Cellule T Capture batteri da Transinfection da cellule dendritiche

Aranzazu Cruz-Adalia; Guillermo Ramírez-Santiago; Mónica Torres-Torresano; Raquel Garcia-Ferreras; Esteban Veiga Chacón

doi:10.3791/52976

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Articolo metodologico

Cellule T Capture batteri da Transinfection da cellule dendritiche

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DOI:

10.3791/52976

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13 gennaio 2016

Aranzazu Cruz-Adalia¹ , Guillermo Ramírez-Santiago¹^,² , Mónica Torres-Torresano¹^,² , Raquel Garcia-Ferreras¹^,² , Esteban Veiga Chacón¹

¹Cellular and Molecular Biology, Spanish National Research Council (CSIC), Spanish National Biotechnology Centre (CNB-CSIC), ²Hospital de Santa Cristina, Healthcare Research Institute Princesa Hospital (IIS-Princesa)

In questo articolo

Sommario

Qui un protocollo viene presentato per misurare la cattura batterica da parte delle cellule ^T CD4 + che si verifica durante la presentazione dell'antigene via transinfection dalle cellule dendritiche pre-infettati (DC). Mostriamo come eseguire i passi necessari: isolamento delle cellule primarie, infezione di DC, DC / T formazione coniugato cellulare, e la misura di batteri trasfezione delle cellule T.

Abstract

Recentemente, abbiamo dimostrato, contrariamente a quanto descritto, che le cellule T CD4⁺, il paradigma delle cellule immunitarie adattative, catturano i batteri dalle cellule dendritiche infette (DC) attraverso un processo chiamato transinfezione. Qui descriviamo l'analisi del processo di transinfezione, che si verifica durante il corso della presentazione dell'antigene. Questo processo è stato svelato utilizzando cellule T CD4⁺ da topi OTII transgenici, che portano un recettore delle cellule T (TCR) specifico per un peptide di ovoalbumina (OVAp), che quindi può formare complessi immunitari stabili con cellule dendritiche infette caricate con questo specifico OVAp. La dinamica dei batteri che esprimono la proteina fluorescente verde (GFP) durante la trasmissione delle cellule DC-T può essere monitorata mediante imaging su cellule vive e la quantificazione della transinfezione batterica può essere eseguita mediante citometria a flusso. Inoltre, la transinfezione può essere quantificata con un metodo più sensibile basato sull'uso della gentamicina, un antibiotico aminoglicosidico non permeabile che uccide i batteri extracellulari ma non quelli intracellulari. Questo metodo classico è stato utilizzato in precedenza in microbiologia per studiare l'efficienza delle infezioni batteriche. Spieghiamo qui di seguito il protocollo dell'intero processo, dall'isolamento delle cellule primarie alla quantificazione della transinfezione.

Introduzione

Quando un agente patogeno infetta il suo ospite, di solito c'è una attivazione delle risposte immunitarie innate e adattative, necessari per la liquidazione dei batteri. L'immunità innata è la prima linea di difesa che impedisce maggior parte delle infezioni. L'immunità innata distinguere in precisi elementi di modo che si conservano tra grandi gruppi di microrganismi (modelli molecolari associati ai patogeni, PAMPs) ^1. I meccanismi dell'immunità innata sono barriere fisiche come la pelle, i prodotti chimici barriere (peptidi antimicrobici, lisozima) ed i leucociti innate, che includono fagociti (macrofagi, neutrofili e cellule dendritiche)....