cellule T-indépendante phase de la réponse auto-immune efférente. De plus, sa valeur est soulignée par un certain nombre d'études démontrant le potentiel blister induisant des anticorps in vivo et étudier le mécanisme de la formation de bulles dans l'EBA ^{1,3, -6.} Enfin, ce modèle va grandement faciliter le développement de nouvelles thérapies anti-inflammatoires dans les maladies provoquées par des auto-anticorps. Dans l'ensemble, le modèle de transfert passif des animaux de l'EBA est un modèle de la maladie accessible et instructif et aidera les chercheurs à analyser non seulement la pathogenèse EBA mais pour répondre fondamentale biologiquement et cliniquementdes questions d'auto-immunité essentielles.

Protocole

1. Préparation de l'anticorps pathogène

Remarque: La purification et la concentration des anticorps doit être effectuée le même jour, que les anticorps ne doivent pas être stockés dans la glycine 0,1 M pH 2,5 à 3 (tampon d'élution) pendant la nuit (ON).

La purification par affinité des IgG: utiliser 25 ml de sérum de lapin immunisé:

1. Décongeler le sérum de lapin ON à 4 ° C, le mélanger 1:1 avec 1xPBS (tampon de migration) et centrifuger à 1260 xg pendant 10 min à 20 ° C. Éventuellement, une étape de filtrage avec du papier filtre pourraient être inclus après centrifugation dans le cas où le s....

Résultats

Le transfert passif d'anticorps spécifiques d'antigènes résultats dans une maladie épanouie chez la souris, ressemblant à des niveaux cliniques, histologiques et immunopathologiques l'ABE humaine. Cloques, de croûtes, des érosions et alopécie se développer sur les oreilles, le museau, les pattes, les jambes, le dos et autour des yeux des souris. Les premiers signes cliniques de la maladie sera très probablement apparaître dans les oreilles et / ou de la zone tête. Le dépôt de spécifique IgG de lapin, la sour.......

Discussion

Le transfert passif d'anticorps chez des animaux de laboratoire est une approche importante pour démontrer leur pathogénicité ^{7, -12.} Les modèles animaux obtenus grâce à cette méthode, en plus d'être l'une preuve indirecte de l'auto-immunité ^13, permettre à l'enquête de la phase efférente du mécanisme pathogène. Le modèle de transfert passif d'anticorps induite par des granulocytes-dépendante la peau des cloques sur l'épidermolyse bulleuse acquise (EBA) a été utilisé pou.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom du réactif	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
antigène recombinant			L'encodage des plasmides pour les formes recombinantes de murin du collagène VII sont disponibles auprès de l'auteur correspondant.
sérum de lapin immunisé	www.eurogentec.com		Nous avons eu lapins New Zealand White immunisées avec 200 pg d'antigène, 3 fois à 2 semaines d'intervalle. À cette fin, nous avons utilisé les services d'Eurogentec SA, Belgique.
Protéine G agarose	Roche Applied Science	11243233001
Souris Balb / c	Charles River Laboratories
Composé OCT, Tissue-Tek	Sakura Finetek	4583	PTOM, la température de coupe optimale
Cryomold norme	Sakura Finetek	4557	25 mm x 20 mm x 5 mm
Cryomold intermédiaire	Sakura Finetek	4566	15 mm x 15 mm x 5 mm
Uni-Link-Einbettkassette	R. Langenbrinck	09-0503	Traitement de l'histologie et de cassettes d'encastrement
Spezial-Tatowierfarbe Schwarz	H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG	71492000	tatouage pâte
Tatowierzange TZ1	Ebeco E. Becker & Co GmbH		tatouage dispositif
L'héparine	Carl Roth GmbH & Co.	7692.1
Formaldéhyde 37%	Carl Roth GmbH & Co.	7386
Le chlorhydrate de kétamine	Sigma-Aldrich Chemie GmbH	K2753-1G
Chlorhydrate de xylazine	Sigma-Aldrich Chemie GmbH	X1251-1G
PBS stérile	Biochrom	L182-50
appareil photo numérique	Nikon	Coolpix 5400
Seringue entraînée unité de filtre de 0,45 um	Millipore
Pied à coulisse	Mitutoyo 7309	1667338	Farnell (distributeur)
feuille de pointage maladie			Par exemple enclosed