Этот протокол описывает использование иссеченных препаратов кишечной ткани или "кишечных мешочков" в качестве модели ex vivo функции кишечного барьера. Эта модель может быть использована для оценки целостности как эпителиального барьера, так и слизистого слоя геля в определенных участках кишечника в животных моделях заболеваний пищеварительной системы.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Экс Vivo Кишечные Sacs для оценки слизистой проницаемости в моделях желудочно-кишечные заболевания
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Эпителиальный барьер является первым врожденным защита желудочно-кишечного тракта и избирательно регулирует транспорт из просвета к нижележащим тканях, ограничивая перенос мелких молекул через эпителий и практически полностью запрещающий эпителиальную макромолекулярную транспорт. Эта селективность определяется слизистой слоя геля, который ограничивает транспорт липофильных молекул и обоих апикальных рецепторов и узких соединительных белковых комплексов эпителия. В пробирке модели культуры клеток эпителия удобны, но в качестве модели, им не хватает сложность взаимодействий между микробиоты, слизистой-гель, эпителий и иммунной системы. С другой стороны, в естественных условиях оценка поглощения или проницаемости кишечника может быть выполнена, но эти анализы измерить общую желудочно-кишечную абсорбцию, без указания площадке специфичности. Экс естественных проницаемости анализов с использованием "кишечные мешочки"; являются быстрый и чувствительный метод измерения либо общую целостности кишечного или сравнительный перевозки конкретных молекулы, с дополнительным преимуществом кишечной специфики сайта. Здесь мы опишем приготовление кишечных мешков для исследований проницаемости и вычисление очевидно проницаемости (P приложение) молекулы через кишечный барьер. Эта техника может быть использована в качестве метода оценки абсорбции лекарственного, или изучить региональную эпителиальный барьер дисфункции у животных моделях желудочно-кишечных заболеваний.
Введение
Кишечного эпителиальный барьер желудочно-кишечного тракта является площадь поверхности слизистой оценивается в 400 м 2 в взрослого человека. Следовательно, она постоянно подвергается вызов от микробов, попадает препаратов, питательных веществ и бактериальных токсинов. Хост должен не только различать приемлемые синантропных бактерий и потенциально патогенных микроорганизмов, но должна предотвратить эти виды и их секретируемые молекулы от пересечения эпителиальный барьер, в то же время позволяя поглощение питательных веществ. Таким образом, роль кишечном эпителии будет действовать в качестве селективного барьера к просветными Содержание 1. Это дос....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все животное работа в этом протоколе производится при строгом соблюдении университета комитета Ньюкасл животных этике утверждены процедуры.
1. Подготовка инструментов, питательных сред и блюда
- Предварительно теплой СМИ 199 (TC199) или Игла в модификации Дульбекко (DMEM) СМИ до 37 ° С. Предварительно кислородсодержащих среда барботированием с 95% O 2/5% CO 2. Убедитесь, что среда имеет конечный рН 7,3.
- Подготовьте шва путем разрезания два 5 секций см для каждого мешка. Петля швы в незамкнутой узел.
2. Вскрытие и подготовка желудочно-кишечного тракта
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Этот протокол может быть использован для изучения региональных изменений в барьерной функции кишечника на животных моделях желудочно-кишечных заболеваний. Измеряя поток от парацеллюлярной зонда по поверхности слизистой на разной областях желудочно-кишечного тракта 7, целостность эпителиальных плотных контактов может быть оценена. Кроме того, путем изменения характера парацеллюлярной зонда по размеру (Рисунок 2) или гидрофобность (рисунок 3), с.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Здесь мы подробно выделение и подготовку кишечника мешочков для оценки слизистой барьерную функцию Экс Vivo. Кишечные препараты SAC уже в основном были использованы в фармацевтических исследованиях, изучая поглощение кандидатов наркотиков через кишечник. Тем не менее, этот анализ в равной степени хорошо подходит для изучения кишечных заболеваний. Кишечная проницаемость может существенно варьироваться в зависимости от региона и сайт-специфической оценки проницаемости позволяет лучше понять регионального значения.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа была профинансирована грантом Национального проекта по здравоохранению и медицинским исследованиям APP1021582 и грантом Института медицинских исследований Хантера, спонсируемым Sparke Helmore/NBN Triathlon and the Estate of the Estate of the Late Leslie Kenneth McFarlane.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Dekantel Нерассасывающийся шелковый шовный материал | Braintree Scientific | SUT-S 116 | |
| Media 199 (TC199) | Life Technologies | 11043-023 | Не содержит фенола, так как он препятствует флуоресценции |
| Модифицированная среда Dulbecco's Eagle Medium (DMEM) | Life Technologies | 21063-045 | Не содержит фенолового красителя, так как он влияет на флуоресценцию |
| N-ацетилцистеин | Sigma Aldrich | Использование при 10 мМ в среде | |
| Сосудистый катетер мелких животных: Physiocath | Data Sciences International | 277-1-002 | |
| FITC-Dextran 4 400 МВт | Sigma Aldrich | FD-4 | |
| FITC-Dextran 20 000 МВт | Sigma Aldrich | FD-20 | |
| FITC-Dextran 70 000 МВт | Sigma Aldrich | FD-70 |
Ссылки
- Goggins, B. J., Chaney, C., Radford-Smith, G. L., Horvat, J. C., Keely, S. Hypoxia and Integrin-Mediated Epithelial Restitution during Mucosal Inflammation. Frontiers in immunology. 4, 272(2013).
- Otte, J. M., Kiehne, K., Herzig, K. H. Antimicrobia....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
