ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Summary
Mikrodissektion er blevet grundigt ansat til undersøgelse af DNA, RNA og protein i vævet. Laser capture mikroskopi (LCM) er den mest anvendte metode, men en ny fræsning teknik, mesodissection, er for nylig tilgængelig. Vi viser RNA ekstraktion fra mesodissected formalin fast paraffin indlejret vævsobjektglassene af Mycobacterium tuberculosis granulomer.
Abstract
Mikrodissektion har været anvendt til undersøgelse af væv på DNA, RNA og protein niveau i over et årti. Laser-mikroskopi (LCM) er den mest almindelige mikrodissektion teknik anvendes i dag. I denne teknik, er en laser, der anvendes til focally smelte en termoplastisk membran, der ligger over en dehydreret væv § 1. Den sammensatte vævssnit løftes derefter og adskilles fra membranen. Selv om denne teknik kan anvendes med succes til vævsundersøgelse, det er tidskrævende og dyrt. Desuden den vellykkede afslutning af procedurer ved hjælp af denne teknik kræver brug af en laser, hvilket begrænser dets anvendelse. En ny og mere overkommelige og praktisk mikrodissektion model kaldet mesodissection er en mulig løsning på faldgruberne i LCM. Denne teknik anvender MESO-1/MeSectr systemet mølle det ønskede væv fra et dias monteret vævsprøve mens samtidig dispensering og aspiration af væske til at genoprette den ønskede vævsprøve inden forbrugsvare mølle bit. Før dissektion proces begynder, brugeren justerer formalinfikseret paraffin indlejret (FFPE) glide med en hæmatoxylin og eosin farves (H & E) henvisning dias. Derefter operatøren annotates det ønskede dissektion området og provenuet til at dissekere den relevante kategori. Programmet genererer en arkiveret billede af dissektion. Den største fordel ved mesodissection er den korte varighed nødvendigt at dissekere et objektglas, idet et gennemsnit på ti minutter fra sat op til at prøve generation i dette eksperiment. Derudover er systemet betydeligt mere omkostningseffektiv og brugervenlig. En lille ulempe er, at det ikke er så præcis som laser-mikroskopi. I denne artikel vil vi vise, hvordan mesodissection kan bruges til at udtrække RNA fra lysbilleder fra FFPE granulomer forårsaget af Mycobacterium tuberculosis (Mtb).
Introduction
Prøver har traditionelt været manuelt mikrodissekeres fra enten hele væv eller dias ved hjælp af en nål og skalpel. Dette nødvendiggør en klar adskillelse mellem vævssnittet af interesse og omgivende væv afsnit 2. Med de nuværende fremskridt inden for molekylær profilering teknologi, har der været et stigende behov for at vurdere væv på celleniveau. På grund af de begrænsninger af manuelle mikrodissektion blev teknikker, herunder LCM oprettet for at give mulighed for større isolation præcision. Denne teknik gør det muligt for forskeren at isolere bestemte cellepopulationer fra forskellige celle-og slide-typer, som derefter kan bruges til efterfølgende analyser såsom genekspression profilering. Selvom meget effektiv til downstream analyser, LCM er ikke uden begrænsninger. Først LCM er en dyr og tidskrævende proces. Derudover, på grund af den ustabile natur af RNA, er det ofte en udfordring at opnå en høj kvalitet RNA fra LCM prøverne 2. På grund af den disadvantages af LCM er nye fremskridt inden mikrodissektion teknologi stadig behov for at gøre det mere tilgængeligt for et større antal forskere i en overkommelig og tid følsom måde.
En sådan avancement i mikrodissektion teknologien nu til rådighed, er en teknik kendt som mesodissection. I denne teknik en maskine der bruges til mølle den kommenterede vævssnittet af interesse og aspirerer det ind i en forbrugsvare mølle bit 3. Dernæst kan denne prøve blive suget ind i et opsamlingsrør og anvendes til efterfølgende anvendelser. Fordelene ved dette system er, at det er betydeligt billigere og tidsfølsomme. Det er vores erfaring, at systemet giver mulighed for dissektion af en lunge granulom vævssnit i ti minutter. På den anden side ville traditionelle LCM sandsynligvis kræve timer at fuldføre processen. Systemet gør det muligt for operatøren at indlæse en henvisning dias til at bruge som en sammenligning samt værktøj til anmærkning. Derudover en rapport genereres skitserer the område af dias, der blev dissekeret. Der er to primære ulemper mesodissection. Skønt effektiv til at ekstrahere flere celler er det udfordrende at isolere en enkelt celle. Hertil kommer, at præcisionen af billedet genereret er ikke så klar, som hvis du bruger andre billeddiagnostiske mikroskoper.
Tuberkulose (TB) er en stor smitsom sygdom dræber af hele menneskeheden og resultater fra infektion med Mtb. I et flertal af personer udsat for aerosoler af Mtb er infektionen latent begrænset. I mindst 10 millioner mennesker om året, resulterer det i aktiv TB sygdom 4. Under latent infektion er Mtb indeholdt i patologiske lungelæsioner kendt som granulomer. Derfor er det blevet hævdet, at udfaldet af Mtb infektion besluttes på niveau med granuloma 5..
Her viser vi, hvordan mesodissection kan bruges til at microdissect granulomer forårsaget af Mtb. De slides anvendteer fra FFPE lungevæv fra inficerede makakaber. Med henblik på denne demonstration vil vi dissekere granulomer i deres helhed. Vi viser også, at RNA kan ekstraheres fra det udvundne væv. Denne teknik kan anvendes på vævsprøver fra forskellige andre enheder og derefter anvendes til en række efterfølgende assays.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1.. Kalibrer Mesodissection instrumentet med 2iD billedbehandlingssoftware
Den 2iD imaging software vil blive omtalt som enten software eller programmet for resten af denne artikel. Dette trin er nødvendigt for korrekt spore billedet samt justere flere slide rammer.
- Tænd instrument og computer.
- Open software og vælg "Kalibrer instrumentet".
- Kalibrer scene rejse ved hjælp af joysticket. Flyt scenen til øverste venstre position. Tryk på "set" under trin 1 i programmet.
- Flyt scenen til nederste højre position. Tryk på "set" under trin 2 i programmet.
- Kalibrer aspiration ved først at trykke på "Z-knappen" for at hæve hovedet forsamling. Tryk på "aspirat pulse" knappen og "dissektion" knappen på joysticket indtil stemplet styrestang når øverste position. Tryk på "set" under trin 3 i programmet.
- Tryk på "aspirere reset &# 8221; knappen. Når stemplet stopper i bunden position Tryk på "SET" i trin 4..
- Klik på fanebladet "målestok".
- Placer kalibrering lineal på blanke side.
- Fokus mikroskop, hvis nødvendigt.
- Tegn linje mellem de to skala bjælker med musen.
- Indtast distance under feltet trin 2. Tryk på "beregne" knappen..
- Klik på fanebladet "sigtekorn". Drej motorens hastighed til 1.
- Indsæt xScisor i hoved forsamling. Lavere hoved samling i z-aksen klarstilling ved at trykke på "z-akse"-knappen. BEMÆRK: Hovedet forsamling er den store struktur på toppen dissektion instrument. Den xScisor vil blive omtalt som en forbrugsvare mølle lidt for resten af denne artikel.
- Klik på "dissektion engagere" knappen på joysticket. BEMÆRK: Denne knap er placeret på toppen af joysticket.
- Definer omdrejningspunkt visuelt. For at gøre dette, flytte centrum af trådkorset løbet omdrejningspunkt hjælp definered parameter i trin 1 i programmet. Brug op-og ned-pilene i "x" og "y-aksen" barer til at justere pixels til at justere trådkorset. Klik på "Done"-fanen.
- Klik på "hjem"-ikonet. BEMÆRK: Dette er repræsenteret ved et hus billede placeret i øverste højre hjørne.
2.. Opret Referencebillede
- Placer H & E slide på scenen. Placer uigennemsigtig dækning på toppen af dias. Kør instrumentet ved at bevæge joysticket til det ønskede område af H & E dias. Gem billedet genereres. BEMÆRK: Enten fanebladet "capture henvisning" eller fanen "dissekere" kan bruges til at udføre dette trin.
3.. Juster Væv til Dissection
- Klik på "dissekere væv" option på startskærmen.
- Udfylde "operatør", "dissektion tiltrædelse nummer", "henvisning tiltrædelse nummer", "xScisor stregkode nummer," & #8220, dissektion væske lotnummer "," xScisor size "og" Beskrivelse "i fanebladet" setup ".
- Klik på "find væv" fanen.
- Import tidligere henvisning billede gemmes.
- Placer en ufarvet FFPE slide af 5 micron tykkelse på scenen. Flyt stadie til det samme område som den ene afbildet i reference billedet. Klik på fanebladet "Indsæt billede".
- Klik på fanebladet "tilpasse". Brug musen og tilhørende pile at tilpasse henvisningen billedet til uplettet image.
4.. Anmærke Slide
- Klik på fanebladet "anmærke".
- Brug musen til at tegne en cirkel omkring det ønskede område af dias, der vil blive mikrodissekeres.
5.. Load Forbrugsmaterialetype Mill Bit
- Fyld forbrugsmaterialer mølle bit med den ønskede puffer, her PKD buffer, ved at trække stemplet op og ned i en flydende bevægelse flere gange. Sørg for at udelukke luftbobler.
- Hæv Z-aksen ved at trykke på "Z-akse" knappen.
- Load forbrugsmaterialer mølle bit i maskinen. Gør dette ved at skubbe forbrugsmaterialer mølle bit ind i toppen af maskinen, så den hvide linje på instrumentet linjer op med den sorte linje på forbrugsmaterialer mill bit. Tryk på "aspiration reset"-knappen for at tillade stemplet at blive sænket ned i den korrekte position. BEMÆRK: Det skal være nemt at skubbe forbrugsmaterialer mill bit. Hvis det ikke er, så sørg for hakkene er justeret korrekt.
- Lavere Z-aksen ved igen at trykke på "Z-akse"-knappen.
Skær Tissue 6. (Figur 4)
- Åbn fanebladet "dissekere".
- Drej motor-og aspiration hastigheder til 1.
- Check "show sporing" boksen. Bemærk: Dette giver brugeren mulighed for at visualisere det dissekerede området under dissektion processen.
- Når klar til at dissekere, fortsætte med at holde knappen "engagere" samt "aspirat & #8221; knap, mens du bevæger joysticket i retning mod uret for at dissekere væv.
- Fortsæt med at dissekere i retning mod uret, indtil aspirat er "fuld" fanen rødt.
7.. Tøm og fjern Forbrugsmaterialetype Mill Bit
- Placer en 0,5 pi mikrofugerør under spidsen af den spiselige mill bit.
- Tryk på "aspiration" styrestangen hurtigt at skubbe prøven i mikrofugerør.
- Tryk med øget kraft til at skubbe brugte forbrugsstoffer mill bit.
- Skyl vævsfragment ved at trække stemplet tilbage. Skub stemplet frem for at udtrykke resterende prøve i forbrugsmaterialer mill bit. Den vævsfragment vil nu blive indeholdt i mikrofugerør.
8.. Lyse prøve med proteinase K fordøjelse efterfulgt af varmebehandling
- Tilføj 70 pi TE pH 8,5 indeholdende 5 ug proteinase K til genvundet vævsprøve.
- Anbring prøven i programmerbar radiator-shaker.
- Komplet fordøjelse ved hjælp af programmerbar radiator-shaker ved følgende indstilling: 60 ˚ C i 30 min ved 1500 rpm; 82 ˚ C i 15 min ved 1500 rpm; og 25 ˚ C i 1 min ved 450 rpm. Prøven er nu klar til downstream-applikationer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den førnævnte protokol viser, hvordan man bruger en ny mesodissection teknik til at udtrække RNA fra FFPE vævsobjektglassene. Denne protokol effekt af vises gennem FFPE lysbilleder af lunge granulomer fra NHP inficeret med Mtb i forskellige infektiøse stadier. Figur 1-3 er billeder af instrumentet. Figur 4 viser, hvordan dissektion proces sker, og det resulterende billede genereres af softwaren. Tabel 1 , viser resultaterne af RNA ekstraktion med et granulom fra en NHP ved hver infektiøse stat. RNA blev amplificeret og oprenset til at give mulighed for RT-PCR bevis for 16s (tabel 2-4). Tabel 4 bekræfter tilstedeværelsen af Mtb ribosomale subunit 16s og dermed Mtb i de Mikrodissekterede prøver.
Figur 1.. Billede af mesodissection instrument, herunder joystick. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2.. Tættere visning af mesodissection instrument. "Z-aksen" knappen, "motor" hastighed og "aspiration" speed knopper vises på venstre side af billedet. Den "Aspiratoren reset-knappen" og "on / off"-knappen vises til højre side af billedet. Det dias fase er på toppen af instrumentet. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3.. Tættere visning af joysticket. Joysticket "aspirer puls" og "scene hastighed" knapper er vist. Klik her for at se en større version af dette tal.
Rapport fra hele granulom mesodissected fra NHP EB23 Figur 4... Dyr anvendt i denne undersøgelse blev smittet med CDC1551 Mtb via aerosol. Henvisningen Billedet til venstre viser en H & E farvet granuloma fra en aktivt smittet rhesus makak. Det ønskede område af interesse, der skal dissekeres er skitseret i grøn. Billedet i midten shows den tilsvarende uplettet FFPE slide af 5 micron tykkelse før dissektion. Områderne blev justeret ved hjælp af softwaren og korrelere område af interesse er skitseret i grønt. Billedet til højre viser den samme uplettet FFPE slide indlæg dissektion. Området dissekeret er repræsenteret i blåt. A 400 mm 2 forbrugsmaterialer mølle bit blev brugt til dissektion, som er designet til travers dissektion af mellemstore til store dissektion område. Stort dissektion område er beskrevet som mindre end 100 mm 2. Størrelser beregnet til andre områder / dissektion typer er tilgængelige. Selvom rapporten beskriver den kommenterede område som 0 mm 2, dette er unøjagtige. Når vi fjerner mikrodissekeres dias fra maskinen og fysisk se på området af interesse i sig selv, kan vi se det tilsvarende område på det dias, der ikke længere har væv, og derfor er blevet dissekeret. Det bør bemærkes, at forfatterne lejer instrumentet og dette problem er blevet løst på anden instrumeNTS. Klik her for at se en større version af dette tal.
| Primate | Inficeret stat | RNA-koncentrationen i ng / pl | Total RNA i ng | 260/280 | 260/230 |
| EB23 | Aktiv | 48.3 | 724,5 | 1,71 | 1,59 |
| HB12 | Latent | 61,4 | 921 | 1.7 | 1,86 |
| HP41 | Reaktiveret gennem co-infektion med SIV | 22.3 | 334.5 | 1.9 | 2.18 |
Tabel 1.. RNA-koncentrationer poste ekstraktion. Prøven blev DNAsed og RNA-ekstraktion blev udført under anvendelse af Qiagen RNAeasy FFPE kit. RNA concentration blev opnået ved hjælp af en NanoDrop. NHP infektive stadier er også afbildet. RNA blev elueret i 15 ul RNAse frit vand.
| Primate | Inficeret stat | cDNA koncentrationen i ng / ul | Total cDNA i ng | 260/280 | 260/230 |
| EB23 | Aktiv | 31.7 | 951 | 2,08 | 2,37 |
| HB12 | Latent | 156,5 | 4695 | 1,94 | 4.4 |
| HP41 | Reaktiveret gennem co-infektion med SIV | 41,7 | 1251 | 2,19 | 3,44 |
Tabel 2.. CDNA-koncentrationer poste forstærkning og rensning. NHP infektiøse stadier er også afbildet. RNA blev amplificeret under anvendelse af Ovation RNA-Seq FFPE System (Part no. 7150), og deraf forstærket cDNA blev oprenset ved anvendelse af QIAGEN QIAquick PCR Purification Kit som foreslået af Nugen på side 26 i forstærkning systemets brugervejledning. cDNA blev elueret i 30 ul TE-buffer.
| Godt | Reporter | Ct | Tm værdi |
| 16S 10-1 | Standard | 12,35138 | 79,4 |
| 16S 10-2 | Standard | 16.144611 | 79,4 |
| 16S 10-3 | Standard | 17.911345 | 79,4 |
| 16S 10-4 | Standard | 21.762596 | 79,4 |
| 16S 10-5 | Standard | 25.746624 | 79,4 |
| 16S 10-6 | Standard | 28.505266 | 79,1 |
| HB12 | Ukendt 25.771492 | 77.8 | |
| HP41 | Ukendt | 17.760149 | 78 |
| EB23 | Ukendt | 24.754618 | 78.2 |
| Negative Control | NTC | 33.544422 | 79,7 |
Tabel 3.. RT-PCR resultater med hensyn til 16s ribosomale underenhed. Passende forstærkning observeret dermed bevise tilstedeværelsen af Mtb inden prøver. Genomisk DNA fra CDC1551 stamme Mtb blev anvendt som en standard.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mesodissection er en teknik, der kan anvendes til RNA ekstraktion fra patologiske læsioner dias forårsaget af en bred vifte af patogener. Det er en nødvendighed, at brugeren sporer billede og justerer billedet korrekt. For at opnå dette, skal instrumentet kalibreres efter anvisningerne på imaging software. Ved dissekering, hvis det dias og interesseområde bliver dissekeret ikke justere, skal brugeren kalibrere instrumentet. Et andet afgørende skridt i dissektion processen er at indlæse forbrugsmaterialer mølle lidt på en sådan måde, at det er blottet for bobler før dissektion (Trin 5.1). Vi har fundet, at tilstedeværelsen af bobler formindsker dissektion udbytte. For at rette dette problem, anbefaler vi fremdriver og udtrykke stemplet flere gange. Brugeren kan øve dette ved at tilføje levnedsmiddelfarvestof en praksis buffer at visualisere bobler, som anbefalet af fabrikanten. Når effektivt, skal brugeren derefter fortsætte med normal dissektion. LAst afgørende skridt er at dissekere prøven i retning mod uret. Maskinen møller i retning mod uret; Derfor har vi fundet, at flytte joysticket i en cirkulær bevægelse mod uret måde øger væv udbytte som de førende kantsnittene mere rent end bagkanten 6. En anden måde at forbedre væv udbytte er at nedsætte hastigheden af dissektion processen. Vi har fundet, at indstille aspiration sats og motorens hastighed på den laveste hastighed samtidig sætter scenen hastigheden til "lav" producere den højeste væv udbytte. Der er to væsentlige begrænsninger i denne mikrodissektion tilgang. Den første begrænsning er, at vi har fundet punkt dissektion meget udfordrende på grund af behovet for at drive joysticket i uret kredse i dissektion processen. Den anden begrænsning er, at kameraet på instrumentet genererer et billede, der mangler cellulære detaljer af et billede genereret fra en avanceret mikroskop.
Mtb. Granuloma formation er kendetegnende for TB infektion og resultaterne fra værtens forsøg på at indeholde patogenet inden for et begrænset område af lungen 5. Omvendt er det blevet foreslået, at Mtb har udviklet sig til at tillade dets persistens i granulomatøse læsioner 7. Mtb udsættes for forskellige belastninger, afhængigt af den fase af infektionen. Nogle af disse spændinger indbefatter, men er ikke begrænset til redoxstress, lav pH membran skader, hypoxi, mangel på ernæring osv 7-13. Gennem disse forskellige faser kan Mtb stadig overleve i en latent form og endda genaktivere. Det betyder, at forskellige gener opreguleres og nedreguleres på forskellige infektiøse stadier. For eksempel Mtb koder for over 200 transkriptionsfaktorer 4. Desuden er det blevet vist, at balancen ekspression mellem forskellige chemokiner, such som α og β kemokiner i granuloma kan være vigtige markører beskyttelse 8. Evaluering af mycobakterielle transcriptomics i granulomatous væv er egnet til at fremme vores forståelse af de involverede i deres dannelse mekanismer og vedligeholdelse samt de gener, der er udtrykt i hver stat af infektionen. Dette vil give os mulighed for at evaluere mycobakterielle transcriptomics i forskellige TB infektiøse stadier, herunder aktiv, latent og genaktiveret sygdom samt forskellige regioner i granuloma selv. Ud over at tillade os for yderligere at vurdere mycobakterielle transcriptomics, ovennævnte procedure også mulighed for vurdering af værten transcriptomics i de samme infektiøse tilstande. Desuden er denne fremgangsmåde kan derefter bruges til at sammenligne, kontrast og analysere forholdet mellem vært og bakterier.
Selv et vigtigt redskab i tuberkulose, kan den førnævnte protokol anvendes på andre patogener som godt. OvenståendeProtokollen anvender FFPE slides fra inficerede lunge prøver, men kan også anvendes på læsioner fra andre organer. Vi viser, hvordan man bruger systemet til at udtrække RNA, men det kan i teorien bruges til DNA-og protein udvinding i en lige så effektiv og tid følsom måde. FFPE blokke er tilgængelige i de fleste laboratorium histologi afdelinger; derfor her beskrevne teknik har mulighed for eksponentielt stigende viden fra disse nuværende uudnyttede prøver.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne beskriver, at der ikke er nogen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne anerkende følgende NIH uddeler / subawards til støtte af denne forskning: R01HL106790, R01HL106790-S1, R01HL106786, R01AI089323, R21AI091457, R21RR026006, P20RR020159, C06RR017563, 8T32OD011124-08, og P51OD011104.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MeSectr | AvanSci Bio | Mesodissector | |
| 400 nm xScisors | AvanSci Bio | Other sizes available | |
| THOR | AvanSci Bio | Programmable Heater-Shaker | |
| NanoDrop2000 | ThermoScientific | ND-2000 | |
| RNeasy FFPE extraction kit | Qiagen | 73504 | |
| Ovation RNA-Seq FFPE System | Nugen | 7150 | |
| QIAquick PCR Purification Kit | Qiagen | 28104 |
References
- Fend, F., Raffeld, M. Laser capture microdissection in pathology. J Clin Pathol. 53 (9), 666-672 (2000).
- Esposito, G. Complementary techniques: laser capture microdissection--increasing specificity of gene expression profiling of cancer specimens. Adv Exp Med Biol. 593, 54-65 (2007).
- Adey, N., Bosh, D., Emery, D., Birch, L., Parry, R. Mesodissection of Paraffin Embedded Slide Mounted Tissue Sections. Journal of Molecular Diagnostics. 14 (6), (2012).
- Fleischmann, R. D., Alland, D., Eisen, J. A., Carpenter, L., White, O., Peterson, J., et al. Whole-genome comparison of Mycobacterium tuberculosis clinical and laboratory strains. J Bacteriol. 184 (19), 5479-5490 (2002).
- Russell, D. G., Barry 3rd, C. E., Flynn, J. L. Tuberculosis: what we don't know can, and does, hurt us. Science. 328 (5980), 852-856 (2010).
- Mesodissection of fibrous tissue. AvanSciBio. , (2013).
- Paige, C., Bishai, W. R. Penitentiary or penthouse condo: the tuberculous granuloma from the microbe's point of view. Cell Microbiol. 12 (3), 301-309 (2010).
- Mehra, S., Alvarez, X., Didier, P. J., Doyle, L. A., Blanchard, J. L., Lackner, A. A., et al. Granuloma correlates of protection against tuberculosis and mechanisms of immune modulation by Mycobacterium tuberculosis. J Infect Dis. 207 (7), 1115-1127 (2013).
- Kaushal, D., Schroeder, B. G., Tyagi, S., Yoshimatsu, T., Scott, C., Ko, C., et al. Reduced immunopathology and mortality despite tissue persistence in a Mycobacterium tuberculosis mutant lacking alternative sigma factor, SigH. Proc Natl Acad Sci U S A. (12), 8330-8335 (2002).
- Mehra, S., Kaushal, D. Functional genomics reveals extended roles of the Mycobacterium tuberculosis stress response factor sigmaH. J Bacteriol. 191 (12), 3965-3980 (2009).
- Rohde, K. H., Veiga, D. F., Caldwell, S., Balazsi, G., Russell, D. G. Linking the transcriptional profiles and the physiological states of Mycobacterium tuberculosis during an extended intracellular infection. PLoS Pathog. 8 (6), (2012).
- Fontan, P. A., Voskuil, M. I., Gomez, M., Tan, D., Pardini, M., Manganelli, R., et al. The Mycobacterium tuberculosis sigma factor sigmaB is required for full response to cell envelope stress and hypoxia in vitro, but it is dispensable for in vivo growth. J Bacteriol. 191 (18), 5628-5633 (2009).
- Rustad, T. R., Harrell, M. I., Liao, R., Sherman, D. R. The enduring hypoxic response of Mycobacterium tuberculosis. PLoS One. 3 (1), (2008).
Tags
Immunologi mikrodissektion mesodissection formalin fast paraffin indlejret,Erratum
Formal Correction: Erratum: A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas
Posted by JoVE Editors on 07/01/2014.
Citeable Link.
The corresponding author was changed for the article, A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas. The corresponding author was changed from:
Teresa A. Hudock
to:
Deepak Kaushal
