Abstract
Insektet luktsystemet spiller en viktig rolle i å detektere semiochemicals i miljøet. Spesielt antennal sensilla som huse en eller flere nerveceller inne, anses for å gjøre store bidrag i å svare på de kjemiske stimuli. Ved direkte opptak aksjonspotensial i lukte sensillum etter eksponering for stimuli, gir enkelt sensillum opptak (SSR) teknikken en kraftig tilnærming for å undersøke nevrale responser av insekter til kjemiske stimuli. For sengen bug, som er en beryktet menneskelig parasitt, har flere typer lukte sensillum vært preget. I denne studien viste vi nevrale responser av bed bug lukte sensilla til to kjemiske stimuli og doseavhengig respons på en av dem ved hjelp av SSR-metoden. Denne tilnærmingen gjør forskere til å gjennomføre tidlig screening for enkelte kjemiske stimuli på sengen bug lukte sensilla, som ville gi verdifull informasjon for utvikling av nye bed bug lokke eller insektmidler og fordeler sengen bug kontroll innsats.
Introduction
Den felles seng bug Cimex lectularius L (Hemiptera: Cimicidae), som en midlertidig Antiparasittiske, er en forpliktet blodsugende insekt, noe som betyr at deres overlevelse, utvikling og reproduksjon krever blod kilder fra vertene, inkludert både mennesker og dyr 1,2. Selv om virus overføring har sjelden blitt rapportert som følge av C. lectularius, den bitende plage generert av et angrep på alvor påvirker verter både fysisk og psykisk tre. Innføring og utbredt bruk av kjemiske insektmidler, særlig DDT, reduserte risikoen for infeksjoner og ved utgangen av 1950 angrep var på et så lavt nivå at de ikke lenger var en betydelig offentlig interesse. Imidlertid har en rekke mulige faktorer ført til oppblomstring i seng bug bestander over hele verden, som for eksempel redusert bruk av sprøytemidler, en nedgang på offentlig bevissthet, økt reiseaktivitet, og utvikling av resistens mot insektmidler 4-9. </ p>
Kjemiske signaler i miljøet blir oppdaget og anerkjent av insekter gjennom lukte organer som antenner og kjeve palps. Lukte sensilla på insekt antenner spille en avgjørende rolle i å oppdage disse kjemiske signaler. De kjemiske molekyler angi antennal skjellaget gjennom porene på hårstråene overflaten. Odoranten bindende proteiner i antennal lymfe binder seg til disse kjemiske molekyler og transportere dem på odorantreseptorer 10. De odorant-reseptorer og deres ko-reseptor fra det ikke-selektive kation ionekanal på nevrale membranen, som vil bli depolarisert når disse kjemiske molekyler som gjenkjennes av de odorantreseptorer 11.
Enkelt sensillum opptak (SSR) ble utviklet for å detektere den ekstracellulære endringen i aksjonspotensialet forårsaket av anvendelse av enten kjemiske eller ikke-kjemiske stimuli. Ved å sette inn et opptak elektroden i sensillum lymfe og en referanseelektrodeinn i en annen del av insekt-legemet (vanligvis enten sammensatte øyne eller magen), kan avfyringshastigheten av neuronene som respons på stimuli tas opp 12. Endringer i antall pigger representerer følsomheten av insekt til spesifikke stimuli. Kjemiske stimuli av forskjellige identiteter og konsentrasjon vil utløse ulike nevrale responser, med forskjellige fyringshastigheter og tidsmessige strukturer, og kan dermed brukes til å undersøke kodingsprosessen av insekt mot visse kjemikalier.
For den vanlige sengen bug, både seksuelle formene har samme mønster av lukte sensilla på antennene: Ni rillet pinne C sensilla, 29 hår-lignende E (E1 og E2) sensilla, og ett par hver av Dα, Dβ toksiske, idet LD glatt peg sensilla 13,14. Som flere nevroner har blitt identifisert i hver type sensillum, er det ikke lett å skille de aksjonspotensialer fra ulike nerveceller som befinner seg i samme sensillum, så for dette eksperimentet den total antall aksjonspotensialer ble talt off-line for en 500 msek periode før og etter stimulering. Antallet aksjonspotensialer etter stimulering ble deretter trukket fra antall aksjonspotensialer før stimulering og multiplisert med to for å kvantifisere endringer i skuddtakt i hvert enkelt sensillum i pigger per sekund 15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Utarbeidelse av instrumenter, stimuli Solutions og veggedyr
- Tilbered en 50% KNO 2 løsning (w / v) i en 20 ml flaske.
- Skjerpe to wolfram mikroelektroder i KNO to oppløsning ved 5 V ved gjentatte ganger å dyppe wolfram elektroder i og ut av løsningen.
- Grovt skjerpe wolfram wire ved å dyppe ca. 10 mm av wolfram ledningen i og ut av KNO to oppløsningen ved en hastighet på 2 dips / sek, i ca. 5 minutter, noe som i stor grad kan forbruke den fremre ende av wolframtråd.
- Delikat skjerpe elektroden ved å dyppe omtrent 1 mm i trådspissen i og ut av løsningen med en hastighet på 2 dips / sek for i det minste ett minutt, slik som å lage en god og skarp spiss av elektroden. Sjekk diameteren elektrodespissen under mikroskopet ofte til den når 0,2-0,5 mikrometer, som bør være greit nok til å punktere cuticle av sengen bug lukte sensillum.
Merk: Mens manuelt skarpfors- elektroden, er dyppehastigheten for wolfram ledningen inn i den KNO to løsningen ikke er konstant hele tiden. Med mer praksis, er det mye lettere å holde en relativt konstant hastighet i skarphet elektroden. Oppskarping tid er også usikkert avhengig av hvor fint elektroden skal være. Her er tilstrekkelig nok til å punktere gjennom olfactory sensillum en elektrodespissen med diameteren ~ 0,2 um.
- Fortynn hver av de kjemiske stimuli i dimetylsulfoksid (DMSO) fra den rene forbindelsen til en initiell konsentrasjon på 01:10 volum / volum som en stamoppløsning. Lage en serie av fortynninger dekadisk avhengig av hvor mange doser som kreves i forsøket, igjen med DMSO, fra hver av stamløsninger for hvert kjemikalie. Her bruker 10% (+) - β-pinen og eucalyptol.
- Plasser sultne eller sju dager etter fôring voksen veggedyr (enten mann eller kvinne) fra Ft. Dix koloni (en gave fra Dr. Haynes i University of Kentucky) som skal brukes i than eksperimentere i en petriskål.
Merk: Det er ingen eksakte tall for veggedyr plassert i petriskål. Det kan være noen få eller mange.
2. Bed Bug Antenner Forberedelse
- Bedøver veggedyr på is (2-3 min).
- Fikse både antenner og insekt kropp på et objektglass med dobbeltsidig tape og ta bena med fine saks.
- Bruk en liten nål til å forsiktig berøre antenner, slik som å henge dem på tape jevnt og trutt.
- Hviler dekk mot en liten ball (~ 1 cm diameter) av dental voks for å lette manipulering og justere den til en passende vinkel (~ 90 °) for opptak elektrode (figur 1).
- Når det er sikret, plasser seng bug under et stereo mikroskop, slå på kaldt lyskilde og justere intensiteten av belysning til antennen er tydelig presentert, og fokusere mikroskopet på andre flagellum av sengen bug antenne ved høy forstørrelse (720x) .
Notat: Intensiteten av belysning brukes i forsøket ikke kvantifiseres, som egentlig avhengig av hvor eksperimentator øyne føler intensiteten av belysning.
3. Enkelt Sensillum Recording
- Koble forforsterker (10X) med signalinnsamling kontrolleren, som er forbundet med datamaskinen for signalopptak og visualisering. Slå på datamaskinen og starte programvaren, for eksempel, AutoSpike32 og klikk på "Record" modus fra menylinjen. Deretter velger du "bølge", slik som å starte innspillingen bølgesignalene.
Merk: En flat linje som går fra venstre til høyre for skjermen gjentatte ganger skal nå være synlig. Her, varer innspillingsvinduet 40 sek. Max bølge opptak er 10 sek. Valgt samplingsfrekvens er 96000 og digital sampling rate er 240. Det er 0% offset og ingen filtrering, ingen utbedring for opptaks signaler. Alle disse parameterinnstillingene i programvaren kan endres etter behov. <li> Slå på høyttaleren koblet til forforsterker, som brukes til å presentere den toning modus for neuronal svar fra antennal sensillum. - Sett referanseelektrode inn i magen av den stabiliserte seng bug.
Merk: Referanse elektrode ble holdt ved et metallstativ magnetisk festet til luft-tabellen. - Etter at referanseelektroden er koblet til seng feilen mage, beveger registreringselektrode, som er koplet til forforsterkeren og manipulert av en mikromanipulator, mot den bakre enden av sengen bug antennen.
- Når opptaks elektroden er i kontakt med den høyre enden av antennen, slå på mikroskopet og lokalisere elektroden ved lav forstørrelse.
- Juster opptakselektrode, mens man gradvis økte forstørrelsen til både elektroden og antennal sensillum er i samme plan og er godt synlige under mikroskopet.
Merk: På denne tiden er vanlig mikroskoply på høyeste forstørrelse. - Sett opptaket elektroden i skaftet av sensillum ved hjelp av mikromanipulator og gå litt dypere dersom bakgrunnsstøyen er høy i forhold til aksjonspotensialet.
- Når klare aksjonspotensialer er observert fra registrert sensillum, fylle en mikropipette med 10% (+) - β-pinen. Bruk mikropipette for å avsette 10 ul alikvot av 10% (+) - β-pinen på et filterpapir strimmel (~ 3 x 15 mm) som er plassert inne i et glass Pasteur pipette.
- Koble lastet pipette til utløpet av pulsen strømningsrøret av stimulus kontrolleren og plassere spissen av pipetten inn i det lille hull i røret rettet mot antennen.
- Når alle disse forbindelser har stabilisert seg, trykke ned fotbryteren av stimulus styreenheten for å gi en 0,5 sek drag av stimulus (0,5 l / min) inn i den kontinuerlige fuktet luftstrøm. Innspillingen av aksjonspotensialer vil bli igangsatt samtidig når footswitch er trykket inn. Opptaksprosessen vil være vare i 10 sek starter 1 sek før stimulering.
- Tell aksjonspotensialer off-line for to 500 ms perioder, en før og en etter stimulering. Trekk fra en hvilken som helst endring i frekvensen pigg i løpet av 500 millisekunder etter stimulering fra det spontane aktivitet registrert i løpet av de foregående 500 msek og konvertere tellinger i den konvensjonelle omfanget av pigger / s ved å multiplisere dem med to.
4. Stimulus Replacement i SSR
- Når fotbryteren har blitt utløst, leverer 10% (+) - β-pinen i pipetten på sengen bug antenner og registrere responsen til denne spesifikke odorant i 10 sekunder, hvoretter pipetten er fjernet.
- Etikett en ny pipette med 0,001% eukalyptol som skal testes. Plasser et lite stykke filterpapir hvorpå 10 ul av stimulus er blitt påført, i det ny pipette.
- Vent til 2-5 minutter før stimulus er helt vaporized i glasset pipette. Fest pipette på utløpet av pulsen strømningsrøret.
- Sett pipettespissen inn i det lille hullet på røret rettet mot antennen. Trykk ned fotbryteren og starte 10 sek opptaket.
- Koble pipette og forberede en ny pipette med 0,01% eucalyptol.
- Teste alle de andre doser eucalyptol (fra 0,001% til 10%) på antennal sensilla å observere doseavhengig respons. Test fra den mest fortynnede til den minst fortynnede doser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Enkelt sensillum opptak er en kraftig undersøkende teknikk som brukes i studier av insekt kjemisk økologi og nevrale fysiologi. Gransker nevrale responser av insekter til ulike flyktige forbindelser, særlig de som antas å være økologisk relatert til overlevelse og utvikling av insekter, ikke bare gir oss uvurderlig innsikt i insekt luktesans prosessen, men også åpner opp lovende nye veier som potensielt kan føre til utviklingen av nye og nyttige reagenser for skadedyrbekjempelse.
Den felles seng bug, som en notorisk urban pest, har sikkert tiltrukket seg oppmerksomheten til mange forskere. Blant de ulike studieområdene knyttet til veggedyr, er deres luktesans mekanisme av den største betydning for den kjemiske økologi av veggedyr. Tidligere studier har beskrevet eksplisitt mengde og fordeling av ulike typer olfactory sensillum på sengenbug antenner. Som vist i figur 2A, seng bug antenner har fire segmenter (SC, PE, F1 og F2). Flertallet av lukte sensilla er presentert på den bakre enden av andre flagellen (F2), men fordelingen er tydelig forskjellig for hver type: D sensilla, nemlig Dα, Dβ og Dγ, er bare plassert langs innsiden av antenner (figur 2C), mens C og E (E1 og E2) sensilla finnes på begge sider av antennene (figur 2B). Derfor, for å sikre at vi ta opp det nevrale respons av D sensilla, er vesentlig forsiktig plassering av antennen.
Siden begge seksuelle former av sengen bug deler samme mønster av sensilla typer og den indre siden av deres antenner inneholder alle typer sensilla, rettet mot dette området gjør det mye enklere å ta opp de kjemiske reaksjoner i alle de forskjellige typer av sensilla separat på antennene (figur 3A). I enkelt sensillum opptak, sensilla forskjellig lukte utvise nevrale signaler med tydelig ulike handlings potensielle typer og amplituder (Figur 3B). For eksempel er E sensilla kjent for å ha en eller to nerveceller inne, mens D-type sensilla huset flere nevroner enn enten E eller C sensilla, produsere mer kompliserte aksjonspotensialer enn de andre som resultat. Amplitudene av de nevrale responser fra C sensilla er mye mindre enn de av de andre sensillum typer.
Når elektrode tilkoblingene er satt opp, kan de nevrale svar fra hver type sensillum til hver stimulus registreres basert på deres identitet og intensitet. For noen stimuli som veggedyr er ekstremt følsom, kan det nevrale responsen være veldig sterke og vare i flere sekunder utover oppsigelse av stimulering. For eksempel, som respons på 10% (+) - β-pinen, veggedyr visteen sterk reaksjon med en stor skuddtakt (≥200 pigger / sek) og super-vedvarende temporale dynamikk i forhold til kontroll med oppløsningsmiddel alene som stimulans (figur 4A og B). Forskjellige stimuli kan utløser helt andre nevrale responser fra samme sensillum og forskjellige konsentrasjoner av den samme stimuli forårsaker sannsynligvis ganske andre avfyrings frekvenser. Som vist i figur 5, å øke konsentrasjonen av eukalyptol hevet avfyrings frekvenser fra 30 pigger / sek på 0,001% til 240 pigger / sekund ved 10% i en dose-avhengig måte.
Figur 1. En skjematisk diagram som viser fiksering prosedyre for veggedyr. Er sengen bug stabilisert på dekkglass med antenner festet på tape. Den monterte prøve blir deretter plassert på en magnetisk scene. Orienteringen og høyden av prøven cen justeres til en passende vinkel mellom sengen bug antenner og innspillingen elektroden. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Fordeling av lukte sensilla på sengen bug antenner. (A) En Scanning elektrode mikroskop (SEM) bilde av en seng bug antenne. Antennen har fire segmenter, er Sculpus (SC), Pedecel (PE), den første flagell (F1), og den andre flagellen (F2). Mesteparten av lukte sensilla ligger på F2, selv om noen få lukt sensilla har også blitt funnet på F1, som er tenkt å være relatert til deres funksjon av aggregering feromon deteksjon for sengen bug 16. (B) Et SEM-bilde av den ytre siden av F2, som huser C og E olfactory sensilla. (C) En SEM bilde av innsiden av F2, som ble funnet å huse alle de forskjellige typer lukte sensilla: D (Dα, Dβ toksiske, idet LD), C og E. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet .
Figur 3. Typiske nevrale signaler til ulike typer olfactory sensilla på seng bug antenner. (A) med høy oppløsning SEM bilder av hver type lukte sensillum på sengen bug antenner. (B) Typiske nevrale signaler av forskjellig lukte sensilla før eksponering for et stimulus. Dα, Dβ toksiske, idet LD og C sensilla, som huset flere olfactory sensoriske nevroner (OSNs), utstillings mer kompliserte aksjonspotensialer enn E1 og E2 sensilla, som contain bare én eller to OSNs. Amplitudene til aksjonspotensialer fra C sensilla er mye mindre enn de i andre sensillum typer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. Representative neural respons på stimuli som veggedyr er sensitiv for. (A) Signal spor som viser den typiske neural responsen av en olfaktorisk sensillum (Dγ) til løsningsmidlet som blir anvendt som kontroll i den ene sensillum opptaket. Signal spor er satt til å starte 1 sek før den 0,5 sek drag av stimulus. Signal spor fortsette innspillingen i 10 sek etter oppstart av stimulus puff. (B) Signal spore viser ekstremt sterk neural respons av et luktesensillum (Dγ) til en botanisk stimulus, 10% (+) - β-pinen. Etter puff av (+) - β-pinen blir levert til Dγ sensillum, er OSNs plassert inne i denne sensillum sparken med høy frekvens og et langvarig timelig dynamisk. Den hvite linjen over signal spor indikerer en sek intervall før stimulus eksponering, den røde linjen over spor tilsvarer levering av stimulus puff på lukte sensillum, og den svarte linjen øverst på kurven indikerer signal registrert etter opphør av stimulus puff. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5. Representative doseavhengig respons av OSNs til stimuli. Bruke en annen botanisk stimulans, eucalyptol som en EXAmple, den Dγ sensilla viste en doseavhengig respons på forskjellige konsentrasjoner av eucalyptol. Som konsentrasjonene økt fra 0,001% til 10%, avfyrings frekvenser økte fra 30 pigger / sek til 240 pigger / sek. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Single Sensillum Recording teknikken har blitt mye brukt i testing av nevrale responser av insekter som frukt fluer, mygg og veggedyr til ulike kjemiske stimuli i miljøet. Disse kjemiske stimuli blir ofte oppløst og fortynnet i et felles løsningsmiddel for å fremstille forskjellige doser av behandlinger. Imidlertid kan ulike løsemidler produsere ganske forskjellige utgivelses satser for stimuli. Tidligere studier på noen grundig studert insekter som bananflue, Anopheles gambiae, Culex quinquefasciatus og Aedes aegypti har vanligvis anvendes parafinolje som oppløsningsmiddel for å oppløse de stimuli, da disse insekter er forholdsvis ufølsomme for parafinolje 17-20. Har også blitt brukt parafinolje i tidligere enkeltstudier sensillum opptak av veggedyr, av samme grunn 14. Imidlertid kan de mest brukte oppløsningsmiddel ikke være den beste for hver insektarter. I case av veggedyr, både parafinolje og DMSO, som veggedyr også utviser ufølsomhet, har blitt brukt til å oppløse stimuli i ulike studier 14,15, men de samme doser av stimuli fortynnet i DMSO synes å lokke fram mye sterkere nevrale responser på den sensilla av veggedyr. For eksempel, DMSO-oppløste R - (+) - limonen og S - (-) - limonen genererte nevrale responser av ≥70 pigger / sek fra Dγ sensilla på seng bug antenner, mens parafinolje-limonen oppløst utløste nevrale responser av bare ≤25 pigger / sek fra Dγ sensilla. Denne reduksjonen i den nevrale responser er ganske vanlig i stimuli som har blitt fortynnet med parafinolje, sannsynligvis på grunn av den langsommere frigjøringshastigheten av parafinolje sammenlignet med DMSO. Denne langsommere frigivelseshastighet reduserer mengden av stimulus levert på overflaten av den sensillum og kan resultere i en misvisende konklusjon om følsomheten av insekter for visse semiochemicals.
To kritisk steps for gjennomføring av enkelt sensillum opptaket er 2) signal opptak 1) prøveopparbeidelse og. For prøveopparbeidelse, siden veggedyr har veldig sterke ben og aktivt flytte antenner, er det svært viktig å fjerne alle ben og feste antennen fast på dobbeltsidig tape. I signalinnspillingsprosessen, noen ganger, er det umulig i stilling for elektroden til å peke inn i sensillum akselen. Hvis dette er tilfelle, kan elektroden punktere den bakre ende av sensillum, som alltid gir et meget rent og klart signal med svært liten bakgrunnstøy.
Ettersom det er flere nevroner plassert i D og C-type sensilla, er det ofte vanskelig å skille mellom de enkelte nerveceller basert på amplitudene og former av aksjonspotensialer produsert under SSR. Imidlertid er det fremdeles mulig å se forskjeller i insekts respons til forskjellige stimuli basert på den kombinerte avfyringsfrekvens av alle nevroner i samme sensillum. Teoretisk veggedyr er følsomme for visse stimuli med sterk stimulering mens ufølsomme for andre stimuli med svak stimulering på samme dose. Videre studier integrere adferdstester og informasjon fra deres nevrale svar på disse stimuli vil derfor gi meningsfull informasjon om økologisk relaterte semiochemicals for veggedyr.
I denne studien vi også brukt SSR teknikk for å teste nevrale responser av olfaktorisk sensilla til forskjellige doser av stimuli. Vi observerte en doseavhengig mønster i insekts nevrale responser på forskjellige kjemikalier. Men vurderer komplekse miljøet veggedyr leve i, vil den faktiske dosen av flyktige støtt av veggedyr i sine normale omgivelser være svært lav. Som et resultat, semiochemicals som lokke fram sterke nevrale respons ved lave doser ned til 1:10 5 v / v og 01:10 4 v / v er mer sannsynlig å være biologisk meningsfylt for veggedyr enn andre kjemikalier tlue bare fungere ved høye doser. Derfor disse semiochemicals som fungerer ved lave doser trolig spille en viktig rolle i chemoreception av veggedyr, hjelpe dem til å finne en vert eller unngå negative faktorer, og vil dermed gi nyttig veiledning i screening for lovende seng bug lokke eller midler til bruk i både laboratorie- og felttester.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tungsten wire | A-M SYSTEMS | #716500 | Used for preparing the electrode |
| KNO2 | Sigma | #310484 | Used for sharpening the tungsten wire |
| AC Power Supply | BK Precision | 1653A | Providing the voltage in sharpening the tungsten wire |
| Leica Z6 APO Microscope | Leica | 10447424 | Used for observing the sensilla on antennae |
| Simulus controller | Syntech | CS-55 | Used for controlling the stimulus application |
| 4-Channel USB Acquisition Controller | Syntech | IDAC-4 | Real-time on screen display of all signals before and during recording |
| Light Source | SCHOTT | A20500 | Providing light sources for observation |
| Micromanupulator | Leica | 115378 | Used for minor movement of electrode |
| Speaker | Juster | 95a | Connected with Acquisition Controller IDAC-4 and providing sound for the signal |
| Magnetic stand | Narishige | GJ-1 | Used to hold the reference electrode, stablized bed bug and stimulus delivery tube |
| TMC Vibration Isolation Table | TMC | 63-500 | Used for isolating the vibration from the equipments |
| Coverslip | Tedpella | 2225-1 | Used for holding the bed bug |
| Double-sided Tape | 3M | XT6110 | Used for stablizing the bed bug on the coverclip |
| Dental Wax | Dentakit | DK-R012 | Used for supporting the coverclip where bed bug is stablized |
References
- Bartonicka, T., Gaisler, J. Seasonal dynamics in the numbers of parasitic bugs (Heteroptera, Cimicidae): a possible cause of roost switching in bats (Chiroptera, Vespertilionidae). Parasitol Res. 100 (6), 1323-1330 (2007).
- Thomas, I., Kihiczak, G. G., Schwartz, R. A. Bed bug bites: a review. Int J Dermatol. 43 (6), 430-433 (2004).
- Anderson, A. L., Leffler, K. Bed bug infestations in the news: a picture of an emerging public health problem in the United States. J Environ Health. 70 (9), 24-27 (2008).
- Boase, C. Bed bugs (Hemiptera: Cimicidae): an evidence-based analysis of the current situation. Sixth international conference on urban pests. OOK-Press Kft. Robinnson, W., Bajomi, D. Budapest, Hungary, , (2008).
- Doggett, S. L., Geary, M. J., Russell, R. C. The Resurgence of bed bugs in Australia: with notes on their ecology and control. Environ Health. 4 (2), 30-38 (2004).
- Ter Poorten, M. C., Prose, N. S. The return of the common bedbug. Pediatr Dermatol. 22 (3), 183-187 (2005).
- Yoon, K. S., Kwon, D. H., Strycharz, J. P., Craig, S., Lee, S. H., Clark, J. M. Biochemical and molecular analysis of deltamethrin resistance in the common bed bug (Hemiptera: Cimicidae). J Med Entomol. 45 (6), 1092-1101 (2008).
- Wang, L., Xu, Y., Zeng, L. Resurgence of bed bugs (Hemiptera: Cimicidae) in mainland China. Fla Entomol. 96 (1), 131-136 (2013).
- Haynes, K. F., Potter, M. F. Recent progress in bed bug management. Advanced technologies for managing insect pests. Ishaaya, I., Palli, S. R., Horowitz, A. R. , Springer. New York. 269-278 (2013).
- Carey, A. F., Carlson, J. R. Insect olfaction from model systems to disease control. Proc Natl Acad Sci. 108 (32), 12987-12995 (2011).
- Leal, W. S. Odorant reception in insects: roles of receptors, binding proteins, and degrading enzymes. Annu Rev Entomol. 58, 373-391 (2013).
- Den Otter, C. J., Behan, M., Maes, F. W. Single cell response in female Pieris brassicae. (Lepidoptera: Pieridae) to plant volatiles and conspecific egg odours. J Insect Physiol. 26 (7), 465-472 (1980).
- Levinson, H. Z., Levinson, A. R., Muller, B., Steinbrecht, R. A. Structural of sensilla, olfactory perception, and behavior of the bed bug, Cimex lectularius., in response to its alarm pheromone. J Insect Physiol. 20 (7), 1231-1248 (1974).
- Harraca, V., Ignell, R., Löfstedt, C., Ryne, C. Characterization of the antennal olfactory system of the bed bug (Cimex lectularius). Chem Senses. 35 (3), 195-204 (2010).
- Liu, F., Haynes, K. F., Appel, A. G., Liu, N. Antennal olfactory sensilla responses to insect chemical repellents in the common bed bug, Cimex lectularius. J Chem Ecol. 40 (6), 522-533 (2014).
- Olson, J. F., Moon, R. D., Kells, S. A., Mesce, K. A. Morphology, ultrastructure and functional role of antennal sensilla in off-host aggregation by the bed bug, Cimex lectularius. Arthropod Struct Dev. 43 (2), 117-122 (2014).
- Bruyne, M., Foster, K., Carlson, J. R. Odor coding in the Drosophila antenna. Neuron. 30 (2), 537-552 (2001).
- Qiu, Y. T., Loon, J. J. A., Takken, W., Meijerink, J., Smid, H. M. Olfactory coding in antennal neurons of the malaria mosquito, Anopheles gambiae. Chem Senses. 31 (9), 845-863 (2006).
- Ghaninia, M., Ignell, R., Hansson, B. S. Functional classification and central nervous projections of olfactory receptor neurons housed in antennal trichoid sensilla of female yellow fever mosquito, Aedes aegypti. Eur J Neurosci. 26 (6), 1611-1623 (2007).
- Hill, S. R., Hanson, B. S., Ignell, R. Characterization of antennal trichoid sensilla from female southern house mosquito, Culex quinquefasciatus Say. Chem Senses. 34 (3), 231-252 (2009).
