Protocol
OVCAR-3 인간 난소 암 세포의 1 세대 안정적 렌티가 SOX2 규제 지역 리포터 구조를 포함하는 형질 도입
- 10,21 바와 같이 SOX2 조절 영역을 인식하는 리포터 구조체와 함께 HEK 293T 패키징 세포주를 형질 감염에 의해 렌티 바이러스 입자를 생성한다.
참고 : 기자가 추가로 구성 앞서 tdTomato 형광 단백질의 ProteoTuner 쉴드 시스템의 불안정 도메인이 포함되어 있습니다. Shield1을함으로써 형광 단백질 (22)을 분해하는 프로 테아 좀을 방지 불안정 도메인에 결합한다. - 24 시간의 시간주기 동안 렌티 바이러스 입자 OVCAR-3 세포를 형질 도입. 그 후, 바이러스 상청액을 제거하고 완전 배지에 인산 완충 생리 식염수 (PBS)와 함께 배양 된 세포를 세척 (RPMI 100 U / ㎖ 페니실린 / ㎖ 스트렙토 마이신 100 μg의, 10 % FBS가 보충 된).
- 48 시간 후, 10 ㎍ / ㎖의 퓨로마이신은 배양에 첨가하고, 적절하게 형질 도입 된 세포의 선택을 허용하기 위해 5 일간 유지 하였다.
셀 정렬 및 도금 2. 준비
- 1 Shield1을 추가 : 셀 정렬하기 전에 1,000 희석 24 시간을. 음성 대조군으로 Shield1을 처리 (그림 1)하지 않고 안정적으로 형질 OVCAR-3 세포를 사용합니다. 플라스크에서 대기음 매체는 3 분 동안 0.05 % 트립신 - EDTA로 세포를 1X PBS로 세포를 씻어를 Trypsinize.
- 5 분 - (25 ° C 15) RT 300 XG에서 세포 수, 세포를 원심 분리 카운트 (위 참조) 완전 배지를 사용하여 트립신을 중지.
- 가만히 따르다 뜨는에 resuspend 세포 신중에 0.5-1 ml의 멸균 PBS.
- 단일 세포 현탁액을 얻기 위해 40 μm의 셀 스트레이너 캡 필터를 사용한다.
- 1 mL 당 500 만 세포에 세포 수를 조정합니다.
- , MEGM는 성장 인자, 사이토 카인 및 보조 식품으로 보충 (100 μL와 매체 초저 첨부 파일 96 웰 플레이트를 구체 준비B-27, heparine 나트륨; 또는 성장 인자, 사이토 카인, 및 보충, B-27, 또는 1 % 메틸 셀룰로오스 무첨가 heparine 나트륨이 보충 된 DMEM / F12는) 또한 표 1 참조. 선택적으로, 가능한 오염의 위험을 최소화하기 위해 100 U / ㎖ 페니실린 및 100 ㎍ / ml의 스트렙토 마이신의 농도로 배지에 항생제를 추가한다.
- 정렬 RFP + 이상에서 제조 된 96 웰 플레이트에 RFP- 세포, 잘 당 1 셀 (하나의 셀 기반 분야 분석) 각각 아니라 100 세포 (다중 셀 기반 분야 분석). 100 μ 노즐, 칼집 압력이 20psi, 수율 마스크 0, 순도 마스크 (32), 위상 마스크 16 : 단일 셀 모드, 정렬 설정을 사용하여 (자료 참조) 종류에 시판 셀 소터를 수행합니다.
- 현미경 (단일 세포 기반 분석의 경우) 세포를 포함하는 우물을 점수에 의해 다중 셀 기반 분석을 위해 (개인 우물에서 세포 수를 계산하여 효율성을 도금 평가; 그림 2
- 매체 분야의 표준 조건에서 세포를 품어 37 ° C에서 5 % CO 2 (조성물 단계 2.6 참조). 매일의 bFGF (20 NG / ㎖) 및 EGF (20 NG / ㎖)을 보충합니다.
- 일주일이 지난 뒤, 집적 리포터 시스템으로부터의 형광 신호를 검출하기 위해 4 배 또는 10 배 배율 및 형광 현미경으로 표준 현미경을 사용하여 종양 신생 분야의 숫자를 카운트. "작은"구 100 μm의 (그림 3) - 직경 50 "큰"구체로 100 ㎛를 초과하는 직경 분야 및 구체를 계산합니다. 당신이 진짜 구체를 계산하고 클러스터를 셀 수 없습니다 있는지 확인하십시오.
참고 : 단일 세포 기반 분석에서 구 형성이 문화의 10 (7 대) 일 후 현미경으로 득점하기가 쉽습니다. - RFP의 +의 구 형성 세포 및 단일 세포 기반 분석에서 각각 RFP- 세포 (각 실험 한 96 웰 플레이트) 또는 멀티 셀 바의 비율을 계산쇼 등에 의해 제시된 나오지 분야 분석 (각각의 실험에 대해 잘 하나). (16)
주 : 구 형성 세포 (%) = (구체의 개수) / (셀 시드 수)의 비율은 100 X
분야 3. 직렬과 Passaging
- 실온에서 10 분 동안 300 XG에 적절한 멸균 튜브와 원심 분리기에 각 웰의 내용을 놓습니다. 다중 셀 기반 분야 분석을 위해, 함께 잘 하나의 구체를 수집합니다. PBS 긴 원심 분리기 2 분에 5 회 - 잘 3을 씻으십시오. 하나의 셀 기반 분야 분석의 경우, 개별 분야를 수집합니다. 때문에 세포의 낮은 숫자로, 원심 분리 및 세척 단계 1.5 ml의 튜브를 사용합니다.
- 0.05 % 트립신 - EDTA의 200 μL에 뜨는에 resuspend 펠렛을 제거합니다.
- 최적의 세포 분리를 달성하기 위해, 부드러운 진탕을 5 분 동안 37 ℃에서 세포 현탁액을 배양한다. 낮은 세포 사멸 속도로 셀 라인 트립신 시간을 최적화 : 더 큰 경우구 부드럽게 100 μL 피펫 팁을 사용하여 볼 수 씹다입니다. 경우 큰 분야는 여전히 존재하는 또 다른 3 분 트립신과 부화 후 분쇄 단계로 진행합니다. 하나의 경우 셀 기반 분석은 트립신 단계 동안 살아있는 세포의 최적 세포 수율의 시간을 최적화해야합니다.
- , 트립신을 비활성화 단일 세포 분석, 추가로 2 분 동안 원심 분리기의 경우, 10 분 동안 300 XG에 500 μL에게 완전한 매체와 원심 분리기를 추가합니다.
- 구체 매체에 조심스럽게 뜨는에 resuspend 세포를 제거합니다.
- 단일 세포 현탁액을 얻기 위해 40 μm의 셀 스트레이너 캡 필터를 사용한다.
- RFP의 + 및 다중 - 셀 bassed RFP- 세포 내 분석을 사용하는 경우, 유동 세포 측정기 분석을 통해 재 부유 한 후 각 웰에서 형광 세포의 비율을 평가.
- 위에서 설명한 바와 같이 제조 한 세포의 직렬 replating 분석, 씨앗 아니라 당 1 셀 새로운 초저 첨부 파일 96 웰 플레이트에 들어. 한 개인 영역에서 약 20 개인 우물을 씨앗. 다중 셀 기반의 주 분야 replating 분석법, 종자 세포는 새로운 96- 웰 플레이트에 주요 분야 중 하나 웰로부터 수득하고 현미경으로 세포 수를 카운트 다음날.
- 단계 2.11에 기재된 식을 이용하여 이차 분석 분야에서 구 - 형성 세포의 비율을 평가한다.
4. 결과 분석
- 독립적 인 3 회 반복 실험을 수행의 결과를 분석하고 양면 학생의 t- 검정 통계 분석을 위해 정규 분포 값과 달리 맨 - 휘트니 - 테스트를 분석하는 데 사용할.
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Representative Results
기존의 구체 분석에서 RFP + OVCAR-3 세포 대 RFP- 세포의 20 %의 거의 40 %는 주 분야 분석 (그림 4A)의 개별 종양 분야에 상승했다. 또한, RFP + 세포에 의해 형성 한 구체 RFP- 세포에 의해 형성되는 것보다 크기가 더 컸다.
단일 세포 기반 분석에서 도금시 RFP + 세포는 또한 상기 결과를 확인하고, 이상 세포 RFP- 분야 형성. 그러나, 다중 셀 기반 분석 (도 4A, B) 대 단일 도금 당 적은 분야의 발생을 향한 경향이 분석 구 형성에 기계적 구 융합 또는 해리 기술적 이슈를 통해 바이어 싱 될 수 있음을 나타내는 있었다 미부착 된 배지에서.
추가의 이러한 측면을 탐색하기 위해 형성 분야에 도금 셀 밀도의 영향을 비교 하였다. 우리는 96에서 잘 당 1 셀에 1,000 세포에서 제한 희석을 사용하여 세포를 도금글쎄 판은 신흥 분야의 숫자가 처음에 도금 세포의 수에 크게 의존 것을 발견했다. 놀랍게도, 구체의 높은 숫자를 보여, MGEM과 DMEM / F12 기반 미디어 모두에서 도금 세포의 낮은 숫자부터 계산 된 것을이 분석에서 참으로 도금 양식 높은 바이어스 결과 (그림 5). 세포를 DMEM / F12 계 분야 1 % 메틸 셀룰로오스를 첨가하여 고정화 하였다 반대로, 중간 영역 (23, 24)의 형성 효율은 세포 밀도의 대부분 독립적이었다.
CSC 특성에 대한 구체 배양 조건의 영향을 조사하기 위해 분석 분야에서 7 일간 배양 한 후 적색 형광 신호를 발현하는 세포의 비율을 분석했다. 우리는 그들이 가지고 있음을 시사 다중 셀 기반 분야의 문화에서 RFP + 분야에서 세포의 약 35 %가 문화 (그림 6A) 7 일 후 자신의 적색 형광 신호를 잃어버린 것을 발견 underg한 차별화 반면, 65 %는자가 재생 능력을 제안 RFP + 신호를 유지했다. 반대로, 초기 RFP- 세포로부터 생성 분야에서 세포들은 이러한 조건에서 줄기 세포 잠재력을 다시 설정할 수 없음을 나타내는, RFP 네거티브 (도 6A)에 남아 있었다.
하나의 세포에서 생성 분야에서 수행 형광 현미경은 단일 분야가 RFP를 도출 + RFP- 세포에서 파생 된 분야는 빨간 신호에 대한 부정적인 유지하면서 세포가 RFP +와 RFP- 세포를 모두 포함 된 것을 보여주는 이러한 결과를 확인했다.
유사한 결과는 두 조건에서 replating 분석에서 관찰되었다.
그림 렌티 바이러스 전달, 선택 1. 워크 플로 및 렌티 바이러스 전달과의 긍정적 인 선택 후. RFP +와 RFP- 세포의 분류 퓨로 마이신 노출, RFP- 및 RPF + 세포를 통해 성공적으로 형질 세포 분야 배지에서 96 웰 플레이트의 각 우물에 FACS으로 분류되어 있습니다. 다중 셀 기반 분야 분석의 경우, 100 세포는 잘 하나에 배치됩니다. 도금 효율 정렬 후 수행 현미경으로 평가된다. 분야는 7~10일 후 현미경으로 득점 유동 세포 계측법을 통해 분석 및 보조 구에 플레이 팅 단일 세포로 분해되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
도금. 싱글 RFP +와 각 웰의 96 웰 플레이트로 정렬 RFP- 세포 후 정렬 된 RFP +와 RFP- 세포의 그림 2. 이미징 (형광) 현미경을 사용하여 올바른 도금 분석된다.w.jove.com/files/ftp_upload/52259/52259fig2highres.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
단일 세포 기반 분석의 구체 형성의 그림 3. 분석. 구체 형성 7-10일 후 분석된다. (A) 대형 (직경> 100 ㎛)와 (B) 작은 (50 직경 - 100 ㎛). 구가 현미경 크기에 따라 구별되는 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
종양의 그림 4. 효율성이 RFP에서 형성 분야 +및 RFP- OVCAR-3 단일 셀 기반 분야 분석 (B) 대 다 (A)에서 분석으로 OVCAR-3 세포에서 기본 및 보조 구 효율성의 단일 셀 기반의 구체 분석 대 다. 비교 세포. 여기를 클릭하십시오 이 그림의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.
도 5 셀 도금 밀도 강하게 영향 구가 액체로 수행 다중 셀 기반 분야 분석에서의 OVCAR-3 세포로부터 계산하지만 다른 세포 밀도와 성장 배지의하지 메틸 보충 문화. 사용은 난소 암에 대한 문헌에보고되어왔다 분석을 분야. 이러한 변수에 의해 도입 가능한 편향을 분석하기 위해, 세포를 플레이 팅된다 differe다른 분야의 문화 미디어의 200 μL (MGEM, 모든 보충제와 프로토콜 섹션, 또는 DMEM / F12에 설명 된 1 % 메틸 셀룰로오스를 포함하는 모든 보충제와 DMEM가 / F12) 및 구 형성 7 일 후 채점에서 NT 밀도 (A) . DMEM / F12 도금 하루 후에 찍은 다른 밀도에서 도금 세포의 현미경 사진을 (B)에 도시 된 바와는 메틸없이 배지 구체. 저밀도 플레이트에서 본 단셀 대조적으로 높은 세포 밀도로 신흥 셀 클러스터를 참고. 사진의 스케일 바 :. 50 μm의 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
종양 분야에서 신호가 RFP +와 respectiv 형성 분석 RFP의 그림 6.엘리 RFP- OVCAR-3 세포 (A) RFP +와 RFP- 세포에서 파생 된 해리 분야에서 RFP 신호에 대한 세포 계측법 분석 (다중 셀 기반 분야 분석)을 흐름.; RFP +와 RFP- 세포 (단일 셀 기반 분야 분석)에서 파생 된 분야의 (B) 현미경은 이기종 RFP의 RFP에서 파생 된 분야에서 신호 +하지만 RFP- 세포를 보여준다. 사진은 하나의 셀 기반 구 분석에 대한 기존의 분야와 일 10 일 7시에 촬영되었다. RFP + 추정 암줄 기세포에서 파생 된 분야의 큰 크기를합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 인간 난소 암 세포 공급원 | 기본 매체 | 건강 보조 식품 | 저자 |
| OVCAR-3, Caov-3, 원재료 | MEGM | 20 NG / ㎖ rEGF, 20 NG / ㎖의 bFGF, B-27, 4 ㎍ / ㎖의 헤파린, 하이드로 코르티손, 인슐린 (SingleQuot 키트) | Bareiss 등은. |
| 293 | DMEM / F12 | / ㎖ 인슐린, 10 ng의 / ㎖ rEGF 10 NG / ㎖의 bFGF, 12 ng의 / ㎖ LIF, 0.3 % BSA 5 μg의 | 리 마 등. |
| A2780 | DMEM / F12 | 5 ㎍ / ㎖의 인슐린, 20 ng의 / ㎖ rEGF 2 % B-27, 0.4 % BSA | Haiwei 왕 등. |
| 293 | DMEM / F12 | 5 ㎍ / ㎖의 인슐린, 20 ng의 / ㎖ rEGF 10 NG / ㎖의 bFGF, 2 % B-27 1 NG / ㎖의 하이드로 코르티손 | 용인 루이 뒤 등. |
| A2780, 차 재료 | DMEM / F12 | 5 ㎍ / ㎖의 인슐린, 20 ng의 / ㎖ rEGF 10 NG / ㎖의 bFGF, 0.4 % BSA | T. 시앙 등. |
| 기본 재료 | DMEM / F12 > | / ㎖ 인슐린, 10 ng의 / ㎖ rEGF 10 NG / ㎖의 bFGF, 12 ng의 / ㎖ LIF, 0.3 % BSA 5 μg의 | 테 리우 등. |
| MLS | DMEM / F12 | 10 NG / ㎖ 인슐린, 20 ng의 / ㎖ rEGF 20 NG / ㎖의 bFGF, 2 % B-27 | Soritau 등. |
| 3AO | DMEM / F12 | 1 ㎎ / ㎖의 인슐린, 20 ng의 / ㎖ rEGF 20 NG / ㎖의 bFGF, 2 % B-27 | MF시 등. |
| 기본 재료 | DMEM / F12 | 5 ㎍ / ㎖의 인슐린, 20 ng의 / ㎖ rEGF 10 NG / ㎖의 bFGF, 0.4 % BSA | 슈 장 등. |
| 기본 재료 | EBM-2, X-VIVO | 5 ㎍ / ml의 인슐린, 20 NG / ㎖ rEGF | 일로나 Kryczek 등. |
| OVCAR-3 | MEGM | 20 NG / ㎖ rEGF 20 NG / ㎖의 bFGF, B-27는 4 ㎍ / ㎖의 헤파린 | 로링 리앙 등. |
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Discussion
구체 배양 암 줄기 세포는 잠재적 인 분석 및 인간 종양 세포 15,25,26 다양한 줄기 세포와 같은 농축 널리 사용되는 방법이다. 이러한 배양 조건 하에서, 자기 갱신 능력이 부족한 암세포 분화 결국 세포 사멸을 거칠 것으로 예상된다. 그들은 초기에 세포 클러스터 또는 특히 차 내 분석 분야, 심지어 종양을 형성 할 수 있지만, 그들로 인해 자기 특성 갱신 부족 직렬 replating시 구 형성능을 유지할 수 없다. 구체 분석법 된 CSC를 식별하고 전체 종양 세포 집단에서의 주파수를 평가하는 분석 대용으로 사용된다.
그러나, 실질적인 변화는 다른 출판 프로토콜을 5,10,27-35 (표 1) 다음과 같은 분야 분석 사이에 수행 관찰 할 수있다. 실험실에서, 우리는 이전에 B-27를 보충하여 MEGM 인간 난소 암 세포로부터 구 형성 발간, bFGF를, 헤파린과 SingleQuot TM (인슐린, rEGF 및 하이드로 코르티손을 포함). 일부는 B-27 및 rEGF를 추가하는 동안 다른 실험실, 전체 DMEM / F12 배지를 사용합니다. 이 보고서에서, OVCAR-3 세포에서 다중 셀 기반 분석 분야 따라서 상이한 조건을 이용하여 수행 하였다. 구 형성에 큰 차이가 이들 세포 (도 5a)에서 모두 관찰되지 않았다 보충제 MEGM 또는 DMEM / F12를 사용. 또한, 일부 실험실 FGF와 EGF 신속하게 저하 될 수 있음을 추측하고 매체에 매일 이들 성장 인자를 추가 프로토콜을 확립했다. 따라서 우리는 EGF 및 FGF는 세포 배양 물에 매일 EGF 첨가 및 FGF와 분야 분석법의 시작 부분 만 첨가 된 배지에서 수행 분야 세이를 비교하고, 우리는 OVCAR-3 세포에서 동등한 결과를 수득하기 위해 이러한 분석을 찾을 FGF와 EGF와 비싼 힘든 일일 보충 항상 필요하지 않을 수 있다는 것을 시사한다 (데이터는 보이지 않음). 이러한 결과 여부다른 난소 암 세포주 또는 일차 샘플들로부터, 또는 상이한 실험 조건 하에서 세포에 적용이 결정되어야 남아있다.
그러나, 우리는 다른 테스트 변수 도금 셀 밀도에 의해 도입 얻었 분야의 수에 상당한 바이어스를 관찰했다. 세포의 숫자가 낮아 분야의 높은 수치를 보였다으로 놀랍게도, 우물 시드. 1 % 메틸 셀룰로오스에 의해 제한 세포 이동은 초기 도금 셀의 개수에 무관 구 형성의 효율 동일한 결과. 이러한 결과는 세포 응집 및 구 융합 또는 세분화가 구 번호를 수정하고 다중 셀 기반 분야 분석에서 부정확 한 결과로 이어지는 발생할 수 있습니다 것이 좋습니다. 세포는 적절한 밀도로 도금하는 경우, 다중 셀 기반 분석은 그러나 단일 셀 기반 구 분석에서 수집 된 데이터에 오히려 비교 결과 (그림 4)로 이어집니다. 또한 이러한 결과를 탐험하기 위해 우리는 단일 및 다중 셀 기반 비교SOX2 규제 영역 (10)에 대해 최근 발표 된 렌티 바이러스 RFP 표현 기자 시스템을 통해 추정 암줄 기세포로 정렬 난소 암 세포를 이용하여 분석. 사실, 모두 분석은 RFP의 향상된 기본 및 보조 구 형성 능력을 확인 + RFP- 세포 대 (그림 4A, B). 중요한 것은, RFP + 세포로부터 관찰 분야의 숫자가 높아 SOX2의 유도를 도시 이전 결과와 일치한다 SOX2 발현 세포의 이상 증식 용량 (도시되지 않음), 본 기인하지 않았다 가속화없이 분야 형성 및 생체 발암하여 촉진 세포주기 진행 10.
이와 함께, 단일 세포 기반 분석 분야는 더 어렵고 비싸다 그러나 또한 실험 결과들 사이의 높은 재현성으로 확인되어보다 정확한 데이터를 초래한다. 멀티 셀 바스 도금 밀도 높은 영향 결과 이후ED 현탁액을 어 세이, 충분한 밀도의 도금 선행 적정 분석 방법을 사용하여 구 형성을 분석하기 전에 각각의 종양 세포 형태에 대해 요구되는 구체. 대안 적으로,보다 정확한 단일 세포 기반 분석은 선행으로 사용할 수도 있고, 메틸 셀룰로스 보충 기계적 아티팩트를 감소시켜 결과의 정확도를 향상시킬 수있다. 유전 적 변형 또는 약물 치료 심각함으로써 세포 밀도를 감소시키는, 세포의 생존 능력을 변경할 수있다 여기서 구 형성 조건을 비교되는 경우, 단일 셀 기반 구 분석은 위양성 결과를 피하기 위해 필수적 일 수있다.
요약하면, 적절한 실험 조건 하에서 다중 셀 기반 분야 분석 및 단일 셀 기반 분야 분석 모두 다른 세포 집단 (줄기 및 비 - 줄기 세포) 사이의 영역 전위의 차이를 나타낼 수있다. 그러나, 일반적으로 액체 배양에서 수행되는 다중 셀 기반 분석 분야는 이메일에 더 민감하다도금 밀도를 통해 실험 설계에 의해 도입 널 오 류. 다중 셀 기반 분석에 메틸 (1 %)의 보충이 응집 및 구 융합 세포와 관련된 유물을 제한 할 수 있습니다. 이러한 자료에 기초해서, 우리는 상세한 적정 분석은 세포 생존에 실험 조건의 선행 및 부정적 영향을 수행되었을하여 세포 밀도가 배제되지 않는 한 하나의 셀 기반 분야 분석법이 수행 될 것을 권장. 그러나, 단일 세포 기반 분석 분야는 더 어렵고 고가이며, 각 실험 환경에 필요하지 않을 수도있다. 메틸 셀룰로오스 보충 다중 셀 기반 분석 분야 일부 실험 설정의 또 다른 대안을 나타낼 수있다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Low-attachment plate | Corning | 3474 | |
| MEGM | Lonza | CC-3151 | |
| Insulin | Lonza | CC-4136 | SingleQuots™ Kit |
| Hydrocortisone | Lonza | CC-4136 | SingleQuots™ Kit |
| EGF | Lonza | CC-4136 | SingleQuots™ Kit |
| EGF | Sigma | E9644 | end concentration: 20 ng/ml |
| FGF | PeproTech | 100-18B | end concentration: 20 ng/ml |
| B-27 | Invitrogen/ Gibco | 17504-044 | end concentration: 1X |
| Heparin-Natrium-25000 IE | Ratiopharm | N68542.02 | dilution 1:1,000 |
| Pen/Strep | Gibco | 15140-122 | |
| FCS | Gibco | 10500-064 | |
| RPMI 1640 | Gibco | 21875-034 | |
| Trypsin-EDTA | Gibco | 25300-054 | |
| Dulbecco’s PBS (1X) | Gibco | 14190-094 | |
| Shield1 | Clontech | 632189 | dilution 1:1,000 |
| DMEM/F12 | Gibco | 21041-025 | |
| DMEM/F12 (powder) | Gibco | 42400-010 | |
| Methyl cellulose | Sigma | M0387 | |
| Puromycin dihydrochloride | Applichem | A2856 | |
| Cell sorter | BD | Aria III cell sorter | |
| FACS analyser | BD | Accuri c6 flow cytometer | |
| Microscope | Olympus | IX50 Osiris |
References
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