En este artículo se describe cómo microinject vectores virales en el cerebro del ratón y luego probar en un paradigma de preferencia un lugar acondicionado que incluye una fase de adquisición, extinción y reintegro.
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Artículo de método
La microinyección estereotáxica de vectores virales que expresan Cre recombinasa para estudiar el papel de los genes diana de cocaína acondicionado Place Preferencia
En este artículo
Resumen
Resumen
Microinyección recombinante vectores virales adenoasociados (rAAV) que expresan la recombinasa Cre en distintas regiones del cerebro del ratón se convierte selectivamente genes knockout de interés permite un mejor control temporal y regionalmente específica de supresión de genes, en comparación con los métodos existentes. Mientras que la supresión condicional también se puede lograr por los ratones de apareamiento que expresan la recombinasa Cre bajo el control de promotores de genes específicos con ratones que portan un gen floxed, microinyección estereotáxica permite la selección de las zonas discretas del cerebro en puntos de tiempo experimentador-determinadas de interés. En el contexto de la cocaína lugar acondicionado preferencia, y otros paradigmas de comportamiento cocaína tales como la auto-administración o sensibilización psicomotora que puede implicar la retirada, extinción y / o fases de reinstalación, esta técnica es particularmente útil en la exploración de la contribución única de los genes diana a estos distintos fases de los modelos de comportamiento de plasticidad inducida por la cocaína. Específicamente,esta técnica permite la ablación selectiva de los genes diana durante las fases discretas de un comportamiento a prueba su contribución al comportamiento a través del tiempo. En última instancia, este conocimiento permite terapias más específicas que están en mejores condiciones para hacer frente a los factores de riesgo más potentes que se presentan durante cada fase de la conducta adictiva.
Introducción
La cocaína es un psicoestimulante altamente de refuerzo. Después de la exposición repetida, varias adaptaciones moleculares y celulares que ocurren en la recompensa correspondiente circuitos del cerebro que se cree que resulta en compulsiva búsqueda de drogas, lo que provocó altas tasas de recaída que representan un grave problema clínico 1. La cocaína ejerce estos efectos en el comportamiento de larga duración mediante la regulación de la expresión génica. Para estudiar las adaptaciones que surgen del uso crónico de la cocaína, modelos de roedores preclínicos se han utilizado ampliamente. Uno de estos modelos es el lugar de preferencia paradigma condicion....
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Protocolo
Todos los procedimientos se llevaron a cabo de acuerdo con el Weill Cornell Medical College Institucional Cuidado de Animales y el empleo Comisión reglas.
1. Preparación y configuración de la administración estereotáxica de vectores virales
- Si un instrumento, hisopo estéril, o la mano usando guantes estériles están contaminados por el contacto con una superficie no estéril, deseche o volver a esterilizar el instrumento con un esterilizador de cuentas caliente, deseche el hisopo o cambiar a los nuevos guantes estériles.
- Coloque una jaula del ratón con ropa de cama en un bloque de calor para calentar para la recuperació....
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Resultados
CPP
Después de realizar CPP en ratones microinyectados, se debe verificar que la cohorte de control de inyección de (rAAV-GFP) ratones han adquirido normalmente preferencia por la cámara de drogas emparejado (Figura 1A, 1B). Los ratones se considera que han adquirido preferencia por una cámara en particular cuando preferencia cocaína (tiempo de permanencia en la cámara de la cocaína de pares de menos tiempo de permanencia en la cámara de solución salina-emparejado) es significa.......
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Discusión
Regional-y la ablación génica temporal específica mediante microinyección estereotáxica de vectores virales combinadas con CPP, que incluye las fases de extinción y reintegro posibilite la investigación de las contribuciones específicas de genes en tres fases distintas de comportamiento adictivo similar. Mientras knockout condicional que se logra utilizando el sistema Cre-loxP tradicional prevé espacio-temporalmente la ablación génica restringidos, estereotáxicamente microinyección Cre-recombinasa en áreas discretas del.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores desean agradecer a Anni Lee y Maureen Byrne por su ayuda en el establecimiento del protocolo de preferencia un lugar acondicionado extendida.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Cámaras de actividad de preferencia de lugar acondicionado | Med Associates, Inc., St. Albans, VT, EE. UU. | MED-CPP-MS | |
| Sistema de alineación estereotáxica para ratón | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, EE. UU | . jeringas Hamilton modelo 900 | |
| Hamilton Company, Reno, Nevada, EE. UU. | 7634-01 | ||
| rAAV2-Cre-GFP | Vector BioLabs, Filadelfia, PA, EE. UU | . 7016 | |
| Vector rAAV2-GFP | BioLabs, Filadelfia, PA, EE. UU | . 7004 |
Referencias
- Nestler, E. J. Molecular neurobiology of addiction. American Journal on Addictions. 10 (3), (2001).
- Thomas, M. J., Kalivas, P. W., Shaham, Y. Neuroplasticity in the mesolimbic dopamine system and cocaine addiction. British Journal of Pharmacology. 154
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Reimpresiones y permisos
