Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.

Methodenartikel

Niet-invasieve Intratracheaal intubatie om te studeren de Pathologie en Fysiologie van Mouse Lung

25.1K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/50601

⸱

8 november 2013

 , 

In dit artikel

Samenvatting

Het gebruik van een model dat de toestand van longziekten bij mensen nabootst is kritiek voor het bestuderen van de pathofysiologie en / of etiologie van een bepaalde ziekte en ontwikkelen van therapeutische interventie. Hier een niet-invasieve intratracheaal intubatie methode die direct exogene materialen kunnen leveren aan muizenlongen wordt gepresenteerd.

Samenvatting

Het gebruik van een model dat de toestand van longziekten bij mensen nabootst is kritiek voor het bestuderen van de pathofysiologie en / of etiologie van een bepaalde ziekte en ontwikkelen van therapeutische interventie. Met de toenemende beschikbaarheid van knockout en transgene derivaten, samen met een grote hoeveelheid genetische informatie, muizen verschaffen een van de beste modellen om de moleculaire mechanismen van de pathologie en fysiologie van longziekten te bestuderen. Inademing, intranasale instillatie, intratracheale instillatie, en intratracheale intubatie zijn de meest gebruikte technieken door een aantal onderzoekers om materialen van belang te dienen aan muizenlongen. Er zijn voor-en nadelen voor elke techniek, afhankelijk van de doelen van een studie. Hier een niet-invasieve intratracheaal intubatie methode die direct exogene materialen kunnen leveren aan muizenlongen wordt gepresenteerd. Deze techniek werd toegepast op bleomycine toedienen aan muizenlongen als model pulmonale fibrose te bestuderen. </ P>

Inleiding

Lung is een orgaan waar veel verwoestende ziekten vaak worden gediagnosticeerd. Onder hen, longkanker is de tweede meest gediagnosticeerde kanker bij zowel mannen als vrouwen, en de meest voorkomende oorzaak van overlijden door kanker. Chronische obstructieve longziekte, ook bekend als emfyseem en chronische bronchitis, is een zeer ernstige ziekte en de derde doodsoorzaak in de Verenigde Staten. In 2011 werd geschat dat 25,9 miljoen Amerikanen had astma, waaronder 7,1 miljoen kinderen onder de leeftijd van 18. Astma is de derde belangrijke oorzaak van ziekenhuisopname bij kinderen onder de leeftijd van 15 (American Lung Association,

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Het volgende protocol beschrijft een niet-invasieve, eenvoudige en snelle methode om materiaal plaats leveren muizenlongen. Deze procedure werd goedgekeurd door de Animal Care en gebruik Comite National Cancer Institute.

1. Anesthesie

  1. Eerst verdoven de muis met een mengsel van ketamine en xylazine (100 mg / kg lichaamsgewicht en 10 mg / kg lichaamsgewicht, respectievelijk). Dit is de aanbevolen ACUC anesthesie en dosering. Met dit bedrag, muizen onbewust tenminste voor ~ 20 minuten.
  2. Breng dierenarts zalf voor de ogen van de muis om het drogen van de ogen tijdens anesthesie voorkomen.
  3. Na enkele minuten, knijp....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Aanvankelijk werd groen geverfd oplossing gebruikt om muizen te intuberen voor de praktijk. De long werd onmiddellijk gereseceerd na intubatie te onderzoeken hoe gelijkmatig de kleur in de long (figuur 2) werd verdeeld. Deze techniek werd toegepast op bleomycine-geïnduceerde longfibrose bestuderen met C57BL / 6 muizen. Toen de muizen intratracheaal werden geïntubeerd met 1,2 U / kg bleomycine of zoutoplossing als controle en necropsie 3 weken later, de muizen ontwikkelde bleomycine geïnduceerde fibrose .......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

Intratracheale intubatie zoals hier beschreven is een eenvoudige, maar uitstekende niet-invasieve methode om materialen van belang gelijkmatig aan de muizenlong toe te dienen. Deze methode maakt het mogelijk de effecten en/of rol van het toegediende materiaal op de fysiologie en/of pathologie van de long te bestuderen. De toegediende materialen kunnen endogene moleculen zoals cytokinen zijn, of exogene materialen zoals xenobiotische chemicaliën/geneesmiddelen, carcinogenen, verontreinigingen, allergenen of virussen die r.......

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen.

Dankbetuigingen

Dit werk werd ondersteund door het Intramurale Onderzoeksprogramma van het National Cancer Institute, Centrum voor Kankeronderzoek.

....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
KetaVedVedcoKetamine
AnaSed Injection 20 mgLLOYDXylazine
BioLite StandBraintree ScientificRIS100Voor muizen
BioLite Intubatie VerlichtingssysteemBraintree ScientificBIO MI-KITVoor muizen
22 G, 1 inch i.v. katheterTerumoSR-OX2225CAVoor muizen onder 30 g. De katheter wordt alleen gebruikt indien het Intubatie Verlichtingssysteem niet wordt gebruikt.
20 G, 1 inch i.v. katheterTerumoSR-OX2025CAVoor muizen boven 30 g. De katheter wordt alleen gebruikt indien het Intubatie Verlichtingssysteem niet wordt gebruikt.

Referenties

  1. Das, S., Macdonald, K., Chang, H. Y., Mitzner, W. A simple method of mouse lung intubation. J. Vis. Exp. (73), e50318(2013).
  2. Miller, M. A., et al. Visualization of murine intranasal dosing efficiency using luminescent Francisella tularensis....

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Meer artikelen verkennen

Longfibrosebleomycinebehandelingglasvezelgeleidinghistologische analysehydroxyproline-assayC57BL6-muizenniet-invasieve technieklongziektemodel