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Behavior

के stereotactic इंजेक्शन MicroRNA-व्यक्त माउस हिप्पोकैंपस सीए 1 क्षेत्र को Lentiviruses और व्यवहार परिणाम का आकलन

Published: June 10, 2013 doi: 10.3791/50170

Summary

MicroRNAs मस्तिष्क संरचना और समारोह में महत्वपूर्ण भूमिका है. यहाँ हम अधिक अभिव्यक्ति एक इंजीनियर miRNA व्यक्त lentivirus के stereotactic इंजेक्शन का उपयोग कर हिप्पोकैम्पस miRNA के लागू करने के लिए एक विधि का वर्णन है. इस दृष्टिकोण का आकलन करने के लिए एक अपेक्षाकृत तेजी से रास्ते के रूप में काम कर सकते हैं

Introduction

तंत्रिका तंत्र के कामकाज में विशेष miRNAs की भूमिका हाल ही में कई अध्ययनों में lentiviral इंजेक्शन द्वारा चुनौती दी गई है. MiRNAs अन्तर्ग्रथन संरचना 1, synaptogenesis 2 और synapse remodeling और रखरखाव 3 को बनाए रखने और फिर से आकार देने के लिए महत्वपूर्ण होना पाया गया है. ये अध्ययन दृढ़ता को आकार देने के लिए दोनों में और तंत्रिका तंत्र, संज्ञानात्मक समारोह के मुख्य उत्पादन को बनाए रखने में multileveled विनियामक प्रभाव के माध्यम से, miRNAs लगे हुए हैं कि सुझाव. कृंतक मस्तिष्क में विशिष्ट क्षेत्रों में lentivirus कणों की stereotactic इंजेक्शन अन्तर्ग्रथन आकारिकी और neuronal गतिविधि में परिवर्तन के लिए खोज में सक्षम बनाता है, और 4,5 से अधिक व्यक्त टेप के कार्यात्मक महत्व स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. MiRNA व्यक्त lentiviruses के साथ अच्छी तरह से परिभाषित मस्तिष्क क्षेत्रों में न्यूरॉन्स की प्रत्यक्ष संक्रमण उम्र बढ़ने, मस्तिष्क संबंधी विकार और neurodegeneration की पढ़ाई में शामिल किया जा सकता है, miRNA का अध्ययनएस व्यवहार विनियमन 6-8 के दायरे में अब तक कम उन्नत राज्य में कर रहे हैं, और के stereotactic इंजेक्शन miRNA व्यक्त व्यवहार परीक्षण द्वारा पीछा lentivirus कणों ऐसे प्रयोजनों के लिए उपयोगी हो सकता है. से अधिक या कम अभिव्यक्ति उत्प्रेरण के लिए एक काफी अधिक श्रमसाध्य विधि आनुवंशिक तोड़े में या पीटा चूहों इंजीनियर शामिल है. जेनेटिक सिस्टम आगे अभिव्यक्ति पर सशर्त और अस्थायी नियंत्रण (जैसे Cre पर Lox, Tet सिस्टम) के लिए अनुमति दे सकते हैं, लेकिन ये शायद ही इंजेक्शन प्रक्रिया के स्थानिक विशिष्टता प्रदान करते हैं और leakiness की एक निश्चित राशि लगभग हमेशा वहाँ है. इसके अलावा, इंजीनियरिंग प्रक्रियाओं सर्जरी की आवश्यकता नहीं है और अपेक्षाकृत अच्छी reproducibility के साथ प्रयोगशालाओं में इस्तेमाल किया जा सकता है, तथापि, वे धीमी गति से कर रहे हैं और बहुत अधिक मानव शक्ति और वित्तीय संसाधनों की आवश्यकता होती है. इसके अलावा, के अस्थायी नियंत्रण खत्म हो गया है या इंजेक्शन चूहों में अंडर अभिव्यक्ति अनुवांशिक इंजीनियर चूहों की तुलना में कहीं अधिक सटीक है.

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Protocol

1. Lentivirus तैयारी

  1. 90% संगम HEK-293FT कोशिकाओं को विकसित.
  2. सीरम मुक्त DMEM के लिए अभिकर्मक परिवर्तन सेल के माध्यम से दिन में 1 मिमी glutamine और 50 मिलीग्राम / एमएल पेनिसिलिन स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ पूरक.
  3. एक pLKO.1-प्यूरो वेक्टर के साथ और एक वाहक के रूप में 9 1 मिलीग्राम / एमएल polyethylenimine के 10 μl का उपयोग कर, डेल्टा R8.2 और VSV जी moieties और ब्याज की miRNA के लिए कोडिंग plasmids के साथ कोशिकाओं सह transfect.
  4. 0.45 माइक्रोन फिल्टर के माध्यम से फिल्टर, 24 घंटे और 48 घंटे बाद अभिकर्मक में पैक lentiviruses लीजिए.
  5. 2 घंटे और 15 ° -70 सी, विभाज्य और दुकान डिग्री सेल्सियस के लिए, 70,000 XG में ultracentrifugation का उपयोग कर lentiviruses ध्यान लगाओ
  6. क्रमानुसार पतला वायरस की तैयारी अच्छी तरह से (प्रति वेक्टर के 1 से 10 -6 एमएल) के साथ HEK-293T कोशिकाओं को संक्रमित करते हुए उपाय वायरस टिटर. परिणामस्वरूप अनुमापांक (~ 1 की एक न्यूनतम मिलीलीटर प्रति × 10 9 संक्रामक कणों की सिफारिश की है) जीई की अभिव्यक्ति के लिए मूल्यांकन किया जाता हैब्याज के पूर्वोत्तर, puromycin चयन का उपयोग और फ्लोरोसेंट कोशिकाओं की गिनती के माध्यम से वायरस व्यक्त GFP बढ़ाता द्वारा.

Lentivirus तैयारी की अधिक विस्तृत प्रोटोकॉल के लिए 10 देखें.

2. सर्जरी के लिए पशु की तैयारी

  1. सर्जन आड़ सर्जिकल गाउन, बाँझ दस्ताने, टोपी और मुखौटा शामिल होना चाहिए.
  2. पशु वजन, तब के रूप में प्रत्येक दवा के लिए निर्दिष्ट पशु वजन के लिए आनुपातिक मात्रा के साथ, एक Ketamine मिश्रण का एक आईपी इंजेक्शन के साथ यह anesthetize. एक Ketamine / Xylazine मिश्रण के लिए, 80-200 मिलीग्राम / किग्रा Ketamine और 7-20 मिलीग्राम / किग्रा Xylazine की एक खुराक सीमा आमतौर पर चूहों के लिए प्रयोग किया जाता है.
  3. जानवर पूरी तरह से anesthetized है जब तक प्रतीक्षा करें, तो अंग को विस्तार देने और फिर अपनी उंगली से दबा कर पशु के पिछले अंग में वापसी पलटा की कमी के लिए जाँच करें.
  4. बॉक्स पर निर्दिष्ट के रूप में दर्द से राहत के लिए, Rimadyl साथ subcutaneously पशु इंजेक्षन. Rymadil के लिए विशिष्ट खुराक सीमा 5-10 मिलीग्राम है.
  5. एक स्थिर शरीर के तापमान को रखने के लिए और मरहम साथ आंख नम करने के लिए एक हीटिंग पैड पर पशु रखें.
  6. एक ट्रिमिंग करने वाली मशीन के साथ दो कानों के बीच क्षेत्र दाढ़ी.
  7. Betadine के साथ त्वचा को साफ करता है.

3. खोपड़ी और ड्रिलिंग का एक्सपोजर

  1. पशु के कान के लिए सिर्फ पूर्वकाल दरारों में छड़ का समायोजन करके stereotact अंदर पशु रखें.
  2. कान के बीच के बारे में 1.5 सेमी की एक पूर्वकाल पीछे चीरा बनाने के लिए और यह सर्जरी clamps (serfines) के साथ खुला रखने के लिए एक छुरी का प्रयोग करें.
  3. शीर्षस्थान और राज्याभिषेक और lambdoid टांके बीच चौराहे यानी, राज्याभिषेक सिवनी और बाण के समान टांके बीच चौराहे तक एक कपास झाड़ू के साथ खोपड़ी की सतह को साफ यानी लैम्ब्डा, दिखाई दे रहे हैं.
  4. सभी तीन कुल्हाड़ियों पर पर्वबिन्दु मुद्दे पर stereotact द्वारा आयोजित सिरिंज की नोक,,, इंगित करें. निर्देशांक नीचे लिखें. इस बिंदु शून्य पो के रूप में विचार किया जाएगासभी तीन कुल्हाड़ियों में int.
  5. एक तलीय आंदोलन खोपड़ी खरोंच और सही स्थान के लिए सिरिंज सिर को स्थानांतरित नहीं होता कि इतना ऊर्ध्वाधर अक्ष में सिरिंज उठा. -2 पूर्वकाल / पीछे अक्ष पर, ± औसत दर्जे / पार्श्व अक्ष में 1.8 और पृष्ठीय / वेंट्रल अक्ष में -1.5: hippocampal CA1 इंजेक्शन निम्नलिखित मिमी में पर्वबिन्दु के सापेक्ष निर्देशांक की आवश्यकता होती है.
  6. यह खोपड़ी छू तक सिरिंज की नोक लोअर और एक मार्कर के साथ हाजिर निशान. छुरा से बचने के लिए वापस सिरिंज निकालें.
  7. केवल एक ठीक बरमे का उपयोग कर खोपड़ी की हड्डी में एक उथले छेद ड्रिल. इसलिए यह नरम ऊतक नीचे में ड्रिल करने के लिए जारी नहीं होगा बरमे स्थिर पकड़ो. आप अन्य के साथ steadying एक हाथ से और कम दालों में ड्रिलिंग से रोक सकते हैं.

4. Lentivirus के इंजेक्शन

  1. केंद्रित lentivirus के समाधान के 0.5 मिलीलीटर वापस ले लें.
  2. छेद ऊपर सिरिंज प्लेस और यह इसकी वजह जब तक धीरे धीरे खड़ी इसे कमखोपड़ी की ches सतह. बहुत धीरे धीरे मस्तिष्क में सिरिंज कम करने के लिए आगे बढ़ें. इस चरण में कुछ रक्तस्राव जरूरी एक असफल प्रवेश का संकेत नहीं है जो उत्पन्न हो सकती है. खून बह रहा होता है, तो एक कपास झाड़ू के साथ यह चेहरे की विकृति.
  3. डिजिटल पंप से 0.02 मिलीग्राम / मिनट (0.5 μl 25 मिनट में इंजेक्ट किया जाएगा) सेट और जान फूंकना शुरू. धीमी गति से निषेचन के ऊतकों में वायरस के प्रसार को प्रभावी करने के लिए अनुमति देता है और वापस प्रवाह को रोकता है. कुछ सिरिंज प्रकार में मूल निर्देशांक और infusing को पीछे हटने से पहले 0.5 मिमी की एक अतिरिक्त गहराई के लिए सिरिंज डालने पर विचार करें.
  4. निषेचन के बाद पूरा सामग्री के बजाय सिरिंज द्वारा गठित नहर में वापस लौट के मस्तिष्क में प्रसार करने के लिए अनुमति देने के लिए अतिरिक्त 5 मिनट के लिए प्रतीक्षा करें.
  5. बहुत धीरे धीरे सिरिंज निकालें और वापस प्रवाह के लिए देखते हैं. एक वापस प्रवाह इस कदम पर मनाया जाता है, इंजेक्शन सामग्री का एक अंश शायद खो गया था.

5. घाव सील और रिकवरी

  1. सील वेंई histoacryl साथ घाव. आँखों में histoacryl की लीक से बचने के लिए सुनिश्चित करें.
  2. निर्जलीकरण से बचने के लिए, 1 मिलीलीटर पूर्व गर्म नमक के साथ पशु intraperitoneally (आईपी) इंजेक्षन.
  3. एक गर्म पैड पर तैनात है कि एक वसूली के पिंजरे में पशु रखें. यह एक अतिरिक्त घंटे के लिए ठीक नहीं है, जबकि पशु देखो.

वजन घटाने, inappetance के मामले में कमजोरी / फ़ीड या पानी, मरणासन्न अवस्था या संक्रमण, जानवर की इच्छामृत्यु को प्राप्त करने में असमर्थता प्रदर्शन किया जाना चाहिए. कृन्तकों की इच्छामृत्यु के लिए स्वीकार्य तरीकों बार्बीचुरेट्स, inhalant निश्चेतक, सीओ 2, सीओ, या सामान्य संज्ञाहरण के साथ संयोजन के रूप में पोटेशियम क्लोराइड हैं.

4 से 6 सप्ताह के बाद, जानवर नेविगेशन स्मृति मॉरिस पानी भूलभुलैया में मूल्यांकन किया है का आकलन करें. lentivirus आमतौर पर इंजेक्शन क्षेत्र के भीतर सबसे कोशिकाओं को संक्रमित जाएगा.

6. मॉरिस पानी भूलभुलैया में व्यवहार का आकलन

  1. एम में पशुओं को प्रशिक्षितओरिस जल भूलभुलैया. सही प्रशिक्षण और परीक्षण प्रोटोकॉल के लिए 11 देखें. प्रत्येक परीक्षण के बाद, एक सूखी तौलिया के साथ पशु सूखी अपने पिंजरे में इसे बदलने और टैंक में पानी को ताज़ा करें.
  2. प्रत्येक दिन लगातार 3 दिन, 4 परीक्षण के लिए मॉरिस पानी भूलभुलैया में पशुओं का परीक्षण करें. पूरब पश्चिम, उत्तर दक्षिण, दिन दो: पश्चिम दक्षिण प्रत्येक दिन उदाहरण के लिए एक दिन के लिए, एक को बदलने के क्रम में भूलभुलैया (उत्तर, दक्षिण, पूरब और पश्चिम) के 4 दिशाओं में से प्रत्येक में उलझन में पशु डालने उत्तर पूर्व. प्रत्येक परीक्षण के बाद पशुओं को साफ कर लें.
  3. परीक्षण के दौरान परीक्षण ऐसे Noldus ट्रैकिंग प्रणाली के रूप में एक ट्रैकिंग प्रणाली के साथ पशु ट्रैक.
  4. 12 वें परीक्षण परीक्षण करने के बाद, एक मिनट के लिए मंच के बिना पानी की टंकी में पशु डालने. इस जानवर ले जा रहा है खोज रणनीति का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा.
  5. 12 में सुझाव के रूप में डेटा का विश्लेषण.

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Representative Results

प्रोटोकॉल अनुभाग में संकेत प्रवाह की दर के साथ माउस हिप्पोकैम्पस में सीए 1 क्षेत्र में 0.5 μl lentivirus के इंजेक्शन व्याख्यान चबूतरे वाला दुम अक्ष में लगभग 1 मिमी की एक संक्रमित क्षेत्र पैदावार, और 0.5 औसत दर्जे का पार्श्व में मिमी और पूर्वकाल के बारे में -पीछे कुल्हाड़ियों (चित्रा 3).

चित्रा 1
चित्रा 1. शीर्षस्थान बिंदु और इंजेक्शन तंत्र. (क) दिखाया शीर्षस्थान (राज्याभिषेक और बाण के समान टांके चौराहे) और चीरा प्रदर्शन के बाद देखा के रूप में लैम्ब्डा (Lambdoid और बाण के समान टांके चौराहे) का एक योजनाबद्ध नक्शा है. (ख) चित्र स्टीरियोटैक्टिक तंत्र के मुख्य यांत्रिक घटकों चित्रण.

चित्रा 2
चित्रा 2. Lentivirus पीrincipal घटकों. lentivirus के प्रभावी एकीकरण और अभिव्यक्ति वायरस की और ब्याज की जीन के लिए एंटीबायोटिक दवाओं (Ampiciline, एम्प नि.), एक पत्रकार जीन (GFP), 5 और 3 'लंबे टर्मिनल दोहराता (लीटर) के लिए प्रतिरोध है कि सक्षम घटक शामिल (miRNA).

चित्रा 3
चित्रा 3. इंजेक्शन साइट और इन विवो Lentivirus की अभिकर्मक में. माउस एटलस के अनुसार (एक) इंजेक्शन साइट. इंजेक्शन हिप्पोकैंपस के CA1 क्षेत्र को निर्देश दिया है. व्याख्यान चबूतरे वाला दुम अक्ष में 11 स्लाइस, मोटी हर एक 40 माइक्रोन, साथ मनमाना इकाइयों में (ख) GFP मात्रा का ठहराव (प्रत्येक क्षेत्र में देखा 'हरी' की राशि की सामान्यीकृत उपाय). (सी, डी, ई और एफ). पर चिह्नित पदों के लिए विशिष्ट क्षेत्रों में ग्राफ. हरे रंग में लाल और GFP में DAPI धुंधला. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 4
4 चित्रा. MWM में चूहों के व्यवहार मूल्यांकन. (एक) एक विशिष्ट miRNA (आंकड़ा, लाल हलकों, एन = 10 में मीर एक्स नामित) और व्यक्त हाथापाई के साथ इंजेक्शन चूहों व्यक्त lentivirus के साथ इंजेक्शन चूहों के लिए छिपा मंच को खोजने के लिए विलंबता मतलब lentivirus (हरा त्रिकोण, एन = 10). त्रुटि सलाखों SEM का प्रतिनिधित्व करते हैं. एनोवा पी मूल्य <0.05. (ख) के दो समूहों के लिए अंतिम परीक्षण के प्रतिनिधि trajectories. (ग) का परीक्षण lentivirus (व्यक्त मीर के साथ इंजेक्शन चूहों के लिए खुले मैदान में 30 मिनट में दूरी मीनहरा), व्यक्त lentivirus (लाल) और संयुक्त राष्ट्र के इंजेक्शन जानवरों (नीला) हाथापाई. वैश्विक हरकत गतिविधि में कोई अंतर (एनोवा पी> 0.1) की पहचान की थी. (घ) (ग) में प्रत्येक समूह से चूहों के प्रतिनिधि प्रक्षेप पथ.

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Discussion

एक lentivirus की stereotactic इंजेक्शन के लिए दोनों के ऊपर से या विभिन्न जीनों और miRNAs के नीचे विनियमन विवो मूल्यांकन में लिए एक अपेक्षाकृत तेजी से विधि है. मुख्य विकल्प तो एक बहुत अधिक कठिन और समय लेने वाली तकनीक प्रत्यक्ष lentivirus के इंजेक्शन है जो एक अनुवांशिक इंजीनियर माउस है. इसके अलावा, ऊपर विनियमन, lentivirus के इंजेक्शन में, वयस्क माउस में एक विशेष समय पर होता है और सबसे अधिक बार अस्थायी नियंत्रण भी शामिल है कि अनुवांशिक इंजीनियर चूहों में मामला है, के रूप में विकास के दौरान leakiness की किसी भी संभावना को शामिल नहीं करता. बदल विनियमन जानवर के जीवन में देर से होता है जिसमें neurodegenerative रोगों में विभिन्न जीनों की प्रासंगिकता का आकलन जब पूरा अस्थायी नियंत्रण आवश्यक है. इसके अतिरिक्त, lentivirus के इंजेक्शन फिर, अनुवांशिक इंजीनियर सिस्टम में leakiness की एक निश्चित राशि के अधीन है, जो सटीक स्थानिक नियंत्रण प्रदान करता है. माउस इंजीनियरिंग सिस्टम endoge उपयोगकेवल एक निश्चित क्षेत्र या सेल प्रकार में सक्रिय हो जाएगा कि एक विशिष्ट प्रमोटर के एक डालने जोड़कर अलग प्रतिलेखन कारक के मन विशिष्टता. इसकी तुलना में, lentivirus के इंजेक्शन वेक्टर बदलने के बिना अंतरिक्ष में सीमित किया जा सकता है. lentivirus के इंजेक्शन का नुकसान एक श्रमसाध्य शल्य प्रक्रिया और प्रयोगशालाओं के बीच संदिग्ध reproducibility के लिए आवश्यकता हैं. अतिरिक्त प्रोटोकॉल इस तरह के व्यवहार और जैव रासायनिक आकलन के रूप में किया जा सकता से पहले इंजेक्शन सर्जरी के बाद, एक सप्ताह और 3 सप्ताह के बीच समय की अवधि, उसके प्रभाव उत्पन्न करने के लिए और पशुओं के लिए ठीक करने के लिए वायरस के लिए देनी होगी. प्रेरण के समय इंजेक्शन lentivirus एक अस्थायी नियंत्रण ऐसे Cre पर Lox प्रणाली के रूप में प्रणाली,, और एंटीबायोटिक दवाओं को शामिल कर सकते अलग आकलन के पास होना चाहिए, जिसमें पढ़ाई के बाद लंबे inducer के रूप में इस तरह के एक मामले में इस्तेमाल किया जा सकता है जानवर पूरी तरह से बरामद किया. यह तकनीक 13 में प्रस्तुत किया गया था. Reprod के बारे मेंइंजेक्शन के बीच ucibility, नियमित तौर पर इस विधि का प्रदर्शन समूहों है कि एक काफी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य लक्ष्य निर्धारण और जानवरों के 13 के बीच इंजेक्शन सामग्री के वितरण से पता चला है. विभिन्न प्रयोगशालाओं परिणामस्वरूप इंजेक्शन क्षेत्र को प्रभावित करने वाले विभिन्न सीरिंज, सिरिंज बढ़त के विभिन्न प्रकार (कुंद या तेज), और विभिन्न प्रवाह दरों, उपयोग के बाद प्रयोगशालाओं के बीच reproducibility, महान देखभाल की आवश्यकता है कि एक बात है. दोनों तरीकों में जीनोमिक एकीकरण साइट की वजह से एक स्थितीय प्रभाव हो सकता है. ट्रांसजेनिक लाइन में परिणाम पूरी लाइन में जीन मुंह बंद हो जाएगा. Lentivirus के इंजेक्शन आबादी में, दूसरे हाथ पर, प्रभाव आबादी के एक छोटे सबसेट को सीमित किया जाएगा. Vivo में shRNA के प्रयोगों के साथ मिलकर मीर प्रयोगों का मेल अपने लक्ष्य 6,8 पर एक निश्चित मीर के प्रभाव की विशिष्टता पर प्रकाश डाला सकता है. अन्त में, lentivirus के इंजेक्शन एक विशिष्ट में एक पारी में प्रभाव का परीक्षण करने के लिए एक ट्रांसजेनिक पछाड़ना माउस में इस्तेमाल किया जा सकता हैआईसी मस्तिष्क क्षेत्र और समारोह / समारोह प्रयोगों के बचाव का एक नुकसान के लिए काम करते हैं.

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Disclosures

लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषित.

Acknowledgments

यह अध्ययन मस्तिष्क विज्ञान के लिए एडमंड और लिली Safra केंद्र (एस.बी. फेलोशिप), इसराइल विज्ञान फाउंडेशन (एच एस के लिए अनुदान संख्या 378/11,) की विरासत विरासत बायोमेडिकल साइंस भागीदारी कार्यक्रम और वैज्ञानिक के लिए जर्मन इजरायल फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया है अनुसंधान और विकास (GIF) (एच एस के लिए अनुदान सं 1093-32.2/2010,).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Equipment
Rodent weigh scale Burtons (UK) 115-455
heating pad FIRstTechnology DCT-25
trimming machine Stoelting 51465
stereotact Stoelting 51730
Scalpel and blades Kent scientific INS500348
Harland syringe Hamilton 7632-01
driller Stoelting 51449
digital pump Harvard apparatus 704507
Water tank and platform Stoelting 60135
Reagents
ketamine Vetoquinol(Lure France) 3055503
domitor Orion pharma 107140-10
Rimadyl Pfizer animal health 24751
moisture ointment - Synthomycine 5% Rekah Pharmaceutical 195
histoacryl Braun 112101
saline Sigma Aldrich D8662

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References

  1. Siegel, G., et al. A functional screen implicates microRNA-138-dependent regulation of the depalmitoylation enzyme APT1 in dendritic spine morphogenesis. Nature Cell Biology. 11, 705-716 (2009).
  2. Jin, P., et al. Biochemical and genetic interaction between the fragile X mental retardation protein and the microRNA pathway. Nature Neuroscience. 7, 113-117 (2004).
  3. Simon, D. J. The microRNA miR-1 regulates a MEF-2-dependent retrograde signal at neuromuscular junctions. Cell. 133, 903-915 (2008).
  4. Consiglio, A. In vivo gene therapy of metachromatic leukodystrophy by lentiviral vectors: correction of neuropathology and protection against learning impairments in affected mice. Nature Medicine. 7, 310-316 (2001).
  5. Jakobsson, J., Lundberg, C. Lentiviral vectors for use in the central nervous system. Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 13, 484-493 (2006).
  6. Berson, A. Cholinergic-associated loss of hnRNP-A/B in Alzheimer's disease impairs cortical splicing and cognitive function in mice. EMBO Molecular Medicine. , (2012).
  7. Haramati, S. MicroRNA as repressors of stress-induced anxiety: the case of amygdalar miR-34. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 31, 14191-14203 (2011).
  8. Shaltiel, G., et al. Hippocampal microRNA-132 mediates stress-inducible cognitive deficits through its acetylcholinesterase target. Brain Structure & Function. , 10-1007 (2012).
  9. Boussif, O., et al. A versatile vector for gene and oligonucleotide transfer into cells in culture and in vivo: polyethylenimine. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92, 7297-7301 (1995).
  10. Mendenhall, A., Lesnik, J., Mukherjee, C., Antes, T., Sengupta, R. Packaging HIV- or FIV-based lentivector expression constructs & transduction of VSV-G pseudotyped viral particles. J. Vis. Exp. (62), e3171 (2012).
  11. Nunez, J. Morris Water Maze Experiment. J. Vis. Exp. (19), e897 (2008).
  12. Bromley-Brits, K., Deng, Y., Song, W. Morris water maze test for learning and memory deficits in Alzheimer's disease model mice. J. Vis. Exp. (53), e2920 (2011).
  13. Regev, L., Ezrielev, E., Gershon, E., Gil, S., Chen, A. Genetic approach for intracerebroventricular delivery. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 4424-4429 (2010).

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Barbash, S., Hanin, G., Soreq, H.More

Barbash, S., Hanin, G., Soreq, H. Stereotactic Injection of MicroRNA-expressing Lentiviruses to the Mouse Hippocampus CA1 Region and Assessment of the Behavioral Outcome. J. Vis. Exp. (76), e50170, doi:10.3791/50170 (2013).

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