Une modification<em&gt; In vitro</em&gt; Invasion Test pour déterminer le rôle potentiel des hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance dans le cancer Médiation invasion cellulaire

Résumé

Cet article vidéo décrit une méthode in vitro modifiée pour examiner le rôle des hormones, des cytokines et/ou des facteurs de croissance dans l’invasion des cellules cancéreuses.

Résumé

Le sérum sanguin sert de chimioattractant vers laquelle les cellules cancéreuses migrent et envahissent, ce qui facilite leur intravasation en microvaisseaux. Cependant, les molécules réelles vers lequel les cellules migrent demeurent insaisissables. Ce test d'invasion modifié a été mis au point pour identifier les cibles qui entraînent la migration et l'invasion cellulaire. Cette technique compare l'indice d'invasion dans trois conditions pour déterminer si une hormone spécifique, le facteur de croissance ou cytokine joue un rôle dans la médiation le potentiel invasif d'une cellule cancéreuse. Ces conditions comprennent i) de sérum fœtal bovin normal (FBS), ii) charbon-FBS (CS-FBS), qui supprime les hormones, les facteurs de croissance et des cytokines et iii) molécule CS-FBS + (notée "X"). Un changement important dans l'invasion des cellules CS-FBS avec par rapport à FBS, indique l'implication des hormones, des cytokines ou des facteurs de croissance dans la médiation de la modification. Les molécules individuelles peuvent ensuite être ajoutés revenir à CS-FBS pour doser leur capacité à reverset ou sauver le phénotype d'invasion. En outre, deux ou plusieurs éléments peuvent être combinés pour évaluer l'effets additifs ou synergiques de plusieurs molécules dans la conduite ou l'inhibition de l'invasion. Dans l'ensemble, ce procédé permet au chercheur de déterminer si les hormones, les cytokines et les facteurs de croissance / ou jouent un rôle dans l'invasion cellulaire en agissant comme agents chimio-attractifs ou des inhibiteurs de l'invasion d'un type particulier de cellule cancéreuse ou un mutant spécifique. En identifiant chimiotactiques et des inhibiteurs spécifiques, ce dosage d'invasion modifié peut aider à élucider les voies qui dirigent l'invasion des cellules du cancer de signalisation.

Introduction

Un nouveau dosage d'invasion a été développé dans le but d'identifier l'implication de certaines hormones, des cytokines et / ou facteurs de croissance chimiotactiques comme dans l'invasion des cellules cancéreuses. La capacité des cellules tumorales à envahir à travers la matrice extracellulaire (ECM) est une caractéristique du phénotype métastatique ^3.1. chambres d'invasion ont été largement utilisés comme outils pour étudier in vitro l'invasion des cellules cancéreuses et la migration et peuvent fournir des connaissances sur les mécanismes de l'invasion et la métastase tumorales in vivo. Les chamb....

Protocole

1. Préparer les différents médias et Composants supplémentaires

1. Avant l'expérience, préparer des milieux consistant en DMEM ou un autre support spécifiés avec l'addition de FBS soit normale, FBS charbon de bois, charbon ou FBS plus le composant à tester. Notez que plusieurs composants peuvent être testés dans chaque expérience.
2. Peser et diluer les hormones, les facteurs de croissance, cytokines ou de façon appropriée pour être dissous dans le sérum dépouillé de charbon de bois à la concentration physiologique.

2. Préparer la Matrice Collagène on Ice

1. Préparation 2 ml collagène I matrice, à 2,2 ....

Résultats

L'indice d'invasion est calculé pour chaque condition de normalisation selon l'une lignée cellulaire non invasive. Pour les expériences, on utilise la ligne 1205Lu cellulaire de mélanome et les lignées cellulaires stables variantes établi comme nos lignes envahissantes ainsi que la variante non invasive prémalignes, WM793 partir duquel les cellules ont été dérivées 1205Lu ¹⁰ qui sert de contrôle logique. Nous utilisons également collagène I que la matrice d'invasion parce que ce est le composa.......

Discussion

Tumeur métastase est un processus en plusieurs étapes. Les cellules doivent franchir la membrane basale, intravasate soit dans le système lymphatique ou le sang microvaisseaux, dans lesquels ils sont transportés à des sites distants. Les cellules tumorales puis extravasent et colonisent dans un macrométastase ^12. La progression à travers la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT), l'invasion tumorale et la métastase a été renforcée par des hormones stéroïdes ^13,14, les facteurs de croissance.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Inserts de contrôle BioCoat avec 8.0 & micro ; m membrane PET	Corning	354578	12 dans chacune des deux plaques de 24 puits. PET = polyéthylène téréphtalate
Collagène I, queue	de rat Corning	354236	Source = tendon de queue de rat, pureté = 90 %
Fixateur ; Diff-Quick	Thermo Fisher Scientific	NC9844047	Fixateur à base de méthanol, hématoxyline/éosine
Sérum fœtal	bovin Life Technologies	16000	Désigné comme FBS
Sérum fœtal bovin dépouillé de charbon de bois	Life Technologies	12676	Désigné comme CS-FBS
Sérum fœtal bovin	Thermo Scientific Hyclone	SH30070	Désigné comme FBS
Sérum fœtal bovin dénué de charbon de bois	Thermo Scientific Hyclone	SH30068	Désigné CS-FBS