Abstract
Ya da diğer küçük böcekler - - basit bir şekilde burada açıklanan sosyal alan tahlil Drosophila melanogaste r sosyal etkileşimlerini ölçmek için kullanılabilir. Daha önce 1 gösterdiği gibi, iki boyutlu bir oda içinde, ilk önce, sıkı bir grubu oluşturmak için sinekler kuvvet, daha sonra, birbirlerinden kendi tercih edilen mesafe almaya izin verir. Sinekler yerleşmiş sonra, biz ücretsiz çevrimiçi yazılımları (ImageJ) ile statik bir resim işleme, yakın komşuya (veya sosyal alan) mesafeyi ölçün. Potansiyel karıştırıcı faktörlerin kontrol altında tutarken en yakın komşusu mesafe analizi, araştırmacılar sosyal etkileşim üzerine genetik ve çevresel faktörlerin etkilerini belirlemek için izin verir. Böyle tırmanma yeteneği, gün, cinsiyet zaman ve sinek sayısı gibi çeşitli faktörler, sineklerin sosyal aralığı değiştirebilirsiniz. Böylece bu karıştırıcı etkilerini azaltmak amacıyla deneysel kontrollerin bir dizi öneriyorum. Bu tahlil canen az iki amaçlar için kullanılabilir. İlk olarak, araştırmacılar (örneğin izolasyon, sıcaklık, stres veya toksinler gibi) sevdikleri çevresel vardiya sosyal aralığı 1,2 nasıl etkileyeceğini belirleyebilirsiniz. İkincisi, araştırmacılar sosyal davranış 1,3 bu temel formu genetik ve sinirsel temellerini incelemek olabilir. Özellikle, bu tür insanlarda 4 otizm için aday genlerin gibi diğer organizmalar, sosyal davranış dahil olmak üzere düşünce orthologous genlerin rolünü araştırmak için bir tanı aracı olarak kullanılır.
Introduction
Sosyal etkileşimler, bir bütün olarak, bir grup içindeki bireylerin doğru gelişmesi ve sağlığı için çok önemlidir ve bu meyve sinekleri (Drosophila melanogaster) 5,6 olarak basit organizmalar için insanlarda (Homo sapiens) dan, çok sayıda türler arasında görülebilir. Işitsel, görsel, koku, dokunma, tatma veya: Tek bir meyve sineği ya da insan payı ortak araçlar duyusal o olsun bu etkileşimler sırasında bilgi, işlemek için. Biz ve diğerleri sosyal etkileşimler ve evrimsel olabilir ilgili nöronal hücreleri ve genler 7 korunmuş olduğu davranışsal tepkileri altında yatan potansiyel ortak neurocircuitry olduğunu varsayımında. İlk etkileşim meydana geldi sonra, etkileşim, bireyler arasındaki sosyal alan olacak, ya bir artış (sosyal kaçınma 8) veya azaltmak (grup oluşumu / yığılması 5). Daha karmaşık etkileşimler, saldırganlık ya da kur gibi, o zaman gerçekleşebilir.
1-4,9 kullanılan, Drosophila melanogaster stabil gruplarında sosyal etkileşim değerlendirmek arası uçucu mesafe veya sosyal alan nicelleştiren basit bir protokol açıklar. Sosyal alan sinek ve en yakın komşusu 10 arasındaki mesafe bir ölçüsü anlamına gelir. Sosyal alan D. verilen nüfus için tutarlı deneysel koşullar (yaklaşık 1-2 içinde vücut uzunluklarının ortalama) korunmuş ve bireysel izolasyonu 1 muhafaza edilmiş ise artan sineklerin sosyal deneyim açısından farklılık vardır melanogaster. Doğru görme, klasik koku veya SVO algı 1 normal bir sosyal mesafeyi korumak için gerekli değil ama. Sosyal alan ölçüsü böylece olabilirSosyal etkileşimleri analiz ve D'de sosyal davranışı ölçmek için bir tanı aracı olarak kullanılan melanogaster 1.. Biz bu ölçümü gerçekleştirmek için, ve ne ölçüde ortak deneysel değişkenler bu davranışını etkileyen nasıl ayrıntılarıyla burada açıklamak.
Bir ölçüde - - yapılacak sosyal alan etki Biz deney gerçekleştirilir boşluğun yanı sıra, sineklerin sayısı yönü göstermektedir. Daha önce kamara geometri sinekler 11,12 spontan keşif hareketi etkilediği gösterilmiştir ve onlar yerleşmeye karar nerede bu fenomen sonuçta etkileyebilir. Ancak, sürece sinek yoğunluğu (sinek / cm 2) ve bölme yönelim aynı tutulur, sineklerin sosyal alan da sabit kalır. Bu testte sağlamlığı bağımsız laboratuvarlar wh mutantlar tarafından görüntülenen sonucu çoğaltabilirsiniz farklı odacık boyutlarını, şeklini kullanarak ve oryantasyon gerçeği ile gösterilmektedirbir artış, sosyal alan olan ite geni (göz pigmentasyon etkileyen), (1 dikey üçgen veya yatay daire, 3, hava akımı ile yatay kare).
Biz erkekler değil, kadınlar, daha da ayrı akşamları olduğunu göstermektedir Bizim sonuçları, sosyal alan deney yapıldığı zaman muhafaza sonuçların tutarlılığı açısından son derece önemli olduğunu göstermektedir. Ancak, gündüz ve akşam saatleri arasında görülen farklar sineklerin faaliyet farklılıklara bağlı değildir ve sosyal alanı ile ilişkili olmadığını aktivite düzeylerini gösteren argümanları tartışmak.
Son olarak, beyaz mutant tarafından belirtildiği gibi toplumsal alanın belirlenmesi genetik temelleri şimdiden 1,3 tarif vardır, ve biz burada sunuyoruz sinekler çeşitli kendilenmiş ve vahşi yakalanmış suşlar arasındaki farklar.
Bu nedenle, bu deney, mükemmel bir araç f yaparveya genetik etkilerini yanı sıra çevresel faktörleri araştırmak.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
In-house düzenlendi 1. Ekipman ve Reaktifler (Diğerleri için malzemeler gör Liste)
- Daha önce 8 açıklandığı gibi bir Drosophila soğuk anestezi cihazı hazırlayın.
- Daha önce 13 açıklandığı gibi bir sinek aspiratör hazırlayın.
- Sosyal uzay odaları ve tutucular hazırlayın.
- Sipariş veya sosyal alan odaları oluşturmak için cam bölmeleri ve akrilik ayırıcılar yapmak. Her sosyal alanı bölmesi 0.3 cm kalınlığında, 16.5 cm, 8,9 cm bir bazın bir yüksekliğe sahip, iki dik üçgen akrilik aralayıcılar ((0,3 cm kalınlığında, 17.6 cm 17,6 cm) bir, iki kare cam bölmeden oluşur ) ve iki dikdörtgen alanlar (0,3 cm kalınlığında 1,5 cm 9 cm) (Şekil 1A).
- Bu Şekil 1 B 'de bölme ile aynıdır, öyle ki cam ve akrilik sosyal alan bölmesini monte edin. Bunu yapmak için, öyle ki cam bir kare bölmesinin üstüne bir üçgen boşluk düz koyarak başlamak dik açıÜçgen aralama kare bölmesinde köşelerinden biri ile uyumludur. Sonraki ilk üçgen ayırıcı yansıtma, kare bölmesinin üstündeki ikinci üçgen boşluk düz yerleştirin.
NOT: elinden yağlar ve kokuları ile parçaları kontamine etmeyecek şekilde eldiven giymek emin olun. - Kapsamında değildir bölmesinin yan tarafı boyunca, kare bölmesinin en düz iki küçük dikdörtgen ayırıcılar yerleştirin. Kare düzlemin üstünde akrilik ayırıcılar şimdi üçgen arenada oluşturmalıdır.
- Aşağıda cam orijinal bölmesinin üzerinde hizalanacak şekilde, akrilik aralama üstünde cam bir ikinci kare bölme yerleştirin.
- Sosyal uzay odasını oluşturmak üzere bir araya bölme ve ara sabitleyen dört bağlayıcı klipleri kullanın. Cam bölmeler içinde onları güvence üçgen aralama her uzun kenarı boyunca, köşeye yakın tek klibi yerleştirin. Bu aynı tarafta, onları güvence dikdörtgen aralama her aşkın, bitişik köşede bir klip yerleştirmekCamların yan.
- Bir destek standı ve sosyal alan odasının çalışma yüzeyinin üstünde onun kenarında dinlendiği gibi kelepçe, dik konumda sosyal alan odasını koruyacaktır böyle bir şişeye kelepçe birleştirin.
- Deneyde her tekrarı için bir sosyal alan odasını montajı ve durmak destekliyoruz.
- Test sineklerin tırmanma yeteneği kontrol etmek için bir tırmanma tahlil yanıt cihazı hazırlayın.
- Daha önce 14,15 tarif edildiği gibi, bir karşı cihazı kullanın.
- Beyaz tezgah kapağı ve beyaz zemin önünde kaplı bir çalışma yüzeyine deney yaparak homojen aydınlatma koşulları sağlamak.
2. Deney öncesi Sinekler hazırlanması
- Standart Drosophila içeren şişelerde sinekler yiyecek sinek koruyun. 12 saat aydınlık / karanlık döngüsünde 25 ° C'de bir kuluçka bölmesinde muhafaza edin.
- E Bir iki gün önceXperiment, toplamak ve daha önce 8 açıklandığı gibi cinsiyet, soğuk anestezi altında uçuyor.
- Soğuk anestezi cihazı Chill -4 ° C. Yeri 50 ml'lik plastik tüplere uçar. Tamamen sinekler hareketsiz olmak için en az 5 dakika bekleyiniz, yalıtılmış bir buz kovası, buz içine sinekler içeren plastik tüpler daldırın.
- Soğuk anestezi cihazının polietilen levha üzerine sinekler yerleştirin. Oda sıcaklığında, kadınlarda gelen erkeklerin ayırmak için Stereomikroskopta kullanın. Standart Drosophila içeren şişeler içinde, gruplar halinde, sinekler koruyun flakon başına 40 sinekleri aşmayan, gıda sinek.
- İki saat deney başlamadan önce, deney gerçekleştirilir oda sıcaklığı 24-25 ° C arasındadır ve nem yaklaşık olarak% 50 olduğundan emin olun.
- Gıda içeren yeni şişe içine sinekler aktarın ve deney yapılacaktır çalışma yüzeyine 2 saat koyun.
NOT: Bu experimen içints, kullanılan sinek suşları Drosophila melanogaster suşları vardı: 1118 w, Cs 10 (veya W - Kanton-S 10 kez çaprazlanırlar 1118 w) Kanton-Özel veya Kanton-S (CS), Oregon ve Semerkand sinekler laboratuvarımızda tüm vardı hisse senetleri 16; Elwood sinekler Long Island, New York, ABD 8, Huntington Elwood Mahallesi'nde Sonbahar 2011'de toplanmıştır. Aksi belirtilmediği zaman dışında, sunulan sonuçlar Kanton-S (kırmızı tonlarında) uçar ile elde edilmiştir.
3. Deneme Sahne
- (- Işık başladıktan sonra saat zaman - Zeitgeber zamanlı ZT 4 ila 7) 12 pm ve 3 saatleri arasında deney yapın.
- Sinekler transferi için sosyal alan odasını hazırlayın.
- Vücudunuza yakın dikdörtgen aralayıcıları içeren tarafı, bir çalışma yüzeyine bir sosyal alan kamara düz yerleştirin.
- O Kaldırne vücudunuzun en yakın klip ve dikdörtgen spacers arasında yaklaşık 1 cm boşluk yaratarak, dışarıya tek dikdörtgen ayırıcı kaydırın.
- Bandı ve kalem kullanarak, cinsiyet, gerginlik ve tekrar sayısı ile bir üst köşede sosyal alan odasını etiket. İç üçgen arenada kısmını kapsamaz bandı sağlamak için özen gösterin.
- Sosyal uzay odasına sinekler aktarın.
- Aktarım, yeni, boş bir şişe içine gıda içeren flakon kendi uçar. Aspire boş şişeye uçar ve sosyal alan odasına aktarabilirsiniz.
- Aspiratör ucu içine sinekler çizmek Nefes. Sosyal uzay odasının dikdörtgen aralama arasında 1 cm boşluk içine ucu yerleştirin ve iç üçgen arenaya sinekler zorlamak için tutarlı bir oranda nefes verin.
- Hemen iç üçgen arena tabanını kapanış yerine geri dikdörtgen ayırıcı kaydırın ve tekrar bağlayıcı klibi yerleştirin.
- Deneysel çalışmalar gerçekleştiği yerlerdir farklı bankta bulunan bir vurma pedi, üzerinde, dikdörtgen aralama alt tarafta olduğu gibi dik sosyal alan odasını tutun. Tüm sinekler sağlamak için Sterlini üç kez arena altına düşmüş.
NOT: sinekler altına düştüğü sağlamak için aparat güvenli bir tutuş korurken küçük odacık boyutu (Şekil 1D) dışarı çıkmış akrilik ayırıcı için çalışma yüzeyinin üzerine dirseklerinizi patlama nedeniyle. - Bir zamanlayıcı başlatın.
- Çalışma yüzeyine sosyal alan odasına yerleştirin ve dik tutmak için destek standı ve şişe kelepçe kullanın. İç üçgen alanda herhangi bir bölümünü kaplayan bir cetvel ya da sosyal alan odasına karşı düz bilinen uzunlukta bir etiket değil, yerleştirin.
- Yatay konumlandırılmış deneyler için, destek stand sosyal alan odasına koymayın; yerine çalışma yüzeyine sosyal alan kamara düz yatıyordu.
- Sinekler yerleşti zaman genellikle yaklaşık 30 dakika sonra, sosyal alan odasının bir resim çekmek. Çerçeve tüm iç üçgen arena, cetvel ve etiketi içerdiğinden emin olun.
- Her genotip ve durum (ideal 3 dahili çoğaltır ve 3 bağımsız tekrarlar) için deney tekrarlayın.
4. Sosyal Uzay Veri Analizi
- ImageJ 17 aşağıdaki makrolar alma
- ImageJ buradan ulaşabilirsiniz: http://rsbweb.nih.gov/ij/.
- Makro alt adlı 'Measure_Distances.txt' ImageJ / plugins klasöründeki bir dosyaya aşağıdaki makro kaydetme ve Yardım> Güncelleme Menüler komutunu kullanarak Eklentiler menüsünden, bir 'Ölçü Mesafeler' komutunu oluşturabilirsiniz. '
- Bir .txt kopya ek veriler verilmektedir ve ilk 3'te yayınlanan makro dosyası.
- Bir bilgisayara resim yüklemek ve bir pictu açınImageJ kullanarak yeniden.
- Etiketinde için (aynı yaklaşımı resimde cetvel üzerinde 1 cm işaretleri 0 cm bir çizgi çizerek bir ölçek oluşturmak ve Analiz sekmesi altında, o mesafe için 1 cm'lik bir ölçek ayarlamak için Set Ölçek özelliğini seçin Bilinen uzunluk). Resim ölçeği uygulamadan önce Küresel seçeneği seçin.
- Mümkün olduğunca resmin geri kalanı kadar çıkarırken, bu sinek tümünü içerir böyle Görüntü sekmesi altında Kırpma özelliğini kullanarak resim kırpın.
- Görüntü sekmesi altında Tipi seçeneğinden 8-bit seçerek resim siyah ve beyaz yapın.
- Görüntü sekmesinin ayarla seçeneği altında Eşik özelliği giderek resimden tüm arka plan gürültü çıkarın. Geliştirmek veya her sineğin beden imajı açıkça başka işaretler olmadan görülebilir böylece kontrast kaldırmak için sürgüleri sürükleyin. Değil sinekler olan işaretler varsa, dikdörtgen aracı ile onları yakalamak ve onları silin.
- Yı kurAnaliz sekmesi altında Set Ölçümleri aracını kullanarak ölçümler. Alan, Kütle, Geometrik Merkezi ve Görüntü Etiket seçin. Ardından, analiz Parçacıklar sinekler temsil tüm siyah noktalar numaralı bir liste oluşturmak için Analiz sekmesi altında özelliğini seçin.
- Tüm parçacıkların analiz kullanılarak set boyutu 0,01-0,1 (piksel birimi seçin DEĞIL); dairesellik 0,00-1,00; göstermek özetliyor; sonuçlarını görüntülemek ve yöneticiye ekleyin.
- Her kara nokta (her parçacık) orijinal resme numaralı liste karşılaştırarak, orijinal resimde olan sinekler doğru bir temsilidir olduğundan emin olun.
NOT: birbirine çok yakın olan bazı sinekler tek parçacık olarak sayılmasına, el ikili görüntüde iki sinekler ayırmak için beyaz bir çizgi çizin.
- Ea dan, cm, mesafeleri içeren yeni bir liste oluşturmak için Eklentiler sekmesinde ikinci Makro seçeneği altında Liste Mesafeler makro - liste seçili iken, En Yakın Komşu kullanınch kendilerine en yakın komşusu uçmak.
- ImageJ en yakın komşu mesafeleri kopyalayın ve elektronik tablo programı sütuna yapıştırın.
- Aynı e-tabloya üzerine her tekrar tüm verileri derlemek ve genotip ve durumuna göre düzenliyoruz.
- İstatistiksel yazılımı kullanarak veri analizi yapın. Bu deneyde, Graph Pad Prism (MacOSX sürüm 6, GraphPad Yazılım, San Diego California USA, www.graphpad.com) tek yönlü ANOVA ve Kruskal Wallis Testleri, Tukey en ve Dunnet Post-Hoc testleri yürütmek için kullanılmıştır.
- Mesafeler dağılımı olmayan bir parametrik dağılımı 1 izler ve veri kutusu ve Tukey bıyıkları (outliers ortadan kaldırmak için) olarak temsil edilmektedir.
5. Tırmanma Testi (Kontrol Davranışı)
- Yeteneği 14,15,18 tırmanma testi sinekler bir kontrol olarak bir tırmanma tahlil kullanın.
- Karşı akım cihazı kullanın şekilde üç deneme cBir paralel çalıştırılabilir.
- Karşıt konumlarda taze boş şişeleri ile karşı akım aparatı dibinde 1., 3 rd içine 100 naif sinekler üç farklı test şişelerde (daha önce test edilmemiş sinekler) ve bunları ek Transfer 50 ve son yuvaları.
- Aparatın altındaki boş yuvalara taze, boş şişeleri yerleştirin.
- Denemeyi başlatmak için, bütün sinekler her tüpün dibinde öyle ki, aygıtına üç kere aşağı dokunun.
- 15 saniye Sayacı başlat (üst flakon ulaşmaya 3-7 gün eski Kanton-S ~% 100 için yeterli zaman - Şekil 3F bakınız).
- Bir yuva ile üst şişeleri yerini almaya, karşı-akım cihazının üst kısmını kaydırın.
- Alt şişelerde tüm sinekler getirmek için aşağı aparatı dokunarak sinekler toplayın.
- 1 ve 2. tüpleri (veya 3 ve 4., 5. th) kontör ulaşamadı sinekler ve üst şişe ulaştı sinekler sırasıyla gelmektedir.
- Performans Endeksi (PI) hesaplayın.
- Her flakon sineklerin sayısını.
- PI üst tüp tırmanmak mümkün sinekler yüzdesidir.
- PI araçları normal dağılıma 1 izleyin ve veri ortalama (SEM) ile ortalama artı veya eksi standart hata sütun grafikleri olarak temsil edilmektedir.
NOT: Alternatif olarak, PI eski sinekler için alt flakon (üst kısmını ulaşmak mümkün sinekler yüzdesi olarak hesaplanır, 5 sn 12 gün eski enfekte enfekte olan ve olmayan arasındaki yeteneği tırmanma fark ölçmek için yeterli zaman Hareketsiz bir resimden miktarı Kanton-S: sonuçlarını görmek). Diğerleri de yeteneği 19-22 tırmanma ölçmek için uygun irkilme-kaynaklı olumsuz geotaxis performans farklı tedbirler, kullandık.
- Aktarım, yeni, boş bir şişe içine gıda içeren flakon kendi uçar. Aspire boş şişeye uçar ve sosyal alan odasına aktarabilirsiniz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Sosyal uzay odasının Drosophila melanogaster sosyal davranışlarını ölçmek için bir araç olarak kullanılabilir. Akrilik aralama ve cam levhalar birçok potansiyel karıştırıcı ipuçlarının olmaksızın stabil grupları oluşturabilirler uçan olan bir iki boyutlu alanı sağlayan bir iç üçgen arena oluşturmak üzere birlikte kırpılır. Sinekler dikey arenada transfer edildiğinde, onlar aşağı vurdu edilerek ürküyor ve onlar bir kaçış davranışı ile cevap vardır: Negatif geotaxis. Onlar sıkı bir gruba zorla dik üçgenin tepe, tırmanmaya ve sonra daha fazla hareket birbirlerini formu ve arena keşfetmek için zaman sağlanır. 20 dakika 40 sonra, hareket durdurmak ve istikrarlı bir grup oluşturulmuştur. Her sinek ve en yakın komşusu arasındaki mesafe tercih ettikleri sosyal alanı ölçümü sağlamak için, bir resimden ölçülebilir. Sinekler yakın olduklarını komşularına daha sosyal olarak kabul edilir.
Sinekyoğunluk altında kapasite noktasına kadar odasında sosyal alanda bir rol oynamıyor. Daha büyük dikey olarak yönlendirilmiş odası içinde 20 ila 70 sinekler büyük bir grup, toplumsal boşluk grubu yoğunluğu (Şekil 2A, B) bağımsızdır. Sosyal uzay odasında sadece 10 ya da 15 sinekler, sosyal alanda bir artışa yol açan, büyük olasılıkla istikrarlı bir toplumsal grup oluşturmak için yeterli bireyler yoktur (Şekil 2A, B). Ancak, sinekler çok sayıda test her zaman uygun değildir - mutant bireylerin sayısı sınırlı olduğu belirli durumlarda, araştırmacılar, sosyal uzay odasının standart ölçü için yeterince büyük sineklerin gruplarını toplamak mümkün olmayabilir. Sinek küçük gruplar kullanılarak sosyal alanı miktarının kolaylaştırmak için, araştırmacılar iki boyutlu arena alanı daha küçük olacak şekilde sosyal alan odasını işleyebilirsiniz ama sinek başına alan sabit kalır. Sosyal iki tür D Şekil 1C vardır GösterildiUzay odaları daha küçük gruplar için modifiye edilen, fakat daha büyük bir oda ile aynı yoğunluğunu korumak. Bu yolla, uçucu yoğunluğunu tutmak ve hazne boyutu benzeri sosyal aralığı (Şekil 2C) elde edilmesine olanak sağlamaktadır azaltır.
Aynı genel eğilimler yatay konumda (Şekil 2B) yerleştirilen sosyal alan odaları için geçerli. Ancak, sinekler gibi yatay bir ortamda birbirinden daha olma eğilimi gözlemleyebilirsiniz ve kolayca 1 yetinmeyin. Sadece 15 ve 20 sinekler gruplar 40 sinekler (F ŞEKIL 2B) ile gruplarına göre daha fazla sosyal alan gösterirler.
Bu aşırı kalabalık sinekler büyük gruplar halinde görülen en yakın komşuya az mesafeler sorumlu değildir onaylamak için, her mesafeden diğer tüm sinekler sinek 9 gibi ölçüldü. En yakın komşusu mesafeye göre tüm sinekler mesafe, miktarının bir grup Behavi değerlendirirken veriyorveya yerine bir grup içindeki bireylerin davranışlarının. Beklendiği gibi, gruptaki sinekler miktarı arttıkça, tüm sineklerin uzaklık, tek tek sineklerin grubun kendisi bir yansıması, daha büyük olmuştur. Bu eğilim hem dikey hem de yatay konumlandırılmış sosyal alan odaları (Şekil 2E, F) gözlendi. Bu nedenle, daha büyük gruplar sinekler nedeniyle uzay kısıtlamaları kendi komşusuna yakın bir mesafe tutmak zorunda değil. Odasında fazla 15 sinek olduğunda yerine, sineklerin sıkı sosyal gruplar oluştururlar.
Diğer davranış testleri için olduğu gibi, sosyal alan odasını kullanarak bir sınırlama dikey hiçbir geotaxis veya tırmanma bozukluğu olan sinekleri gerektirir. Örneğin, Kanton S Providencia 23 sosyal aralık yönüne bağlı olarak farklı sosyal aralık sonuçları tırmanma kusuru sahip ve sergilemek rettgeri Gram-negatif bakteri ile bir hafta boyunca enfekte uçarodaları. Test dikey yapıldığında, enfekte sineklerin sosyal alan enfekte sinekler odasının (Şekil 3A) üst kısmında istikrarlı bir grup oluşturmak mümkün değildi muhtemelen çünkü, kontrollerin sosyal mekan daha büyüktü. Aynı şartlar altında sinekler sonra yatay yönelimli sosyal alan odalarında test edildiğinde, hareket kabiliyeti yatay konumlandırılmış sosyal alan odaları (Şekil 3B) sosyal alan için bir faktör muhtemelen daha az olduğunu belirten anlamlı bir farklılık yoktu. Enfekte sinekler görsel olarak kontrol grubuna göre tırmanmaya daha az güçlü olmakla birlikte, bu tırmanma deneyi (Şekil 3C) kullanılarak belirlenebilir. 5 saniye sonra kontrol sinek yaklaşık% 44 üst alt flakon yarısı ve enfekte sinekler sadece% 32 kadar tırmandı. Hangi can, bu deneyde tüm sinekler kötü (nadiren üst flakon, alt şişenin sadece üst kısmına ulaşması) tırmanmak fazlalaştıOnlar sinekler 22 yaşlanma nedeniyle tırmanma bir kusur sergilemek başladığınızda post-eclosion, 12 gün olmasıyla açıklanabilir.
Daha önce 1 göstermiştir Ancak, hiçbir tırmanma kusur var suşları için, odaları her iki yönelimleri, aynı sonuçlara yol açtı. Bu deneyde, sosyal uzayda aynı artış dikey üçgen veya yatay dairesel odalarına (- 1'de yayınlanan verilerin kutuya reanalysis ve kıl Şekil 3D, E) Cs 10 Kanton-S ve 1118 w görüldü. (- Şekil 3F 15 sn seçimi) o iki bölme yönde suşları arasındaki sosyal alanda farkı bir faktör değildi belirten Cs 10 Kanton-S ile 1118 w yeteneği tırmanma hiçbir fark yoktu. CS 3.3 ve% 14 ± ±% 17 5 sn seçim verilirse1118 Cs 10 üst flakon ulaştı w 2,5 (istatistiksel olarak farklı değildi, veriler gösterilmemiştir).
Sosyal alan odasını kullanan araştırmacılar ayrıca günün aynı zamanda kendi deneylerini tekrar sağlamalıdır. Cs hem Kanton-S ve 1118 w 10 erkek, sosyal etkileşimler etkilenir günün saatini uçar. (ZT11 ZT12 - sadece daha önce ışıklar kapalı) akşam test sinekler (- - Işık başlangıcından sonra saat zaman ZT7 için ZT4 Zeitgeber süresi) gündüz saatlerinde karşılaştırıldığında her iki genotipleri için çok daha büyük bir sosyal alan göstermiştir, onların göreceli uzay farkı korunmuş olmasına rağmen - yani 1118 w Cs 10 sinekler hala Kanton-S akşamı (Şekil 4A) uçar daha az sosyal bulunmaktadır. İlginçtir, sadece sosyal Kanton-S erkeklerin yer değil, tAkşam (Şekil 4B) kadın sinekler için sosyal alan daha geniş varyasyon doğru bir eğilim vardı, ancak dişilerin şapka, akşam artar. Biz daha önce bağımsız olarak aynı gözlemler 24 yaptık.
Daha önce Bisfenol A'nın (BPA) 2 etkisini incelemek için bir Oregon-R satırını kullanarak bildirdiği gibi, sosyal alan odasının da Drosophila genetik arka plan duyarlıdır. Burada, Elwood, kısa bir süre önce yakalanmış vahşi tip hattı, Kanton-S ve Semerkant değil Oregon (Şekil 5) ile karşılaştırıldığında sosyal alan artmış olduğunu göstermektedir. Semerkand ve Oregon sosyal alanlarda önemli ölçüde birbirinden farklı ama Kanton-S (Şekil 5) sosyal alanı daha hem büyük değildi. Bu veriler, belirli bir ortamda, farklı akraba ve vahşi tip suşu davranışına bir genetik öğeyi gösteren farklı bir sosyal alan olduğunu göstermektedir. Ayrıca, kendiliğinden belirtirBu testin nsitivity böylece sinekler önce deneme için uygun genetik kökenden içine çaprazlanırlar gerektirir. Bu farklılıkları sağlamak için yardımcı olur veya tersine sosyal alanda görülen benzerlikler, faktör test edilen kaynaklanmaktadır.
Şekil 1. Sosyal uzay odası takımlar ve düzenleme. (A) çeşitli boyutlarda Sosyal alanı odaları 16,5 cm yüksekliğinde (sağ üçgen şeklinde ve akrilik aralama (17,6 0,3 cm cm 17,6 cm), aynı cam levhaların kullanılarak inşa edilebilir, 8,9 cm bir baz ve 0.3 cm'lik bir kalınlığı - gelen küçük harf a) ve dikdörtgenler (0.3 cm 1.5 cm 9 cm ile gösterilen -., küçük 'b' ile gösterilen) (B) en büyük sosyal alan haznesi 1 de tarif edildiği gibi uygun 30-40 sinekler. İç dim vardır86,45 cm 2 lik bir alanı veren ve 40 sinekler için sinek başına 2.16 cm 2 'lik bir alana giden 14.5 cm 16.5 cm 16.5 cm ensions. (C) 20 sinekler için bir odacık boyutu en iyi. Bu 43,25 cm 2 lik bir alanı veren ve anında başına 2.16 cm 2 'lik bir alana giden 5.96 cm 14,5 cm 16,5 cm iç boyutları vardır. (D) küçük odası, 15 sinekler için en uygun. Bu 32,45 cm 2 lik bir alanı veren ve anında başına 2.16 cm 2 'lik bir alana lider, 8,9 cm 8,9 cm 10,2 cm iç boyutları vardır. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 2. Odası ve grup büyüklüğü değil, yoğunluk Oryantasyon, sosyal alan etkilemektedir. Veri bir kutu içinde temsil edilirve 1. kartil (25 inci yüzde) temsil eden kutu ve 3. çeyrekte (75 inci yüzde), medyan temsil kutusuna hattı ve Tukey bıyıklı odasında en yakın komşusu olan uzaklık, bir bıyık arsa . (AB) Örnek veriler, aynı büyüklükteki bir bölme içinde sinekler sayısı artan stabil sosyal alan ölçümlerine neden olduğunu göstermektedir. 10 70 Kanton-S erkek sineklerin Grupları büyük dikey sosyal alan odasına koymak ve 30 dakika boyunca yerleşmek için izin verildi; Her sineğin yakın komşusu olan mesafe kaydedildi. En az 15 sinekler sahip gruplar, büyük odası içinde fazla 20 sinekler sahip gruplar önemli ölçüde daha fazla, sosyal alanı vardı. (A) Gruplar, 10, n = 9, 20, n = 9, 30, n = 8, 40, n = 8, Kruskal -Wallis Test p <0.0001, Dunn çoklu karşılaştırma testi: Her harf grupları istatistiksel olarak anlamlı fark bir # b p <0.0001 göstermektedir (B) <./ 15 n = 6, 40, n = 8, 50 n = 5, 60, n = 6, 70 n = 5, Kruskal-Wallis testi p <0.0001, bir # b p <0.001 strong> Gruplar. (C) Ne zaman odasının büyüklüğü uçucu yoğunluğu (büyük odası içinde, sırasıyla orta küçük 15'teki, 20 ya da 40, sinek başına 2,16 cm2 'lik bir yoğunlukta her zaman muhafaza edecek şekilde ayarlanır dikey olarak test edildiğinde, herhangi bir anlamlı farklılık görülmektedir. (D ) Ancak bu sosyal alan odaları yatay konulduğunda 15 veya 20 sinekler 40 sinekler (15 n kategorileri = 3, n = 20 4 40 n = 4, Kruskal ile gruplarına göre en yakın komşuya daha büyük bir mesafe vardı grupları -Wallis Test p <0.0001, Dunn çoklu karşılaştırma # b p <0.01) test edin. (E-F) tüm sinekler mesafesi 15 gruplar, 20 ölçüldü ve 40 erkek Kanton-S sinekler dikey hem yerleştirilir ve yatay odaları odaklı. odasındaki sinekler büyük miktarda daha fazla mesafe tümSinekler ((E): grupları 15, n = 6, 20, n = 6, 40, n = 3, Kruskal-Wallis testi p <0,0001, Dunn çoklu karşılaştırma # b p <0.01 test edilmesi; (F): 15 N gruplarını = 6, 20 n = 6, 40 n = 3 Kruskal-Wallis testi p <0.0001, Dunn çoklu karşılaştırma # b # C p <0.0001 sınamak). Not: 3 farklı coğrafi bölgeler ve bu nedenle farklı laboratuar ortamlarında elde edilen (A, B ve CF) gösteri verilerini (A) 1. Bölge: UCLA, Los Angeles, CA, (B) 2. Bölge:. York College, NY, NY; (CF) Bölge 3:. Western University, London, ON, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 3. Yönlendirme of sosyal alan odası geotaxis sorunları karıştırıcı kontrol etmek için kullanılabilir (A - C). ya da P. ile enfekte edilmiştir 40 erkek Canton-S sinekler Gruplar yedi gün rettgeri ya da bir kontrol ya da dikey olarak (A) bir alan olmasını odasına konur veya yatay (B) yerleştirilmiş ve 30 dakika süre ile yerleşmesi beklenmiştir gibi ortam ile enjekte edildi. Her sineğin yakın komşusu olan mesafe kaydedildi. Veri 1. kartil (25 inci yüzde) temsil eden kutu ve 3. çeyrekte (75 inci si), kutuda hattı ile, odasında en yakın komşusuna mesafenin bir kutu ve bıyık arsa temsil edilmektedir medyan, ve Tukey bıyık temsil eder. (A) Temsilcisi veri gösterir P. bulaşmış sinekler için sosyal alanda bir artış rettgeri ve dikey olarak konumlandırılmış sosyal alan odasına yerleştirilir,Medya ile enjeksiyon ile karşılaştırıldığında (Wilcoxon-Sıra testi: Her harf grupları istatistiksel olarak anlamlı fark p <0.0001 işaret, n = 6) (B) Temsilcisi veri P. etkilenmez sosyal alanı gösterir. (: p> 0.1, n = 5 Wilcoxon-Rank testi) (C) bir karşı akım cihazı hem enfekte ve medya kontrol sineklerinin tırmanma davranışını değerlendirmek için kullanıldı. sineklerin yatay olarak konumlandırılmış sosyal alan odasına yerleştirilir rettgeri enfeksiyon. İki Welch Düzeltme t-testi kuyruklu; n = 6 5 sn seçimine şişenin üst yarısında sineklerin%: Enfekte sinekler grafik performans endeksi ± SEM ortalama temsil medya kontrolleri (uçar ~ daha kötü 12 gün eski tırmanmaya 60 sinekler ~ bölgesinin her harf grupları istatistiksel olarak anlamlı fark p = 0.08) göstermektedir (D - F). üçgen veya yuvarlak ya Dikey ve yatay konumlandırılmış odaları,) ile Kanton-S (CS sosyal alanı karşılaştırmak için kullanıldıBu 1118 w Cs 10 (W). Veri 1. kartil (25 inci yüzde) temsil eden kutu ve 3. çeyrekte (75 inci si), kutuya hattı ile odasında en yakın komşusuna mesafenin bir kutu ve bıyık arsa temsil ediliyor medyan temsil ve Tukey bıyık. Gerek sosyal alanda odası yönelimleri ve şekiller, 1118 w Cs 10 Kanton-S ((D), dikey üçgenin daha büyük bir toplumsal alan vardı: Kruskal-Wallis testi, her harf istatistiksel farklı gruplar p <0.0001, (E), yatay daire gösterir: Kruskal-Wallis testi, her harf grupları istatistiksel olarak farklıdır gösteriyor p <0.01). (F)) için bir karşı akım cihazı Cs 10 her iki Canton-S ve 1118 w tırmanma davranışını değerlendirmek için kullanıldısuşları (3-5 gün eski uçar, grafik, ortalama performans endeksi ± SEM temsil: Üst flakon sineklerin% 15 sn seçimine). Cs 10 ya Canton-S arasında veya 1118 w yeteneği fark yoktu. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 4. Erkeklerin Sosyal uzay akşamları artar. (A) Temsilcisi verileri "gün erkek arasındaki artan sosyal uzay akşam saatlerinde öğlen saatleri karşılaştırıldığında (önceki kapalı ışıklarına" akşam "ZT 11-12) (uçar gösterir "ZT 4-7). Cs 10 40 Kanton-S sinekler ve 1118 w Gruplarısinekler gündüz saat veya akşam saatlerinde ya süresince bir sosyal alan odasına koymak ve 30 dakika boyunca yerleşmek için izin verildi. Her sineğin yakın komşusu olan mesafe kaydedildi. Her iki genotipleri için, akşamları artan sosyal alan uçar ve suşları arasındaki farklar (n = 6-7, Kruskal-Wallis testi p <0.0001, Dunn çoklu karşılaştırma testi ne olursa olsun günün zamanı tutuldu: her harf grupları istatistiksel olarak anlamlı fark p işaret < Daha büyük iç varyasyon için anlamlı olmayan bir eğilim kadınlarda görülür rağmen 0.01). (B) Kanton-S sinekler seks sadece erkekler tarafından ayrıldı Kruskal (akşam (t p <0.01), sosyal alanda bir artış göstermiştir -Wallis testi, her harf grupları istatistiksel olarak anlamlı fark p <0.0002) göstermektedir. Veri 1. kartil (25 inci yüzde) temsil eden kutu ve 3 ile odasında en yakın komşusuna mesafenin bir kutu ve bıyık arsa temsil edilmektedirrd kartil (75 inci yüzde), medyan temsil kutusuna hattı ve Tukey whiskers. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 5. Sinekler Genetik arka plan 40 Kanton-S, Semerkant, Oregon kategorileri. Sosyal alan etkiler ve Elwood sinekler bir sosyal alan odasına koymak ve 30 dakika boyunca yerleşmek için izin verildi. Her sinek yakın komşusu olan mesafe kaydedildi. Grupların dağılımları farklıdır (Kruskal-Wallis testi, p <0.0001), ortak bir mektup paylaşımı değil grupları önemli ölçüde farklıdır. Veri bir kutu ve bıyık p temsil edilmektedir1. kartil (25 inci yüzde) temsil eden kutu ve 3. çeyrekte (75 inci yüzde), medyan temsil kutusuna hattı ve Tukey bıyıklı odasında en yakın komşusu olan uzaklık, bir sürü (Dunnet adlı çoklu karşılaştırma testi, p <0.05 [d] p <0,001 [a, b, c] öyle ki, iç 1-2 tekrarlı 3 bağımsız tekrarlar, Elwood ve Semerkant'taki n = 3, Oregon ve Canton-S, n = 4 için ). Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu protokol, sosyal alan ölçümü için detaylı bir prosedür tarif edilmiştir. Denemeyi sağlamak için bazı önemli adımlar başarılı şunlardır: 1) temizlik ve 2) sinekler önce en az bir gün toplanır sağlamak, aparatın iç odasının kapalı kendi yağlar ve kokular tutmak, aparat kurarken hep eldiven kullanın Deney soğuk anestezi olası etkilerini azaltmak için, 3) deneyden önce 2 saat sinekleri hasret değil, kendilerini temizlemiş sağlamak için taze gıda içeren yeni şişeleri sağlamak, 4) Bu 2 saat boyunca izin sinekler için iklime alıştırmak onların deneyler yaparken yeni bir ortam, 5) sıcaklık ve nem koşullarını not; 6), deney çalışırken sosyal alan odalarını rahatsız değil emin olun 24-25 ° C ve% 50 nem arasında tutarlı tutmaya çalışın ve 7), tercihen Zeitgeber zaman ZT4 arasında, günün aynı zamanda deneyi gerçekleştirmek ve ZGT7.
Sosyal alan olarak uzun bir araya geldi minimal grup büyüklüğü olarak orada, odasının içinde sinek yoğunluğu sadece bağımlı ve grubun büyüklüğüne bağımlı değildir.Sinekler bakılmaksızın grup üyelerinin miktarı kendi aralarında aynı sosyal mesafeyi koruyacaktır. Bununla birlikte, beklenen odadaki bütün sinekler, uzaklık grup büyüklüğü, hem de hazne oryantasyonu ile etkilenir. Bu (Şekil 3D 3E karşılaştırıldığında) yatay rağmen (sinekler gibi kolayca yetinmeyin) kullanmak için zorlu olmak ve elimizde genotipler arasında azaltılmış ayrılmasına yol açan unutmayın önemlidir, Burg ve ark. 3 başarıyla yatay kullanılır kare odası. Onların deneylerde, en yakın komşusu olan mesafe bizim dikey yönelimli sosyal alan sonuçlarına en benzer oldu. Ancak, onların odasında, sineklerin sosyal grup aralığı bizim dikey odasının yerine bizim yatay odasına en yakın olmanın katkıda bulunmuş olabilir sürekli hava akımı vardı. Dikey odaları kullanarak bir sınırlama Mobili var Drosophila test yeteneğity bozukluklar. Sosyal uzay odasının mobil olmak sinekler gerektirir bu yüzden onlar olmak isteyen kendi komşu nasıl mesafe en seçebilir. Sinekler hareketsiz olan ya da bir şekilde açığı olsaydı, onlar odasında düzgün kararlı gruplar oluşturmak mümkün olmayabilir. Yoksul hareketlilik için potansiyel çare sonra yatay odaları kullanmak veya sinekler resmi çekmeden önce yerleşmek için daha fazla zaman tanımak olacaktır. Araştırmacılar ayrıca dikey sosyal alan odasının uygun olup olmadığını görmek için tırmanma yeteneği ve sineklerin muhtemel geotactic bozuklukları değerlendirmek gerekir. Bunlardan birinde açıkları varsa, yatay yerleştirilmiş odaları bunları önlemek için de kullanılabilir.
Sineğin aktivite veya genel dayanıklılık ve sağlık tırmanma sosyal alanın ölçümünü etkileyecektir eğer notun, biz aktivite veya hareket düzeyleri sosyal alanı ile ilişkili olmadığını göstermektedir. Başka bir çalışmada, lokomosyon azaltan bir tedavi (BPA besleme) de sosyal azalma olduğunu göstermektedirUzay 2.. Ama buruşuk ve mutantlar (bir otizm aday gen neurobeachin Drosophila ortologu) ekran hiperaktivite ve artan sosyal alan 4. Son olarak, beyaz mutant sinekler hareketin herhangi bir artış olmadan, sosyal alanda 1,3 artış görüntülemek veya 18 geotaxis. Kısacası, aktivite seviyesi ve sosyal boşluk çeşitli kombinasyonları iki davranışlar arasında hiçbir korelasyon gösteren, şimdiye kadar gözlenmiştir. Aslında, sosyal alan mutlaka altta yatan farklı nöral devreleri düşündüren, sosyal kaçınma 8,25 olarak ya diğer sosyal davranışlar için ilişkili değildir. Örneğin, Geriye kalan / neurobeachin ekran mutantlar sosyal alan artmış ve sosyal kaçınma 4 azaltılmış; ancak beyaz sosyal alanı artmış, ve çok güçlü bir sosyal kaçınma 4 oldu hem.
Günün saati sosyal alanı etkilediği gibi, erkeklerde en azından o critica olduğunuOnların deneyler yapılmaktadır ve çaba tüm deneyler için bir sabit zaman korumak için yapıldığında araştırmacıların günün saatine vakıf olan l. Hesaba gereken diğer hususlar yaş, cinsiyet ve sinekler çiftleşme durumunu içerir. Biz sosyal mesafe hem erkek ve kadınlarda 1 için hem de evlendirilen bireye kıyasla bakirenin arttığını biliyoruz ve biz şimdi erkeklerin akşam (Şekil 4B) kadınlarda daha az yakın olduğunu göstermektedir. Gün boyunca tek sineklerin aktivite düzeyleri soy spesifik cinsiyet farklılıkları önceden onların kur davranışı 26,27 ile ilgili olabilecek günlük süre ile karşılaştırıldığında sabah ve akşam yüksek lokomotor aktivite erkekler öneren, tarif edilmiştir. Ancak bizim durumumuzda, cinsiyet ayrılır, ancak sinekler gruplandırılmış ve biz onların sosyal alan ölçmek zaman, sineklerin yerleşmiştir. Erkek çiftler halinde sirkadiyen ritim tuttuğunu Fujii ve ark. 27 raporuKadın çiftlerinin ritim tek sinek benzemeye zaman birlikte, net doruklarına olmadan, düzensiz günlük ritmi vardır. Yani, akşamları erkeklerde artan boşluk muhtemelen kur davranışı ya da lokomotor aktivite belirli bir artış artışa bağlı ve bu davranışın cinsel dimorfizm altında yatan sebebi daha da araştırılması gerekmektedir değildir.
Kadın ve erkekler arasındaki sosyal etkileşim farklılıklar görülebilir böylece dikkate alınarak bu ile sinekler her zaman deney için cinsiyete göre ayrılmalıdır. Yaş sineklerin sosyal etkileşimleri nasıl etkilediği Son olarak, şu anda henüz bilmiyoruz. Bu nedenle, sosyal uzay deneyleri 22 bir haftadan daha fazla eski uçar etkilendiği bilinen tırmanma etkinliği dahil olmak üzere çeşitli davranış performansları gibi, yedi gün daha yaşlı sinek ile yapılmaktadır öneririz.
Sosyal alan son bir husus medyan gözlenen değişimler olduğunusosyal mesafe. Sosyal alan ölçümleri (Los Angeles, CA gibi çeşitli yerlerde alınmıştır: Şekil 2A, Yeni-York, NY Şekil 2B, Şekil 3D, Şekil 4, Şekil 5, Londra, ON: Şekil 2C-F, Ithaca, NY: Şekil 3A, B, aynı Kanton-S arka planda tüm). Coğrafi konumları veya laboratuvar ortamlarında arasında sabit değildi Bilinmeyen değişkenler, medyan sosyal mesafeyi etkilemiştir. Olası faktörler farklı yiyecek, yükseklik, kendi içinde, atmosferik basıncı ve atmosferik basınçta 28 oluşan değişiklik anlamına gelir. Medyan yerleri arasında sabit olmasa da, medyan derece sabit ve tekrarlanabilir bir yerde içinde; ve sosyal alan ölçümlerinde görülen eğilimler ve desenleri yerleri arasında aynı kalmıştır. Bu nedenle, sürece araştırmacılar dahili sabit koşulları sağlamak, onlar olacakSosyal alanda farklılıkları tespit etmek için ble.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Stereo Zoom Microscope | Nikon | SMZ-645 | Any other standard scope for fly handling would work |
| Small paint brushes | for pushing flies | ||
| Jazz-mix | Fisher | 33545 | any other standard drosophila food would work |
| Mini-Alarm Timer/Stopwatch | |||
| Sharpie pens | |||
| Adhesive Tape | |||
| Medium size binder clips | Staples | to hold the chambers together: 1-1/4" (32mm) medium clips with 5/8" capacity | |
| small SupportStands | Carolina | 707161 | to hold the chambers in a vertical orientation |
| Buret clamps | Carolina | 707362 | |
| Digital Camera | Nikon | Coolpix S8000 | to take the still pictures |
| small ruler | to be able to scale the picture | ||
| trifold board and white bench cover | to provide a white background, and a homogeneous light. | ||
| pounding pad | any mouse pad works. | ||
| Prism 6 | GraphPad Software Inc. | Prism 6 for Mac OS X | Any statistical analysis software with t-test, one-way and two ANOVA would work |
References
- Simon, A. F., et al. A simple assay to study social behavior in Drosophila.: measurement of social space within a group. Genes Brain Behav. 11, 243-252 (2012).
- Kaur, K., Simon, A. F., Chauhan, V., Chauhan, A. Effect of bisphenol A on the behavior of Drosophila melanogaster. - Potential use of Drosophila as a model in the study of neurodevelopmental disorders. Behavioural Brain Research. , (2015).
- Burg, E. D., Langan, S. T., Nash, H. A. Drosophila social clustering is disrupted by anesthetics and in narrow abdomen ion channel mutants. Genes Brain Behav. 12, 338-347 (2013).
- Wise, A., et al. The autism candidate gene Neurobeachin (Rugose) mutants in Drosophila exhibit neuro-developmental disorders, aberrant synaptic properties, altered locomotion, impaired adult social behavior and activity patterns. J Neurosci. , 1-9 (2015).
- Parrish, J. K., Edelstein-Keshet, L. Complexity, pattern, and evolutionary trade-offs in animal aggregation. Science. 284, 99-101 (1999).
- Sokolowski, M. B. Social interactions in ‘‘simple’’ model systems. Neuron. 65, 780-794 (2010).
- Rittschof, C. C., Robinson, G. E. Genomics: moving behavioural ecology beyond the phenotypic gambit. Animal Behaviour. 92, 263-270 (2014).
- Fernandez, R. W., et al. Straightforward assay for quantification of social avoidance in Drosophila melanogaster. JoVE. (94), e52011 (2014).
- Hahn, N., et al. Monogenic heritable autism gene neuroligin impacts Drosophila. social behaviour. Behav Brain Res. 252, 450-457 (2013).
- Mogilner, A., Edelstein-Keshet, L., Bent, L., Spiros, A. Mutual interactions, potentials, and individual distance in a social aggregation. J Math Biol. 47, 353-389 (2003).
- Liu, L., Davis, R. L., Roman, G. Exploratory activity in Drosophila requires the kurtz nonvisual arrestin. Genetics. 175, 1197-1212 (2007).
- Soibam, B., et al. Open-field arena boundary is a primary object of exploration for Drosophila. Brain Behav. 2, 97-108 (2012).
- Ejima, A., Griffith, L. C. Ch. 30. Drosophila Neurobiology - A laboratory Manual., Ch. , Cold Spring Harbor Press. 475-481 (2010).
- Benzer, S. Behavioral mutants of Drosophila melanogaster. isolated by countercurrent distribution. PNAS. 58, 1112-1119 (1967).
- Connolly, J. B., Tully, T. Drosophila: A practical approach. Roberts, D. B. 1, 2nd, IRL Press. 265-317 (1998).
- Simon, A. F., Shih, C., Mack, A., Benzer, S. Steroid control of longevity in Drosophila melanogaster. Science. 299, 1407-1410 (2003).
- Rasband, W. S. ImageJ. , US National Institutes of Health. Maryland, U.S.A. (1997).
- Simon, A. F., et al. Drosophila, vesicular monoamine transporter mutants can adapt to reduced or eliminated vesicular stores of dopamine and serotonin. Genetics. 181, 525-541 (2009).
- Barone, M. C., Bohmann, D. Assessing neurodegenerative phenotypes in Drosophila .dopaminergic neurons by climbing assays and whole brain immunostaining. JoVE. (74), e50339 (2013).
- Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila. models of neurodegeneration. JoVE. , e2504 (2011).
- Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila. Exp Gerontol. 40, 386-395 (2005).
- Simon, A. F., Liang, D. T., Krantz, D. E. Differential decline in behavioral performance of Drosophila melanogaster. with age. Mech Ageing Dev. 127, 647-650 (2006).
- Khalil, S., Jacobson, E., Chambers, M. C., Lazzaro, B. P. Systemic bacterial infection and immune defense phenotypes in Drosophila melanogaster. JoVE. , (2015).
- Fernandez, R. W., Akinleye, A. A., Nurilov, M., Rouzyi, Z., Simon, A. F. 54th Annual Drosophila Research Conference, Washinton D.C., , (2013).
- Suh, G. S. B., et al. A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila. Nature. 431, 854-859 (2004).
- Helfrich-Förster, C. Differential control of morning and evening components in the activity rhythm of Drosophila melanogaster.--Sex-specific differences suggest a different quality of activity. J. Biol. Rhythms. 15, 135-154 (2000).
- Fujii, S., Krishnan, P., Hardin, P. E., Amrein, H. Nocturnal male sex drive in Drosophila. Curr Biol. 17, 244-251 (2007).
- Pellegrino, A. C., et al. Weather forecasting by insects: modified sexual behaviour in response to atmospheric pressure changes. PLoS One. 8, e75004 (2013).
