A retina de roedores tem sido reconhecida como uma janela de acesso para o cérebro. Neste documento técnico que proporcionam um protocolo que utiliza o modelo de ratinho de retinopatia induzida por oxigénio para estudar os mecanismos que levam à insuficiência de regeneração vascular dentro do sistema nervoso central após a lesão isquémica. O sistema descrito também pode ser aproveitada para explorar estratégias para promover o crescimento de vasos sanguíneos funcionais dentro da retina e do SNC.
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Artigo de método
Assessment of Vascular regeneração no SNC Usando o rato Retina
Neste artigo
Resumo
Resumo
A retina roedor é, talvez, o sistema de mamífero mais acessível que a investigar interacção neurovascular dentro do sistema nervoso central (SNC). É cada vez mais reconhecido que várias doenças neurodegenerativas, como a doença de Alzheimer, esclerose múltipla e esclerose lateral amiotrófica apresentam elementos de comprometimento vascular. Além disso, as causas mais importantes de cegueira em populações pediátricas e de trabalho idade (retinopatia da prematuridade ea retinopatia diabética, respectivamente) são caracterizadas por degeneração vascular e insuficiência de rebrota vascular fisiológico. O objetivo deste documento técnico é fornecer um protocolo detalhado para estudar a regeneração vascular CNS na retina. O método pode ser utilizado para elucidar os mecanismos moleculares que conduzem à falha de crescimento vascular após lesão isquémica. Além disso, possíveis modalidades terapêuticas para acelerar e restaurar plexos vasculares saudáveis podem ser exploradas. Achados obtained utilizando a abordagem descrita pode fornecer meios terapêuticos para retinopatias isquêmicas, tais como diabetes ou que de prematuridade e possivelmente beneficiar outros distúrbios vasculares do SNC.
Introdução
Ao longo do desenvolvimento do SNC, nervos, células do sistema imunológico e vasos sanguíneos estabelecer redes notavelmente acoplados para garantir adequada perfusão tecidual e permitir a transmissão de informações sensoriais 1-5. O colapso dos sistemas vascular resulta na oxigenação dos tecidos ea oferta insuficiente metabólica comprometida e é cada vez mais reconhecida como um importante contribuinte para a patogênese de doenças neurodegenerativas 6. Abandono vascular e a deterioração da unidade neurovascular dentro do cérebro, por exemplo, está associado com a demência vascular, lesões vasculares da matéria branca do cérebro 7 e d....
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Protocolo
Declaração de Ética: Todos experimentação animal adere as diretrizes de cuidados de animais estabelecidas pela Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia (ARVO) Declaração para o uso de animais em Ophthalmic and Vision Research e pelo Conselho Canadense de Cuidado Animal.
1. Oxigênio Induzida Retinopatia (OIR)
- Registar a data de nascimento de filhotes de rato como P0.
- Registre todos os pesos dos animais aquando da entrada em O 2 para garantir uma faixa de peso adequado. Nota: Para C57BL / 6 ratos em P17, o peso corporal deve variar entre 5 e 7,5 g de NV máxima 32. A fim de ma....
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Resultados
O modelo OIR é amplamente utilizada para estudar a degeneração vascular induzida por oxigênio e neovascularização patológica induzida por isquemia na retina e tem sido fundamental para o desenvolvimento de tratamentos atualmente empregados anti-angiogênicos para doenças oculares 27, 29, 30. Os resultados obtidos com este modelo pode ser vagamente extrapolados para retinopatias isquêmicas, como a retinopatia diabética proliferativa e retinopatia da prematuridade 30.
Aqui.......
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Discussão
Qual é a maneira mais eficaz de estimular o crescimento de novos vasos saudáveis no tecido nervoso isquêmico? É terapeuticamente válida para interferir e acelerar ocorrem naturalmente rebrota vascular? Em patologias neuro-isquêmica, como retinopatias isquêmicas ou acidente vascular cerebral, degeneração vascular está associado à redução da função neuronal 35-38. Daí para combater lesão precoce, restabelecendo micro-circulação regional durante o segmento de imediato / precoce da doença pode ser benéfico. Em .......
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Divulgações
Os autores não têm nada a revelar.
Agradecimentos
PS tem um Canada Research Chair em Biologia Celular da retina e do Instituto de Pesquisa Alcon New Investigator Award. Este trabalho foi financiado por subvenções dos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (221.478), a Canadian Diabetes Association (OG-3-11-3329-PS), Ciências Naturais e do Conselho de Pesquisa do Canadá Engenharia (418637) e A Fundação Fighting Blindness Canadá. O suporte também foi fornecido pelo Réseau de Recherche en Santé de la Visão du Québec.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Camundongos C57Bl/6 (Outras cepas podem ser usadas; a resposta angiogênica varia de uma cepa para outra) | |||
| Mães que amamentam CD1 | Fornecedor de escolha | ||
| Tesoura de operação reta | World Precision Instruments | 14192 | |
| Tesoura de dissecação reta | World Precision Instruments | 14393 | |
| Tesoura de olho Vannas | Pinça de | Harvard Apparatus 72-8483 | |
| , curvada, serrilhada | Escovas World Precision Instruments | 15915 | |
| 362R tamanho 0 | Pinça Dynasty | ||
| Dumont #3; reta | World Precision Instruments | 500338 | |
| Lâmina Cirúrgica, tamanho 10 | Bard-Parker | 371110 | |
| Rhodamine Griffonia (Bandeiraea) Simplicifolia Lectin I | Vector Laboratories, Inc | RL-1102 | |
| Lâminas de microscópio | VWR | 16004-368 | |
| Fluoromount G | Microscopia Eletrônica Sciences | 17984-25 | |
| Zeiss Axio Observer Z1 Microscópio de Fase Invertida e Fluorescência | Zeiss | ||
| Leica MZ9.5 Estereomicroscópio | Leica | ||
| Isoticianato de fluoresceína-dextrano, 70000 | Sigma-Aldrich | 46945 |
Referências
- Carmeliet, P., Tessier-Lavigne, M. Common mechanisms of nerve and blood vessel wiring. Nature. 436, 193-200 (2005).
- Eichmann, A., Thomas, J. L. Molecular Parallels between Neural and Vascular Development. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, (2012).
- Larrivee, B....
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Reimpressões e permissões
