L'iniezione diretta nel nervo ottico del ratto è utile per la ricerca rigenerativa. Dimostriamo una tecnica minimamente invasiva per l'iniezione diretta in un nervo ottico di ratto che non comporta l'apertura del cranio. Utilizzando questo metodo, le complicanze chirurgiche sono ridotte al minimo e il recupero è più rapido.
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Articolo metodologico
Tecnica mini-invasiva per iniezione in Rat nervo ottico
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il nervo ottico del ratto è un modello utile per la ricerca sulla rigenerazione delle cellule staminali. L'iniezione diretta nel nervo ottico di ratto consente la somministrazione nel sistema nervoso centrale in un intervento chirurgico minimamente invasivo senza rimozione ossea. Questa tecnica descrive un approccio alla visualizzazione e all'iniezione diretta del nervo ottico dopo una piccola dissezione fasciale dalla cresta orbitale, utilizzando una sutura di trazione congiuntivale per tirare delicatamente l'occhio verso il basso e verso l'esterno. Esempi rappresentativi di un nervo ottico iniettato mostrano il successo dell'iniezione di perline colorate.
Introduzione
Il nervo ottico offre una posizione ideale per il sistema nervoso centrale (SNC) ricerca rigenerativa comprese le condizioni oftalmologiche quali neurite ottica, glaucoma e traumi. Iniezioni di una varietà di cellule staminali hanno né dimostrato l'efficacia o mostrato risultati promettenti nel sostituire persi mielina, aumentando conta assonale e / o prevenire le malattie degenerative. 1,2
Il nervo ottico umano contiene circa 1,2 milioni di assoni parallele viaggiano dalla retina al chiasma con un diametro di circa 3,0-3,5 mm. 3 Per modellare malattie umane in laboratorio, il ratto è stato utilizzato di frequent....
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Protocollo
NOTA: Tutte le procedure sugli animali sono stati approvati dalla cura degli animali e del Comitato uso Johns Hopkins. Macchine per anestesia richiedono ispezione annuale e la calibrazione, se necessario.
1. Anestesia e Posizionamento
- Anestesia.
- Eseguire tutte le procedure chirurgiche in anestesia con 2-3% isofluorane. Confermare adeguato livello di anestesia da un pizzico punta e tasso di respirazione. Verificare che il topo non si muove in risposta ad un pizzico piedi.
NOTA: Un sussulto indica anestesia che è troppo tardi e può richiedere l'anestesia più lunghi prima di iniziare o una maggiore concentrazione isofluorane. Un ta....
- Eseguire tutte le procedure chirurgiche in anestesia con 2-3% isofluorane. Confermare adeguato livello di anestesia da un pizzico punta e tasso di respirazione. Verificare che il topo non si muove in risposta ad un pizzico piedi.
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Risultati
Al termine dell'esperimento, i ratti sono stati sacrificati e perfusi con paraformaldeide al 4%. I nervi ottici sono stati accuratamente sezionati e montate per criostato sezionamento. La Figura 2 mostra un esempio di un ratto intera nervo ottico a bassa potenza in cui Evans colorante blu è stato iniettato per visualizzare il sito. La freccia indica la posizione precisa di iniezione. Questo dissezione è stato fatto entro pochi minuti dell'iniezione come indicato dalla diffusione ristretta del co.......
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Discussione
L'iniezione diretta nel nervo ottico di cellule staminali o di altri prodotti destinati a facilitare la rigenerazione fornisce un modello conveniente rispetto ad altri mezzi di iniezione nel SNC. Questa tecnica richiede meno tempo, richiede meno anestesia totale, evita la perforazione o la rimozione del cranio o del tessuto osseo, riduce i tassi di complicanze e consente un recupero più rapido dopo l'intervento chirurgico.
Le fasi più critiche di questo protocollo includono: 1. Emostasi adegu.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno divulgazioni significative da riportare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato supportato da NeuralStem, Inc. e Johns Hopkins Project RESTORE.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Lewis rat | Charles River | 4 | Qualsiasi ceppo di ratto funzionerà. |
| Macchina per anestesia | Surgivet | CDS9000 | CDS 9000 Macchina per anestesia per piccoli animali - Pompa |
| infusione | Stoelting | 53129 | |
| Microscopio per dissezione | National Optical | 409-411-1105 | |
| Sorgente luminosa a fibre ottiche | Fisher Scientific | 12-562-21 | |
| Strumento di dissezione e stereotassica | Stoelting | 51400 | |
| Estrattore per pipette | Kopf | 750 | |
| Pipettes | World Precision Instruments | 18150-6 | |
| Lame per bisturi monouso | Harvard Apparatus | 810-15-021 | |
| Forbici per iridectomia | Scienze di microscopia elettronica | Uniband LA-4XF |
Riferimenti
- Dahlmann-Noor, A., Vijay, S., Jayaram, H., Limb, A., Khaw, P. T. Current approaches and future prospects for stem cell rescue and regeneration of the retina and optic nerve. Canadian journal of ophthalmology Journal canadien d'ophtalmologie. 45 (4), 333-341 (2010).
- Quigley, H. A., Iglesia, D. S.
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Ristampe e permessi
