Гранулоцитов зависит от аутоантител вызванных кожи пузырей

Kinga Csorba; Sebastian Sitaru; Cassian Sitaru

doi:10.3791/4250

Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Гранулоцитов зависит от аутоантител вызванных кожи пузырей

10.1K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/4250

⸱

12 октября 2012 г.

Kinga Csorba¹ , Sebastian Sitaru² , Cassian Sitaru¹^,³

¹Department of Dermatology, University of Freiburg , ²Kepler High School Freiburg, ³Centre for Biological Signalling Studies (BIOSS), University of Freiburg

В этой статье

Краткое содержание

В животном модели, описанной в нашей нынешней работы, очищенный IgG антитела против участке 200 аминокислот (аа 757-967) коллагена VII вводят повторно мышам воспроизводя пузырей фенотипа, а также гисто-и иммунопатологические особенности, характерные для человека эпидермолиз буллезной acquisita (EBA)¹.

Аннотация

Аутоиммунные явления происходят у здоровых людей, но когда аутотолерантность не удается, аутоиммунный ответ может привести к конкретной патологии. По Witebsky постулатов, один из критериев в диагностике заболевания, аутоиммунные является воспроизводство заболевания у подопытных животных по пассивной передачи антител. Для эпидермолиз буллезной acquisita (EBA), прототипического орган-специфических аутоиммунных заболеваний кожи и слизистых оболочек, несколько экспериментальных моделей были недавно установлены. В животном модели, описанной в нашей нынешней работы, очищенный IgG антитела против участке 200 аминокислот (аа 757-967) коллагена VII вводят повторно мышам воспроизводя пузырей фенотипа, а также гисто-и иммунопатологические особенности, характерные для человека EBA ^1. Полномасштабную распространенное заболевание обычно наблюдается через 5-6 дней после первой инъекции и степени заболевания коррелирует с дозой вводится сollagen VII конкретных IgG. Повреждения ткани (образование пузырей) в экспериментальном ЕВА, в зависимости от набора и активацию гранулоцитов тканью связанных аутоантител ^{2, -4.} Таким образом, эта модель позволяет для вскрытия гранулоцитов зависит от воспалительных пути, участвующие в аутоиммунного повреждения тканей, так как модель воспроизводит только Т-клеток независимых этапа эфферентной аутоиммунный ответ. Кроме того, его значение указывается ряд исследований, демонстрирующих блистерная вызывающие потенциал аутоантител в естественных условиях и исследования механизма формирования пузыря в ^{1,3 EBA, -6.} Наконец, эта модель будет в значительной степени способствовать развитию новых противовоспалительной терапии в аутоантител-индуцированных заболеваний. В целом, пассивная модель животного передаче EBA является доступным и поучительные модели заболевания и поможет исследователям анализировать не только EBA патогенеза, но ответить на фундаментальные биологически и клиническисущественные вопросы аутоиммунных заболеваний.

Протокол

1. Подготовка патогенные антитела

Примечание: Очистка и концентрация антител должны быть выполнены в тот же день, как антитела не будут храниться в 0,1 М глицин, рН 2,5-3 (буфера элюирования) в течение ночи (ON).

Affinity очистки IgG: используйте 25 мл иммунной сыворотки кролика:

Оттепель сывороткой кролика ON при 4 ° С, смешать 1:1 с 1xPBS (работает буфер) и центрифугируют ее при 1260 х г в течение 10 мин при 20 ° C. При необходимости фильтрации шаг с фильтровальной бумаги могут быть включены после центрифугирования в случае жирной сыворотки.
Между тем, мыть белка G матрица заполнена коло....