Представленные методы забора печени, канюляции и перфузии с использованием нашего запатентованного устройства позволяют создавать сложные перфузионные установки для улучшения экспериментов по децеллюляризации и рецеллюляризации в печени крыс.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Порядок Decellularization из печени крыс в перфузии устройство Качающийся давления
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Децеллюляризация и рецеллюляризация паренхиматозных органов могут обеспечить генерацию функциональных органов in vitro, и уже опубликовано несколько протоколов децеллюляризации печени грызунов. Мы стремились улучшить процесс децеллюляризации путем создания запатентованного перфузионного устройства, позволяющего селективно проводить перфузию через воротную вену и/или печеночную артерию. Кроме того, мы стремились выполнить перфузию в условиях колеблющегося окружающего давления для улучшения однородности децеллюляризации. Гомогенность перфузионной децеллюляризации до настоящего времени была недооцененным фактором. Во время децеллюляризации области внутри органа, которые плохо перфузируются, могут все еще содержать клетки, в то время как внеклеточный матрикс (ВКМ) в хорошо перфузированных областях может уже быть поражен щелочными детергентами. Осциллирующие изменения давления могут имитировать изменения внутрибрюшного давления, которые происходят во время дыхания, чтобы оптимизировать микроперфузию внутри печени. В представленном здесь исследовании децеллюляризованные матрицы печени крыс были проанализированы путем гистологического окрашивания, анализа содержания ДНК и коррозионного литья. Перфузия через печеночную артерию показала более однородные результаты, чем перфузия портальных вен. Применение условий колебательного давления повысило эффективность перфузионной децеллюляризации. Печень, перфузированная через печеночную артерию и в условиях колебательного давления, показала наилучшие результаты. Представленные методы забора печени, канюляции и перфузии с использованием нашего запатентованного устройства позволяют создавать сложные перфузионные установки для улучшения экспериментов по децеллюляризации и рецеллюляризации печени крыс.
Введение
Decellularization и recellularization может позволить поколение функциональных, трансплантации органов в пробирке 1. Путем удаления клеток и антигенного материала (например., ДНК, альфа-гал эпитопы) из органа, не- или менее иммуногенной внеклеточного матрикса (ЕСМ) может быть получена. Эта матрица сохраняет трехмерное микроанатомии органа и может служить в качестве идеального биоматрицы для заселения с клетками другом, возможно, ксеногенной происхождения 2. Таким образом, decellularized крысы матрица печени может быть заселен клетками печени человека. Это гуманизированный микро-печени может служить экс естественных условиях....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Животные содержались в фонд экспериментальной медицины (МКЭ, Шарите, Берлин, Германия), и все экспериментальные протоколы были рассмотрены и утверждены Государственным управлением здравоохранения и местных дел (LAGeSo, Берлин, Германия;. Рег номер О 0365 / 11).
1. Печень урожая
- Предоперационная подготовка
- Используйте пробки пластину для фиксации. Положите медицинской драпировка на тарелку. Используя четыре иглы, исправить ингаляции маску на пробковой пластины для интраоперационной ингаляционного наркоза.
- Предварительной договоренности о портальной венозной канюли
- Подключите периферийное вен....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Однородность и, таким образом, эффективность различных протоколов decellularization были оценены макроскопическим наблюдением, гистологического анализа и анализа остаточным содержанием ДНК в decellularized матриц печени. Кроме того, коррозия литье с целью визуализации нетронутыми микроанатомии из печени после decellularization.
Макроскопии
Во decellularization, печень становится Lucent, указывающий удаление клеточного содержимого. Печень перфузии через воротную в.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Хотя представлены техника для уборки печени крысы и decellularization легко воспроизводимым, есть определенные критические шаги, чтобы рассмотреть:
В ходе подготовки к заготовке печени, важно, чтобы избежать кровотечение, потому что он активирует свертывание крови и может привести к образованию тромба в печени. На наш взгляд, это выгодно надрезать брюшной аорты непосредственно перед тем катетеризации воротной вены, чтобы избежать притока крови через печеночную артерию при перфузии через сист.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторам нечего раскрывать.
Благодарности
Авторы хотели бы выразить благодарность Штеффену Липперту, Халиду Алиеву, Коринне Йёренс и Катарине Струкер за их помощь во время этого проекта.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Самостоятельно построенная артериальная канюля | |||
| Portex Нестерильная полиэтиленовая трубка | SIMS Portex | REF 800/110/100 | 0,28 мм ID 0,61 мм OD |
| Portex Нестерильная полиэтиленовая трубка | SIMS Portex | REF 800/110/200 | 0,58 мм ID 0,96 мм |
| OD Venodrop Безопасный катетер-бабочка | Fresenius Kabi | 3275851 | 21 G |
| канюля для воротной вены | |||
| Периферический венозный катетер | BD | 393224 | BD Venflon Pro 20G |
| Трехходовой стоп-кран | smiths медицинский | 888-101RE | |
| ватные палочки | Hecht-Assistent | 4302 | |
| ватные диски | Шаосин Чжэндэ Хирургическая повязка | 13H118-03 | |
| Марлевая повязка | Хубэй Хайгэ Медицинские инструменты | 14388 | |
| Ringer Solution | Fresenius Kabi | 13 HKP022 | 1000 мл |
| 10 мл Шприц | Braun | 4606108V | 10 мл/ Luer Solo |
| 5 мл Шприц | Braun | 4606061V | 5 мл /Luer Solo |
| Шовный материал (Шелк 6/0) | Resorba | H1F | LOT 105001.81 |
| медицинская простыня | Shaoxing Zhengde Хирургическая повязка | D0613011 | |
| surgical инструменты | |||
| иглодержатель | Geuder | 17570 | |
| микрощипцы | Inox-Electronic | 91150-20 | |
| микроножницы | Martin | 11-740-11 | |
| микрощипцы | S& Т | ||
| Зажим | Эскулап | BH111R | |
| ножницы | F S T | 14501-14 | |
| хирургический щипцы | Aesculap | BD 557 | |
| Децеллюляризация | |||
| Респиратор | Resmed | 14.24.11.0004 | SmartAIR ST |
| перфузионное устройство | Charite, медицинская инженерная лаборатория | изготовленное на заказ устройство | децеллюляризации |
| перистальтического насоса ismatec reglo ICC | IDEX | ISM4408 | 4-канальный |
| Удлинитель Heidelberger 75 см | Fresenius Kabi | 2873 | 75 см |
| MS/CA насос-сегмент | IDEX | IS 3510 | MS/CA/click'n'go/POM-C |
| CA 2-стопорная трубка | Pharmed | BPT NSF-51 | |
| ловушка для пузырьков | изготовленный на заказ товар | ||
| соединитель шланга Luer Lock | Neolab | No 02-1887 | |
| Моющие средства | |||
| SDS пеллеты | Carl Roth | CN30.4 | 2,5 кг |
| Triton X-100 | Карл Рот | 3051.1 | 10 л |
| ПБС | Gibco | 14190-094 | DPBS |
| окрашивание | |||
| Eosin 1% | Morphisto | 10177 | |
| Mayer гематоксилин | AppliChem | A4840 | |
| окрашивание гомори | Morphisto | 11104 | |
| AlcainBlue-PAS окрашивание | Morphisto | 11388 | |
| Direct Red 80 | Сигма Олдрич | 365548 |
Ссылки
- Struecker, B., Raschzok, N., Sauer, I. M. Liver support strategies: cutting-edge technologies. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 11, 166-176 (2014).
- Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
