Studies van gehemelte ontwikkeling worden gemotiveerd door de incidentie van gespleten gehemelte, een aangeboren afwijking die een enorme gezondheid last oplegt en kunnen verlaten blijvende verminking. We tonen hier een techniek om cultuur palatini die kunnen worden gebruikt om verschillende signaalwegen betrokken bij palatinale ontwikkeling en fusie bestuderen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Wijze van Studeren Palatal Fusion met statische Organ Cultuur
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Schisis behoren tot de meest voorkomende van alle aangeboren afwijkingen. De secundaire gehemelte vormen van mesenchymale planken bedekt met epitheel die voldoet aan de middellijn epitheliale naad (MES). De theorieën suggereren dat MES cellen volgen een epitheliale naar mesenchymale transitie (EMT), apoptose en migratie, het maken van een gesmolten smaak 1. Volledige desintegratie van de MES is de laatste essentiële fase van palatal samenloop met omliggende mesenchymale cellen. Wij bieden een methode voor het gehemelte orgelcultuur. De ontwikkelde in vitro protocol maakt het onderzoek mogelijk van het biologische en moleculaire processen tijdens fusion. De toepassingen van deze techniek zijn talrijk, inclusief het evalueren respons op exogene chemische agentia, van regulerende en groeifactoren en eiwitten. Palatal orgelcultuur heeft een aantal voordelen, waaronder manipulatie in verschillende stadia van ontwikkeling die niet mogelijk is met in vivo studies.
Inleiding
Orofacial kloven zijn de meest overheersende craniofaciale aangeboren afwijkingen. Ook rekening houdend met alle mogelijke craniofaciale afwijkingen, dit zijn de tweede meest voorkomende geboorte afwijkingen bij pasgeborenen 2. Gespleten gehemelte optreden bij ongeveer 1 op elke 700 geboorten in de Verenigde Staten (VS) per jaar, de incidentie van gespleten gehemelte is gelijk aan 475 kinderen geboren met een gespleten gehemelte per maand of 15 kinderen met spleten per dag 3. Ongeveer 1% van de kinderen geboren in de wereld elk jaar vertonen een bepaalde vorm van craniofaciale dysmorfologie.
Spleten van het gehemelte....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Alle procedures beschreven moeten worden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en voorschriften voor het gebruik van gewervelde dieren, met inbegrip van de voorafgaande goedkeuring door de lokale Institutional Animal Care en gebruik Comite.
1. Voorbereiding van ontleden Instruments en Cultuur Media
- VOORWAS alle instrumenten voor gebruik in dissectie met 3% waterstofperoxide en daarna autoclaaf bij 121 ° C gedurende 20 min. Filter BGJb media met antibiotica en antimycotische oplossing om met een 0,22 pm porie-sized filter met afzuiging in een kap.
2. Voorbereiding van Cultuur Equipment....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De techniek kan worden toegepast op verschillende soorten experiments.The volgende studie werd ontworpen om de teratogene effecten van nicotine in vitro op palatale fusie te testen. Twee stammen van muizen werden gebruikt voor dit experiment, CD1 en C57.Palatal weefsel werd behandeld met 0,06 en 6 mM concentraties van nicotine hemisulfaat. Waargenomen werd dat palatinale fusie patronen en timing waren in de twee verschillende stammen. In CD1 muizen palatal planken uit de controlegroep bleef fusie in ti.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Het protocol in dit artikel een werkwijze voor het ontleden palatal planken uit embryo's op embryonale dag 13,5. Palatini van muizenembryo's werden gekweekt in een serumvrij kweekmedium in een atmosfeer van 95% O 2 5% CO2 bij 37 ° C. Succesvol palatinale dissectie kritisch afhankelijk van meerdere factoren bij elke stap tijdens de procedure van de embryonale moment van de muizen gedood om de voltooiing van de kweek. Een van de belangrijkste factoren palatinale fusie is de tijd voor de orgel.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben geen enkele concurrerende financiële belangen.
Dankbetuigingen
De auteurs hebben geen erkenningen.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| BGJb | Invitrogen | ||
| Penicillin/Streptomycin | Lonza Inc. | 17-602E | 100X |
| Petrischalen | VWR | 25384-088 | 100 x15 mm |
| Center-well orgaankweekschaal | Falcon | #353037 | 60 x15 mm |
| Draaddriehoekig raster | Op maat gemaakt met roestvrij staal gaasdraad om in de orgaankweekschaal te passen. | ||
| Polycarbonaatfilter | GE& Water and Process Technologies | K04BP04700 | Zwart 0,4 micron, 47 mm |
| Stereomicroscoop | ZEISS Stemi SR | ||
| Kultuurkap | NUAIRE Laminar Flow | ||
| Microdissectietang | Dumont Medical | #5 | |
| Microdissectiescharen | Kent Scientific Corporation | INS14003-G | Vannas Scharen, recht, 8 cm lang, 0,1mm uiteinden, 5 mm messen, Duits gemaakt |
| Microdissectiescharen | Kent Scientific Corporation | INS500086 | Vannas Scharen, recht, 8,5 cm lang, 0,025 mm x 0,015 mm uiteinden, 7 mm messen |
| Microdissectiescharen | Kent Scientific Corporation | INS14127-G | Verenschaar gebogen gebogen, 10,5 cm lang, 8 mm messen, Duits gemaakt |
| Chirurgische curette (lepel spatel) | Hu-friedy | CM 2/4 | |
| Laboratoriumkapbeschermer | Labconco | ||
| Incubator | Thermo Scientific | Farma | |
| Series11 watermantel | |||
| CO2 incubator | |||
| PBS | GIBCO | 10010-023 | 1X |
| Vezel optische lichtbron | Fiber-light Dolan-Jenner | PL-750 | |
| Inbeddingscassette | Statlab | EC301 | |
| Kim Wipes | VWR | 470173-504 |
Referenties
- Nawshad, A. Palatal seam disintegration to die or not to die that is no longer the question. Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 237, 2643-2656 (2008).
- Strong, E. B., Buckmiller, L. M.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
