Bu protokol, fulleren ile harmanlanmış iletken polimer nanopartiküllerin üretimi için bir yöntemi tanımlar. Bu nanopartiküller, Fotodinamik Terapi (PDT) için yeni nesil ışığa duyarlılaştırıcılar olarak potansiyel kullanımları açısından araştırıldı.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Karma Polimer / Fulleren Nanopartikül photosensitizers Şefliği ile Fotodinamik Tedavi
Bu makalede
Özet
Özet
Bu makalede, Fotodinamik Terapi (PDT) için yeni nesil ışığa duyarlılaştırıcılar olarak fulleren ile harmanlanmış iletken polimer nanopartiküllerin üretimi ve tekrarlanabilir in vitro değerlendirmesi için bir yöntem bildirilmiştir. Nanopartiküller, yarı iletken polimer MEH-PPV'nin (poli[2-metoksi-5-(2-etilheksiloksi)-1,4-fenilevinilen]) fulleren PCBM (fenil-C 61-bütirik asit metil ester) ile uyumlu olmayan bir çözücü varlığında hidrofobik etkileşimi ile oluşturulur. MEH-PPV, yüksek üçlü oluşum oranlarına ve fulleren PCBM'ye verimli şarj ve enerji transferine yol açan yüksek bir sönme katsayısına sahiptir. Son işlemlerin, fulleren destekli üçlü ve radikal oluşumu yoluyla PDT sisteminin verimliliğini arttırdığı ve MEH-PPV'nin ultra hızlı deaktivasyonunun uyarıldığı belirtildi. Burada bildirilen sonuçlar, bu nanopartikül PDT duyarlılaştırıcı sistemin oldukça etkili olduğunu ve kanser hücre hatlarına beklenmedik bir özgüllük gösterdiğini göstermektedir.
Giriş
Fotodinamik Terapi (PDT) photosensitizers hedef dokuya uygulanır ve foto ışığa maruz kaldığında reaktif oksijen türlerinin (ROS) oluşturur. Böyle tekli oksijen ve süperoksit olarak ROS türleri oksidatif stres, hücre ve dokuların 1-4 sonraki yapısal hasara neden olabilir. Nedeniyle uygulama kolaylığı için bu yöntem etkin incelenmiş ve klinik çalışmalar yer 5,6 almış. Bununla birlikte, bu (azalmış biyolojik ve potansiyel akut toksisite yol açar) hassaslaştırıcı karanlık hassaslaştırıcıların toksisitesi, gün ışığına (nedeniyle hassasiyetini seçici olmayan dağılıma), hastanın duyarlılığı ve hidrofobiklik kadar önemli sorunlar devam ediyor.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Kültürleme Hücre Soyları
- En az 2 dakika süreyle sıcak su içinde soğutucu şişeleri tutarak çözülme TE 71 (fare timik epitelial hücreler), MDA-MB-231 (insan meme kanseri hücreleri), A549 (insan akciğer kanseri hücreleri) ve OVCAR3 (insan yumurtalık tümörü hücreleri) . 106 x g'de 6 dakika boyunca, her bir hücre hattı ve santrifüj uygulanıp% 10 FBS ile takviye edilmiş 10 ml DMEM ortamı.
- Süspansiyon aspire ve pelet 3ml medya ekleyebilirsiniz. Düzgün bir kaç kez pipetleme hücreleri karıştırın. Bu hücre çözeltisi T75 balonlarına içinde% 10 FBS ile takviye 7 mi DMEM ortamı ısıtılmış ön ekleyin ve 37 ° C'de% 95 hava /% 5 CO2 nemli bi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Alım ve nanopartiküllerin içsel sitotoksisite
Ağırlıkça% 50 harmanlanmış MEH-PPV / PCBM nanopartiküller TE 71 ile inkübe edilmiştir, MDA-MB-231, A549 ve OVCAR3 hücre çizgileri. PCBM karıştırma seviyesi konjuge polimerler ve fullerenler 14 arasında ideal bir yük ve enerji transferi özellikleri temin ettiği gösterilmiştir ağırlıkça% 50 PCBM olarak seçildi. Nanoparçacık alımının Floresan görüntüleri Şekil 1B'de gösterilmiştir. Hücreler nanoparçac.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Nanopartiküller imalatı sırasında nanoparçacık alımını sağlamak için bazı kritik önlemler korumak için gerekli oldu. Bu solüsyonun konsantrasyonu oluşturulmuştur nanopartiküllerin büyüklüğü belirlemede önemli bir rol oynadığı görülmüştür gibi THF (ağırlıkça% 50 PCBM ile harmanlanmış) bir 10 -6 M MEH-PPV çözelti DI su içine enjekte etmek için hazırlanmıştır. Konsantrasyon UV-vis spektroskopi ile kontrol edilmiştir. Protokol aşamasında olduğunu ilk bu çözümün beri UV-vis spektrumları almadan önce ilk olarak haz.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.
Teşekkürler
Yazarlar, bu çalışmanın bir KARİYER ödülü (CBET-0746210) ve CBET-1159500 ödülü aracılığıyla bu çalışmaya mali destek için Ulusal Bilim Vakfı'na (NSF) minnetle teşekkür eder. Hücre kültürü konusundaki yardımları için Dr. Turkson'a (Hawaii Üniversitesi Kanser Merkezi) ve Dr. Altomare'ye (Central Florida Üniversitesi Tıp Fakültesi) teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Poli[2-metoksi-5- (2-etilheksiloksi)-1,4-fenilenevinil] (MEH-PPV) | Sigma Aidrich | 536512-1G | ortalama Mn 150.000-250.000 |
| [6,6]-Fenil C61 bütirik asit metil ester (PCBM) | Sigma Aidrich | 684449-500MG | % 99.5 |
| Tetrahidrofuran (THF) | EMD | TX0284-6 | Drisolv |
| 1 ml şırınga | Ulusal Bilim Şirketi | 37510-1 | MEH-PPV çözeltisinin filtrasyonu için |
| Şırınga filtresi | VWR | 28145-495 | 25 mm, 0.2 ve mikro; m, PTFE |
| 1 ml şırınga | Hamilton Company | 81320 | Nanopartiküller yapmak için MEH-PPV çözeltisinin suya enjeksiyonu için |
| Dulbecco'nun Eagle's Medium/Ham's F-12 50/50 Karışımı (DMEM) | Corning (VWR) | 45000-350 | |
| Hank'in fenol kırmızısı içermeyen Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) | Kalite Biyolojik (VWR) | 10128-740 | |
| Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin, 1x kalsiyum ve magnezyum içermez (DPBS) | Corning (VWR) | 45000-436 | |
| Fetal Sığır Serumu, Düzenli (Isıyla Etkisizleştirilmiş) (FBS) | Corning (VWR) | 45000-736 | |
| Tripsin EDTA 1x% 0.25 | Corning (VWR) | 45000-664 | Tripsin / 2.21 mM EDTA, sodyum bikarbonat, kalsiyum ve magnezyum içermeyen HBSS'de Domuz Parvovirüsü Test Edildi |
| %16 Paraformaldehit | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 15710 | %16 paraformaldehit, PBS DAPI eklenerek %4'e seyreltilir |
| . Biotium VWR | 89139-054 | Nükleer leke | |
| 5 ml pipetler | VWR | 82050-478 | |
| 75 cm2 kültür şişesi | Hücrelerin kültürlenmesi için | VWR | 82050-856 |
| MTT tahlilleri için | 96 oyuklu plakalar | VWR | 82050-771 |
| Havalandırma Delikleri ile Doku Kültürü Kapları | Greiner Bio-One (VWR) | 82050-538 | |
| Propidium iyodür | Moleküler problar | P3566 | |
| Annexin V FITC | Invitrogen | A13199 | apoptoz için boya |
| Celltiter 96 non-R 1000 tahliller | Promega (VWR) | PAG4000 | MTT |
| CellROX Yeşil Reaktif, oksidatif stres tespiti için | ROS için Invitrogen | C10444 | algılama |
| UV-vis spektrometresi | Agilent 8453 | ||
| Floresan spektrometresi | NanoLog HoribaJobin Yvon | ||
| Dinamik ışık saçılma | PD2000DLS, Hassas dedektör | ||
| İnkübatör | NuAir DH Autoflow | ||
| Konfokal mikroskop | Zeiss Axioskop2 | 63X yağa daldırma objektif lensi | |
| Epilüminesans mikroskobu | Olympus IX71 | 60X suya daldırma objektif lens, Andor Zyla sCMOS kamera | |
| Güneş Simülatörü | Newport 67005 Oriel Instruments | ||
| Referans güneş pili | Oriel | VLSI Standartları Dahil | |
| Mikroplaka okuyucu | BioTek Ex808 | ||
| Hemositometre | Hausser Bilimsel Ortaklık | 3200 | Hücreleri saymak için |
Kaynaklar
- Dolmans, D., Fukumura, D., Jain, R. K. Photodynamic therapy for cancer. Nat Rev Cancer. 3 (5), 380-387 (2003).
- Dougherty, T. J., et al. Photodynamic therapy. J Natl Cancer Inst. 90 (12), 889-905 (1998).
- Ferrari, M.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
