Doğrudan insan dokularından kanser kök hücreler (rulmanları) izolasyonu biyolojik karakterizasyonu için bir koşuldur. Ayrıca zor sorun giderme adımları konusunda ipuçları sağlarken Bu makale, insan dokularından prostat CSCS izolasyonu için bir yöntem anlatılmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon
Bu makalede
Özet
Özet
Kanser kök hücre (CSC) modeli ölçüde son iki yılda yeniden gözden geçirilmiştir. Bu süre boyunca CSCS tanımlanır ve doğrudan insan dokularından izole edilmiş ve seri olarak, tipik olarak akış sitometrisi ile hücrelerin ve fraksiyonlama alt grupları antikor etiketleme yoluyla, bağışıklık yetersizliği olan farelerde yayılır edilmiştir. Bununla birlikte, prostat kanseri benzersiz klinik özellikleri önemli ölçüde taze insan tümör örneklerinden prostat CSCS olan çalışma sınırlıdır. Yakın zamanda, HLA sınıf I (HLAI)-negatif fenotipi nedeniyle, doğrudan insan dokularından prostat CSCS izolasyonunu bildirdi. Prostat kanser hücreleri cerrahi örneklerden hasat edilir ve mekanik olarak ayrıştırılırlar. Bir hücre süspansiyonu üretilir ve floresan konjuge HLAI ve stromal antikorlar ile etiketlenir. HLAI-negatif hücrelerin alt grubu son olarak bir akış sitometrisi kullanılarak izole edilmiştir. Bu protokolün başlıca sınırlaması sık mikroskobik ve multifokal doğaprostatektomi örneklerinde primer kanser. Bununla birlikte, izole edilmiş canlı prostat CSCS bağışıklık yetersizliği olan farelerde nakli ile moleküler karakterizasyonu ve fonksiyonel doğrulama için uygundur.
Giriş
Tümör içine heterojenlik kanser 1 ayırt edici bir özelliği olarak kabul edilir. Gerçekten de, tümör heterojenite çeşitli mekanizmalar genetik mutasyon ve mikro etkileşimler de dahil olmak üzere tarif edilmiştir. Buna ek olarak, bazı kanser türleri seri nakli deneylerinde 2-5 tümör başlatıcı kapasitesi ve kendini yenileme özelliklerini sergileyen kanser kök hücreleri (rulmanları) bir alt popülasyonunun bir hücresel hiyerarşisi içerebilir. Başlangıçta hematolojik 6, meme 7, 8 ve beyin habis de tarif CSCS aynı zamanda prostat kanseri 9-12 hem de diğer tümör tipleri 2-5 incelenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1.. Hasat ve Cerrahi Örneklerinin İnsan Prostat Kanseri Doku İşleme
- Roswell Park Memorial Institute (RPMI),% 10 fetal sığır serumu (FBS) ve% 1 penisilin / streptomisin ile takviye edilmiş 1640 kültür ortam maddesi içinde 15 ml içeren iki 50 ml konik polistiren tüpler hazırlayın.
- Patoloji servis personeli protokolü onaylanan Kurumsal Değerlendirme Kurulu altında sırasıyla prostatektomi ve palyatif cerrahi örneklerinden primer ve metastatik prostat kanseri örnekleri, hasat. Metastatik örnekleri birincil, ameliyat sırasında lenf düğümü kesitlerden elde edilebilir, diğerleri arasında, bir metastatik lezyonların teşhis çıkarılması esnasında palyatif c....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Şekil 1. İnsan prostat kanseri tümörü hasat ve bir insan prostat kanseri belirli popülasyonlarının arsa görüntüleyen akış sitometrisi. (A) Tümör nodülleri bir hücre süspansiyonu üretmek için hasat edilir. Işlenmiş örnek Tümör içeriği, geleneksel hematoksilen ve eozin boyama ile teyit edilir. DAPI için pozitif boyanan
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu protokol, taze insan prostat kanseri dokulardan CSCS izolasyonunu tarif eder. Birçok önemli hususlar bu protokolün başarılı sonucunu etkiler.
Uygun bir prostat kanseri hücrelerinin yüksek sayıda geri kazanım Cerrahi numunelerin dikkat brüt değerlendirmesine bağlıdır. Makroskopik tümör nodüller gözlendi ve 10 işlendiğinde bizim deneyim, tümörijenik prostat hücrelerinin başarılı izolasyonu iyi sağlanır.
Bununla birlikte, prostatektomi örneklerden elde.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Bu çalışma Hariri Ailesi Vakfı ve TJ Martell Vakfı tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| RPMI | Gibco Yaşam Teknolojileri | 11875-093 | |
| Fetal sığır serumu | Gibco Yaşam Teknolojileri | 10437-028 | |
| Penisilin Streptomisin | Gibco Yaşam Teknolojileri | 15140-122 | |
| PBS | Corning Hücre Gro | 21-031-CM | |
| 60 mm, 15 mm Hücre kültürü kabı | Corning | 3295 | |
| 35 & mikro; m Hücre Süzgeci | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml konik tüp | Crystalgen | 23-2263 | |
| 15 ml konik tüp | Crystalgen | 23-2265 | |
| Kırmızı kan hücresi parçalama tamponu | Sigma | R7757 | |
| HLA sınıf I (W6 / 32) PE antikoru | Abcam | ab43545 | |
| CD31 FITC antikoru | eBioscience | 11-0319-42 | |
| CD45 FITC antikoru | Abcam | ab27287 | |
| IgG2aκ PE antikoru | BD Eczacızojen | 555574 | |
| IgG1κ FITC antikoru | BD Pharminogen | 551954 | |
| DAPI | Invitrogen | d3571 | |
| 12 mm x 75 mm Hücre süzgeç kapaklı polistiren tüpler | BD Falcon | 352235 | |
| Vorteks Karıştırıcı | Crystalgen | CG-BV1000 | |
| %10 Nötr Tampon Formalin | Fisher | RBBP-0480 |
Kaynaklar
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. Hallmarks of cancer: the next generation. Cell. 144, 646-674 (2011).
- Magee, J. A., Piskounova, E., Morrison, S. J. Cancer stem cells: impact, heterogeneity, and uncertainty. Cancer Cell. 21, 283-296 (2012).
- Nguyen, L. V., Vanner, R., Dirks, P., Eaves, C....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
