从动物模型中采集乳汁有助于开展多种研究：了解被动免疫机制、鉴定导致垂直传播的病原体，以及通过使用转基因小鼠实现人乳中蛋白质的商业化生产。本文介绍了一种适用于小鼠和 Reeves 水鹿的乳汁采集简易方法。
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本文内容
摘要
摘要
在研究实验室中，动物模型常被用于实现那些在病原体天然宿主中通常被认为不切实际的目标。通过从动物体内采集乳汁，科研人员能够研究繁殖过程中的多个方面，包括垂直传播、被动免疫、乳腺生物学以及泌乳机制。为这些研究获取足够体积的乳汁是一项具有挑战性的任务，尤其是使用小型动物模型时。本文介绍一种经济且简便的小鼠和 Reeves 氏麂乳汁采集方法，该方法无需特殊设备或 extensive 培训。此方法需要两名研究人员协作：一人负责挤奶并固定动物，另一人则使用合适的容器从小型麂或小鼠模型中收集乳汁。对于小鼠模型，还需使用 P-200 移液器及配套的吸头。尽管该方法成本较低且操作相对简单，但研究人员应注意，为获得最佳乳汁采集效果，需对动物实施麻醉。
引言
动物模型能够提供通过体外分析无法获得的疾病病理学信息。in vitro 分析。为了获得最有效的结果，重要的是使用与目标疾病和物种密切相关的动物模型。例如，赤麂（Muntiacus reevesi），一种小型亚洲鹿1,2，以及表达鹿源朊蛋白的转基因小鼠（CerTgPrP）3，是研究鹿科动物的有用动物模型。这两种动物均为全年多次发情，可实现全年繁殖，因此能持续提供与妊娠相关的组织和体液，用于研究鹿科生物学中的特定机制。乳汁研究具有广泛的应用价值，而在动物模型中开展此类研究比在人类中更为简便且成本更低。研究人员可将乳汁和初乳作为潜在的研究来源，用于：1）传染病传播途径的研究；2）母体向子代传递免疫球蛋白，以研究被动免疫的形成过程4；以及 3）乳铁蛋白的研究，该蛋白存在于人乳中，参与被动免疫，目前研究人员正尝试实现其商业化生产5。
从小型动物中收集大量乳汁可能是一项困难的任务。Rogers 提出了一种从大鼠收集乳汁的方法6，随后该方法也被用于小鼠。DePeters 和 Hovey 提出了两种乳汁采集方法：一种是使用连接在巴斯德移液管上的橡胶移液器球手动产生负压；另一种则需要构建一个挤奶装置，并将其连接至真空源（例如水龙头）以采集小鼠乳汁7。本文中，我们提出一种简单且低成本的方法，可用于从小鼠和里夫斯氏麂鹿中采集乳汁，该....
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方案
1. 小鼠泌乳方案
本方案中所述方法已获得实验动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。
1. 将母鼠与仔鼠分离
- 选择待采乳的母鼠。选择产后8-12天、拥有4只或以上仔鼠的母鼠，可获得最大量的乳汁；尽管在产后任何时间点至21天内均可进行采集。
- 在采乳前至少2小时将母鼠与其仔鼠分笼饲养。
注意：若需在特定时间段内对多只母鼠进行采乳，可将分笼的母鼠共同饲养于同一笼具中，但需提供充足的食物和饮水。
2. 催产素、麻醉剂和眼用润滑剂的给药
- 按每公斤体重2 IU的剂量腹腔注射催产素（oxytocin）。催产素是一种作用于哺乳期雌性动物乳腺的激素，可促进乳汁分泌。催产素可从兽医处获取。
- 腹腔注射含有每公斤体重80–100 mg氯胺酮（ketamine）和每公斤体重5–10 mg赛拉嗪（xylazine）的麻醉混合液。例如，可预先配制10 ml的麻醉储备液，适用于体重约30 g的小鼠，其中包含0.1 ml赛拉嗪、8.9 ml H2O和1.0 ml氯胺酮。对该体重范围的小鼠注射0.25 ml麻醉液，可使其镇静约20–30分钟，足以完成乳汁采集。
备注：为确认动物是否已成功麻醉，可将其轻轻置于坚硬表面俯卧位；若其完全麻醉，则不应有足部活动或试....
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结果
小鼠
根据我们的实验，从一只实验小鼠中大约可收集到 100–400 μl 的乳汁，具体产量取决于多个变量。这些变量包括：1）用于采集的时间长短，2）给予的催产素剂量，3）母鼠当前哺育的幼崽数量，以及 4）分娩后的天数。我们的研究表明，当母鼠与其幼崽分离至少 2 小时，并且每只小鼠预留至少 45 分钟至 1 小时进行挤奶时，可获得最高产量。在分娩后第 8 至 12 天，使用 2 IU/kg 剂量的催产素可获得最大乳汁体积。我们的结果与其他研究基本一致，即窝仔数与乳汁产量呈正相关9（见图 3）。
麂
尽管从麂子采集的乳汁量每天各不相同，但我们能够根据所使用的麻醉剂及产后时间，每次每只母鹿采集到 5 至 30 ml 的乳汁。2（见表 1）。经咪达唑仑诱导的母鹿麻醉时间较短，仅维持约 10 分钟，因此采.......
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讨论
小鼠
在采集小鼠乳汁时，需考虑多个因素，包括：1）预留的采集时间；2）给予的催产素剂量；3）母鼠当前哺育的幼崽数量；以及 4）采集时距离分娩已过去的时间。参考既往研究作为指导，我们旨在优化乳汁产量的采集条件。
既往研究已直接证实产奶量与窝仔数之间存在相关性8。遗憾的是，窝仔数是一个无法控制的变量。然而，分娩后挤奶的时间是可以控制的。根据《实验小鼠》（The Laboratory Mouse）的记载，分娩后第8至10天为乳汁分泌的高峰期9。我们的经验与此说法一致。
研究表明，催产素在产后乳汁分泌中发挥着不可替代的作用10。已有文献报道，为从啮齿类动物收集乳汁，使用的催产素剂量范围为0.1 IU/kg9至4 IU/kg66,7,9。在本研究中，我们首先尝试使用最低推荐剂量，即0.1 IU/kg<.......
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披露
作者无任何利益冲突需要披露。
致谢
本研究由美国国立卫生研究院（NIH）资助项目 #RAI093634A 资助。我们非常感谢 Jenny Powers 博士（兽医学博士，哲学博士）在饲养麂类动物及乳汁采集工作中提供的帮助。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 材料—小鼠 | |||
| 氯胺酮（KetaVed 100 mg/ml）（剂量：80–100 mg/kg） | MWI/Vedco | 011075 | |
| 赛拉嗪（TranquiVed 100 mg/ml）（剂量：5–10 mg/kg） | MWI/Vedco | NADA 139236 | |
| 眼用润滑剂 | MWI/Apexa | 701013 | |
| 催产素（2 IU/kg） | Vet One | 501013 | |
| 材料—麂 | |||
| 咪达唑仑（1–2 mg/kg） | Amerisource Bergen Drug Corp | 924326 | 可选：研究人员可单独使用咪达唑仑，或使用BAM组合（咪达唑仑、丁丙诺啡、阿扎哌隆）作为麻醉剂 |
| 酒石酸布托啡诺（Torbugesic）（0.45 mg/kg） | Fort Dodge Animal Health | NADA 135-780 | |
| 酒石酸阿扎哌隆（0.25 mg/kg） | ZooPharm | ||
| 盐酸美托咪啶（0.07 mg/kg） | ZooPharm | ||
| 盐酸安替帕米唑（Antisedan）（剂量：0.25 mg/kg） | Orion Corporation | NADA 141-033 | |
| 催产素（10 IU/kg） | Vet One | 501013 | |
| 设备—小鼠 | |||
| P-200 移液器 | Gilson | F123601 | |
| 200 μl 移液器吸头 | Light Labs | B-2004-SH | |
| 1 ml 注射器 | MWI | 005427 | |
| 27 G 针头 | MWI | 002031 | |
| 设备—麂 | |||
| 15 ml 锥形管 | VWR | 21008-918 | |
| 22 G 针头 | MWI | 873 | |
| 3 ml 锁扣式注射器 | MWI | 001377 |
参考文献
- Dueling, S. Muntiacus reevesi. Animal Diversity Web. , Available from: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/accounts/Muntiacus_reevesi (2004).
- Pei, K., Taber, R., O'Gara, B., Wang, Y. Breeding cycle of the Formosan Reeves muntjac (Muntiacus reevesi micrurus) in northern Taiwan, Republic of China. Mammalia. 59
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