Il y a un manque général de connaissances sur le fonctionnement des vaccins. Ici, nous proposons l’utilisation combinée de la génétique inverse et de souris chimériques de la moelle osseuse pour mieux comprendre les réponses immunitaires précoces de l’hôte aux vaccins, en mettant l’accent sur les cellules dendritiques et l’immunité des lymphocytes T.
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Article de méthode
Administration intranasale de vaccins contre la grippe recombinant chimérique dans les modèles de souris pour étudier l'immunité muqueuse
Dans cet article
Résumé
Résumé
Les vaccins sont l’une des plus grandes réalisations de l’humanité et ont sauvé des millions de vies au cours du siècle dernier. Paradoxalement, on sait peu de choses sur les mécanismes physiologiques qui médient les réponses immunitaires aux vaccins, peut-être en raison du succès global de la vaccination, qui a réduit l’intérêt pour les mécanismes moléculaires et physiologiques de l’immunité vaccinale. Cependant, plusieurs agents pathogènes humains importants, dont le virus de la grippe, posent encore un défi pour la vaccination et pourraient bénéficier de stratégies immunitaires.
Bien que la génétique inverse de la grippe ait été appliquée avec succès à la production de vaccins antigrippaux vivants atténués (VVAI), l’ajout d’outils moléculaires dans les préparations vaccinales, tels que des composants traceurs pour suivre la cinétique de la vaccination in vivo, n’a pas été abordé. De plus, la récente génération de modèles murins qui permettent une déplétion spécifique des leucocytes au cours des études cinétiques a ouvert une fenêtre d’opportunité pour comprendre les mécanismes immunitaires de base sous-jacents à la protection induite par le vaccin. Ici, nous décrivons comment la combinaison de la génétique inverse et de modèles murins chimériques peut aider à fournir de nouvelles connaissances sur le fonctionnement des vaccins aux niveaux physiologique et moléculaire, en utilisant comme exemple un vaccin antigrippal vivant atténué (VVAI) recombinant, adapté au froid. Nous avons utilisé des VVAI générés en laboratoire et hébergeant des traceurs cellulaires ainsi que des chimères compétitives de la moelle osseuse (BMC) pour déterminer la cinétique précoce de l’immunité vaccinale et les principaux mécanismes physiologiques responsables de l’initiation de l’immunité adaptative spécifique au vaccin. De plus, nous montrons comment cette technique peut faciliter les études de la fonction des gènes chez des animaux uniques lors des réponses immunitaires aux vaccins. Nous proposons que cette technique puisse être appliquée pour améliorer les stratégies prophylactiques actuelles contre les agents pathogènes pour lesquels des contre-mesures médicales urgentes sont nécessaires, par exemple la grippe, le VIH, le Plasmodium et les virus de la fièvre hémorragique tels que le virus Ebola.
Introduction
La génération de la mémoire immunologique en l'absence de la maladie est la base physiologique de vaccination efficace 1. Récemment, les approches fondées sur la biologie des systèmes ont révélé que les vaccins à succès tels que le vaccin contre la fièvre jaune, induisent une forte induction de réponses immunitaires innées et l'activation de plusieurs sous-ensembles de cellules dendritiques (CD), qui à son tour, conduit à multilignée activation de l'antigène Les cellules T spécifiques 2,3. Depuis les PED sont la seule population de cellules immunitaires avec la possibilité d'activer les cellules T naïves spécifiques de l'anti....
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Protocole
Les expérimentations animales ont été menées selon des protocoles approuvés et en suivant les directives de la loi de protection des animaux allemand. Tout le personnel effectuant des expériences animales programmes de formation passés selon la catégorie B ou C de la Fédération des associations européennes des animaux de laboratoire de sciences.
1. Génération du recombinant vivant atténué vaccins contre la grippe par génétique inverse
REMARQUE: Le protocole détaillé pour la génération de virus grippaux recombinants par génétique inverse a été décrite par des études antérieures 5 et est hors de la port....
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Résultats
La génération de vaccins contre la grippe vivant atténué recombinant peut être obtenu par transfection de plasmides codant pour les huit segments du virus de la grippe sous le contrôle de promoteurs bidirectionnels 5. Un vaccin contre la grippe adapté au froid contient généralement six segments d'une souche adaptée au froid, ainsi que le HA et NA de la souche de grippe de choix (par exemple, H1N1) (Figure 1A). Le principe de l'adaptation au froid est basée sur la replication .......
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Discussion
Dans cette étude, nous décrivons comment la génétique et des modèles de souris chimériques inverse peut être utilisé pour élucider les mécanismes physiologiques et moléculaires de l'immunité induite par le vaccin. La génétique de la grippe inverse est établi dans de nombreux laboratoires et a joué un rôle principal dans la compréhension de la grippe pathogenèse, la réplication et la transmission 17. Un point clé dans notre protocole est le sauvetage des vaccins antigrippaux adaptés au froid exprimant des .......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Nous remercions Sergio Gómez-Medina pour son excellent support technique lors des expériences sur les souris. Ce travail a été soutenu par des fonds de l’Association Leibniz et du Centre d’infection Leibniz. A.L. est récipiendaire d’une bourse prédoctorale de la Leibniz Graduate School.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Dulbecco&aigu ; s Medium Eagle modifié (DMEM 1x) | Gibco RL-Life Technologies | 41965-039 | |
| OptiMEM | Gibco RL-Life Technologies | 31985-047 | |
| Lipofectamine 2000 | Invitrogen-Life Technologies | 11668-027 | |
| Pénicilline-Streptomycine (10 000 U/ml) | PAA | p11-010 | |
| Albumine sérique bovine | Sigma-Aldrich | A2153 | |
| Ovules embryonnés | Valo biomedia Gmbh | ||
| PBS (1x) | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| 70 &mu ; M Filtres en nylon | Greiner-Biorad | 542-070 | |
| Tampon de lyse des globules rouges (RBCL) 10x | BD Bioscience | 555899 | |
| CD16/CD32 Souris BD Fc Block (2.4G2) | BD Pharmigen | 553142 | |
| APC-Anti-souris SIINFEKL-H2kb (25 D1.16) | Biolegend | 141605 | |
| PE-Anti-souris CD11c (HLA3) | BD Biosciences | 553802 | |
| eFluor 450-Anti-souris MHCII (Md/114.15.2) | eBioscience | 48-5321-82 | |
| Pe-Cy7-Anti-souris CD11b (M1/70) | Biolegend | 101216 | |
| PerCp/Cy5.5-Anti-souris CD103 (2E7) | Biolegend | 121416 | |
| PE-Anti-souris CD45.1 (A20) | eBioscience | 12-0453-82 | |
| V500-Anti-souris CD45.2 (1O4) | BD Bioscience | 562130 | |
| PerCp-eFluor710 -Anti-souris CD8a (53-6.7) | eBioscience | 46-0081-80 | |
| APC-Cy7-Anti-souris CD3&epsilon ; (145-2611) | Biolegend | 100325 | |
| eFluor450-Anti-souris CD4 (GK 1.5) | eBioscience | 48-0041-80 | |
| CFSE Colorant de prolifération | eBioscience | 65-0850-85 | |
| Baytril 2.5 % | Bayer | 65-0850-85 | |
| Dyméthil-sulfoxyde (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| Ovalbumine ; | Sondes moléculaires ; | O23020 | |
| Toxine diphtérique (DT) | Sigma-Aldrich | D0564 | |
| Trypsine-TPCK | Sigma-Aldrich | T1426 | |
| BD FACsCanto II Cytomètre en flux | BD Biosciences | ||
| Logiciel d’analyse cellulaire FlowJo 9.5 | Flowjo inc. | ||
| Teinture Trypan Blue (0,4 %) ; | Life technologies | T10282 | |
| Countess Compteur automatique de cellules | Invitrogen-Life Technologies | C10227 |
Références
- Bevan, M. J. Understand memory, design better vaccines. Nat. Immunol. 12, 463-465 (2011).
- Gaucher, D. Yellow fever vaccine induces integrated multilineage and polyfunctional immune responses. J. Exp. Med. 205, 3119-3131 (2008).
- Querec, T. D.
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Réimpressions et autorisations
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