경골 신경 절개 모델은 골격 근육 위축, 잘 용납 검증 및 재현성 모델입니다. 모델 수술 프로토콜은 C57Black6 마우스에 설명 설명된다.
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이 논문에서
요약
초록
경골 신경 절개 모델은 설치류에서 탈 신경에 의한 근육의 위축, 잘 용납 검증 및 재현성 모델입니다. 원래 개발 및 큰 크기로 인해 쥐에서 광범위하게 사용되지만, 생쥐의 경골 신경은 좌골 신경의 비골과 비복 신경 가지가 손상함으로써 유지 떠나는 쉽게 호감이나 절개하거나 조작 할 수있는 충분히 큰 그들의 목표 근육. 따라서,이 모델은 좌골 신경의 절개 모델보다 이환율과 보행의 장애를 유도하는 장점을 제공하고 또한 연구자들은 유전자 조작 생쥐의 근육 위축의 과정을 조절, 생리 세포 및 분자 생물학적 메커니즘을 연구 할 수 있습니다. 경골 신경 비복근, 가자미근과 plantaris 근육을 공급, 그래서 그 절개 빠른 트 유형 II 섬유 및 / 또는 속도가 느린 트 타입으로 구성 denervated 골격 근육의 연구를 허용 I섬유. 여기에서 우리는 C57Black6 마우스의 경골 신경 절개 모델을 보여줍니다. 우리는 파라핀 조직 학적 부분에 근육 무게와 섬유 유형별 단면적을 측정하여 1, 2에서 대표적인 근육으로 비복근 근육의 위축을 평가하고, 4 주 후 탈 신경은 빠른 트 마이 오신에 대한 면역 염색.
서론
외상성 말초 신경 손상, 질병이나 약물의 개입에 의한 골격근 탈 신경, 근육의 자발적 수축 기능의 즉각적인 손실됩니다. 근육 병용 위축으로 시작하고 적시에 양질의 reinnervation 1,2가 발생했을 경우이 위축 가역적이다. reinnervation의 부재에서, 근섬유의 위축이 진행하고, 근육에 돌이킬 수없는 생물학적 변화는 근육의 섬유화 및 근섬유의 죽음으로 발생합니다. 여기에서 우리는 쥐의 경골 신경 절개 모형, 탈 신경 유도 된 근육의 위축과 섬유화의 모델을 보여줍니다. 이 모델은 비복근과 가자미근의 근육 생체 내에서 근육 위축의 기초, 생리 세포 및 분자 생물학적 메커니즘을 연구하는 과학자들 수 있습니다. 역사적 쥐에서 주로 사용하지만, 녹아웃 특히 유전자 변형 마우스 라인이 모델의 최근 응용 프로그램은 연구자가 자신의 역할을 평가할 수 있습니다생체 내 유도, 개발 및 유지 보수, 또는 양자 택일의 해상도, 근육 위축 및 섬유화에 대한 관심의 특정 단백질 (들).
경골 신경 쥐 뒷다리의 혼합 모터 감각 말초 신경이며, 좌골 신경의 세 단자 가지 중 하나입니다. 경골 신경의 절개 비복근, 가자미근과 plantaris 근육 (및 후방 경골근, 굴근 digitorum의 롱 및 굴근....
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프로토콜
이전에이 모델을 사용하여, 연구자들은 몸을 관장하는 교육 기관의 동물 사용으로 수술 프로토콜에 대한 승인을받은이 있어야합니다. 모델은 연구 윤리위원회, 해밀턴 건강 과학 회사, McMaster 대학 (AUP # 10-04-24) 승인 및 동물 관리에 캐나다위원회의 권고에 따라 엄격 수행됩니다.
1. 마우스 준비
- 마우스를 무게. 5 isoflurane을 % 또는 2 % 할로 탄으로 마취를 유도. 외과 의사를 보호하기 위해 마취의 청소 적절한 사용 회로 확인해야합니다. 2 ~ 3 분 후에는 동물의 호흡 속도가 느려집니다. 깜박 반사가없는 확인하고 수술 마취 (마우스에 의한 응답의 ie) 확인 발에서 인터 공백을 꼬집어. 수술 중 각막의 건조를 방지하기 위해 눈 안과 윤활제를 적용합니다.
- 좌골의 측면 허벅지와 엉덩이를 면도무릎 노치와 proviodine으로 소독. 면도는 수술 부위의 적절한 시각화를 보장하기 위해 신경 박리와 절개의 간섭을 최소화하기 위해 절개 모발의 사이트에 무료로 유지됩니다. 우수하고 대퇴골 후방에있는 좌골 노치, 촉진하여 식별 할 수 있습니다.
2. 수술 절차
- 2 % (할로 1 %)로 흡입....
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결과
경골 신경 절개는 비복근, 가자미근과 종아리의 plantaris 근육을 denervates. 여기에 우리가 대표하는 근육으로, 비복근 근육 위축의 발전을 평가합니다. 비복근의 근육은 1, 2, 4 주 동안 denervated 2-3개월 이전 C57Black 6 마우스 (잭슨 연구소)에서 수확했다. 근육의 무게는 점차적으로 시간이 지남에 따라 유형 II 빠른 트 위치 근육 섬유 (그림 2)의 단면적 않습니다 (그림 1) 감소. 비복근은 혼합 섬유 형 근육 (I 및 유형 II)이지만, 탈 신경은 내가 II 섬유 11을 입력합니다 입력에서 섬유 형 스위치를 유도하고, 결과 유형의 적절한 수는 I 섬유는 측정 가능하고하지 않을 수 있습니다 강력한 통계 분석.
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토론
탈 신경에 의한 근육 위축의 경골 신경 절개 모델 쥐에서 일반적으로 채택하고 잘 검증 된 모델입니다. 우리는 조사가 유전자 조작 생쥐의 존재를 활용하고 근육 질량 7,8의 규제에 중요한 단백질의 부재에서 생체 내에서 근육 위축의 과정을 연구 할 수 있도록 마우스의 사용이 모델을 채택했다. 비복근과 가자미근의 근육이 모델에 denervated 모두, 따라서 이후의 분자 분석을위한 우수한 품질의 mRNA와 단백질을 제공, 쉽고 빠르게 최소한의 처리를 해부 할 수 있습니다. 마찬가지로, 때문에 근육의 크기, 그들은 수반 조직 학적 및 형태 학적 분석에 같은 동물의 조직을 제공, 분할 할 수 있습니다. 뒷다리 기능 평가가 필요한 경우, 트랙 분석을 도보 순차적으로 수행 할 수 있습니다. 발은 잉크에 담근되고 마우스는 종이와 인클로저를 걸어된다하단. 지문의 특징을 신뢰성있게 측정 및 면적 특성은 기능적 근육 그룹에게 13,14을 반영 있기 때문에, 신경 근육 학 장애 및 보행 손상.......
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공개 사항
관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.
감사의 글
이 작품은 CIHR 신경 근육 학 연구 협력 (-; JAEB에 90959 JNM)에서 교부금에 의해 지원되었다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Reagents and Materials | |||
| 10-0 Nylon suture | Ethicon | 2850G | |
| 5-0 Vicryl suture | Ethicon | J553G | |
| Equipment | |||
| spring microdissecting scissors | Fine Surgical Tools | 15021-15 | |
| Ultra fine popps | Fine Surgical 도구 | 11370-40 | |
| 비잠금 마이크로 니들 홀더(드라이버) | 미세 수술 도구 | 12076-12 | |
| 스프링 견인 | 미세 수술 도구 | 17000-02 |
참고문헌
- Fu, S. Y., Gordon, T. Contributing factors to poor functional recovery after delayed nerve repair: prolonged denervation. J. Neurosci. 15, 3886-3895 (1995).
- Kobayashi, J., Mackinnon, S. E., Watanabe, O., Ball, D. J., Gu, X. M., Hunter, D. A., Kuzon, W. M.
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재인쇄 및 허가
