Ci proponiamo di determinare le concentrazioni tollerabili di tre acidi grassi (acido oleico, linoleico e linolenico) e la tossina del colera che non significativamente e influenzare negativamente la sopravvivenza delle cellule solubilizzando gli acidi grassi e le tossine e il loro utilizzo in saggi di sopravvivenza delle cellule.
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Articolo metodologico
Determinazione degli acidi grassi tollerabile e Concentrazioni tossina colerica Uso Umano cellule epiteliali intestinali e BALB / c macrofagi del mouse
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il ruolo positivo degli acidi grassi per la prevenzione e la riduzione delle malattie non-umani e umani sono stati e continuano ad essere ampiamente documentato. Questi ruoli includono influenze sulle malattie infettive e non infettive tra cui la prevenzione di infiammazione e immunità mucosale a malattie infettive. Il colera è una malattia intestinale acuta causata dal batterio Vibrio cholerae. Essa si verifica nei paesi in via di sviluppo e, se non trattata, può portare alla morte. Mentre esistono vaccini per il colera, non sono sempre efficaci e sono necessari altri metodi preventivi. Ci proponiamo di determinare le concentrazioni tollerabili di tre acidi grassi (acido oleico, linoleico e linolenico) e la tossina del colera che utilizzano rispettivamente topo BALB / C macrofagi e cellule epiteliali intestinali umane. Noi solubilizzato degli acidi grassi sopra e saggi di proliferazione cellulare utilizzati per determinare gli intervalli di concentrazione e concentrazioni specifiche degli acidi grassi che non sonot pregiudizievoli per la vitalità delle cellule epiteliali intestinali umane. Noi solubilizzato tossina del colera e l'ho usato in un test per determinare gli intervalli di concentrazione e concentrazioni specifiche di tossina del colera che non statisticamente diminuire la vitalità cellulare in BALB / C macrofagi.
Abbiamo trovato le concentrazioni ottimali di acidi grassi per essere fra 1-5 ng / ml, e che per tossina colerica essere <30 ng per il trattamento. Questi dati possono aiutare i futuri studi che mirano a trovare un ruolo protettivo della mucosa di acidi grassi nella prevenzione o riduzione delle infezioni da colera.
Introduzione
I benefici per la salute degli acidi grassi, come ad esempio acido oleico, linoleico e linolenico sono stati e continuano ad essere documentata. Per esempio acido oleico aiuta facilitare la penetrazione dei farmaci lipofili nel 1,2 corpo, riduce la malattia coronarica del 24% quando sostituite acidi grassi saturi 3, ed è usato per trattare malattie metaboliche come Adrenoleukodystrophy 4 che è un X-Linked malattia genetica del metabolismo degli acidi grassi. . Mentre un precursore necessario per l'acido arachidonico nei mammiferi, acido linoleico (a differenza acido oleico) non viene sintetizzata dal corpo e deve essere ottenuto a....
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Protocollo
1. Tissue Culture
- Utilizzare Mus musculus macrofagi (topi BALB / c) per le determinazioni della tossina del colera. Inizialmente cultura tutti M. cellule musculus seguendo le istruzioni del fornitore.
- Propagare BALB / c cellule topi in mezzo di coltura di Dulbecco modificato con L-glutammina completato con 10% di siero fetale bovino e 1% di antibiotici / antimicotici o RPMI 1640 supporti di base completato con 10% di siero fetale bovino, 5% di L-glutammina e 1 % antibiotico / antimicotico reagente.
- Crescere le cellule in 75 cm 2 corning boccette con tappi di sicurezza a 37 ° C, 95% di aria e 5% di C....
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Risultati
Determinazione della concentrazione ottimale di acidi grassi
La concentrazione ottimale di acidi grassi è definito come la concentrazione massima alla quale la crescita cellulare è comparabile o superiore a quello delle cellule di controllo, con relativamente bassa variabilità nei risultati. Per determinare la concentrazione ottimale di oleico, cellule acidi linoleico e linolenico sono state inizialmente trattate con concentrazioni variabili di ciascun acido grasso in grandi incrementi e succes.......
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Discussione
Suggerimento di concentrazione di acidi grassi e di tossina colerica
Mentre il meccanismo esatto di come acidi grassi migliorare l'immunità mucosale è sconosciuta, diversi studi hanno tentato di investigare loro effetti benefici. Nostro studio mira a fornire metodologia per determinare la concentrazione massima di acidi grassi che le cellule possono tollerare nonché la concentrazione massima di tossina colerica che le cellule possono tollerare senza una significativa influenza sulla sopravv.......
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Dichiarazioni
Gli autori di questo studio hanno alcun interesse finanziario dei risultati di questo studio. Finanziamento per questo studio è stato fornito al FT da Kean University, tuttavia, FT è attualmente un dipendente a Kingsborough Community College.
Ringraziamenti
Ringraziamo Paula Cobos e il Dr. Evros Vassiliou per l'assistenza di laboratorio e di fornire i macrofagi del mouse, rispettivamente. Ringraziamo anche il nostro laboratorio direttore Richard Criasia per guida e aiuto con i materiali. Infine, gli autori ringraziano Ramanpreet Kaur per un aiuto con la produzione video.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Cells/Reagent | |||
| Mus musculus macrofagi | ATCC | ATCC RAW 264.7 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Medium | ATCC | 30-2002 | |
| L-glutammina | ATCC | 30-2115 | |
| Siero fetale bovino | Bio-west | S0250 | |
| Antibiotico/ Clone antimicotico | SV3007901 | ||
| Cellule epiteliali intestinali umane | ATCC | ATTC CCL-241 | |
| HybriCare media | ATCC | 46-X | |
| Acido oleico | Sigma-Aldrich | O1008 | |
| Acido linoleico | Sigma-Aldrich | L-1376 | |
| Acido linolenico | Sigma-Aldrich | L-2376 | |
| Tossina del colera | Sigma-Aldrich | C8052 | |
| Equipment | |||
| BD Falcon 96-Well Piastre per colture cellulari BD | Biosciences | 351172 | |
| spettrofotometro con software Dynex Revelations 4.22 | Dynex | 91000101 |
Riferimenti
- Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery. Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).
- Tandon, P., et al. X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic ac....
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Ristampe e permessi
