Прямая инъекция в зрительный нерв крысы полезна для регенеративных исследований. Мы демонстрируем минимально инвазивную технику прямой инъекции в зрительный нерв крысы, которая не предполагает вскрытия черепа. При использовании этого метода хирургические осложнения сводятся к минимуму, а восстановление проходит более быстро.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Минимально инвазивная техника для инъекций в Крыса зрительного нерва
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Зрительный нерв крысы является полезной моделью для исследований регенерации стволовых клеток. Прямая инъекция в зрительный нерв крысы позволяет доставить его в центральную нервную систему в минимально инвазивной хирургии без удаления кости. Эта техника описывает подход к визуализации и прямой инъекции зрительного нерва после незначительного фасциального расслоения из орбитального гребня с использованием конъюнктивального тракционного шва для мягкого вытягивания глаза вниз и наружу. Типичными примерами инъекции зрительного нерва являются успешные инъекции окрашенных шариков.
Введение
Зрительный нерв представляет собой идеальное место для центральной нервной системы (ЦНС) регенеративной исследований, включая офтальмологических заболеваний, таких как неврит зрительного нерва, глаукома и травмы. Инъекции различных стволовых клеток либо продемонстрировали эффективность или показали обещание в замене потерянного миелина, увеличение аксонов счет и / или профилактики дегенеративных заболеваний. 1,2
Человек зрительного нерва содержится приблизительно 1,2 млн параллельных аксоны путешествия от сетчатки к перекреста с диаметром приблизительно 3,0-3,5 мм. 3 Для моделирования заболеваний человека в лаборатор....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры на животных были одобрены Комитетом Джонса Хопкинса уходу и использованию животных в. Анестезия машины требуют ежегодной проверки и калибровки как необходимо.
1. Анестезия и позиционирование
- Анестезия.
- Выполните все хирургические процедуры под наркозом с 2-3% изофлуораном. Подтвердите соответствующий уровень анестезии пальца щепоткой и частоты дыхания. Убедитесь, что крысы не дрогнул в ответ на носок щепотку.
ПРИМЕЧАНИЕ: вздрогнул указывает, что анестезия уже слишком поздно, и, возможно, требуют более длительного наркоза перед началом или более высокой концентрации изофлуораном. Частота дыхания менее 1 дыха....
- Выполните все хирургические процедуры под наркозом с 2-3% изофлуораном. Подтвердите соответствующий уровень анестезии пальца щепоткой и частоты дыхания. Убедитесь, что крысы не дрогнул в ответ на носок щепотку.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
По завершении эксперимента крыс забивали, и перфузию 4% параформальдегидом. Зрительные нервы были тщательно рассечены и установлен для криостата срезов. Рисунок 2 показывает пример крыс всей зрительного нерва при низкой мощности, в котором синий краситель Эванса вводили для визуализации сайт. Стрелка указывает точное местоположение инъекции. Это было сделано рассечение в течение нескольких минут после инъекции, как указано в ограниченной диффузии красителя вниз нерва. В других инъекций, мы наблюдали мед.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Прямое введение в зрительный нерв стволовых клеток или других препаратов, предназначенных для облегчения регенерации, обеспечивает удобную модель по сравнению с другими способами инъекций в ЦНС. Этот метод занимает меньше времени, требует меньше полной анестезии, позволяет избежать сверления или удаления черепной или костной ткани, снижает частоту осложнений и обеспечивает более быстрое восстановление после операции.
Наиболее важные шаги в этом протоколе включают: 1. Адекватный гемостаз в опе.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
У авторов нет содержательной информации, которую они могли бы сообщить.
Благодарности
Это исследование было поддержано NeuralStem, Inc. и Проектом Джона Хопкинса RESTORE.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Крыса Льюиса | Чарльз Ривер | 4 | Подойдет любой штамм крыс. |
| Наркозный аппарат | Surgivet | CDS9000 | CDS 9000 Аппарат для анестезии мелких животных - Крепление на полюсе |
| Инфузионный насос | Stoelting | 53129 | |
| Микроскоп для рассечения | National Optical | 409-411-1105 | |
| Волоконно-оптический источник света | Fisher Scientific | 12-562-21 | |
| Диссекция и стереотаксический инструмент | Toelting | 51400 | |
| Съемник пипеток | Kopf | 750 | |
| Пипетки | World Precision Instruments | 18150-6 | |
| Одноразовые лезвия скальпеля | Harvard Apparatus | 810-15-021 | |
| Ножницы для иридэктомии | Электронная микроскопия | Науки Uniband LA-4XF |
Ссылки
- Dahlmann-Noor, A., Vijay, S., Jayaram, H., Limb, A., Khaw, P. T. Current approaches and future prospects for stem cell rescue and regeneration of the retina and optic nerve. Canadian journal of ophthalmology Journal canadien d'ophtalmologie. 45 (4), 333-341 (2010).
- Quigley, H. A., Iglesia, D. S.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
