Este protocolo describe un método de preparación sencilla para nanopartículas de oro liposomas fotosensible integrado con los materiales disponibles en el mercado. También muestra cómo medir el proceso de cavitación de las microburbujas de los liposomas sintetizados en el tratamiento de láser pulsado.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Síntesis de nanopartículas de oro liposomas Integrado fotosensible y la medición de su microburbujas cavitación al pulso láser de excitación
En este artículo
Resumen
Resumen
Las nanopartículas fotosensibles (NPs) han recibido considerable atención debido a su potencial para proporcionar control espacial, temporal y de dosis sobre la liberación del fármaco. Sin embargo, la mayoría de las tecnologías pertinentes aún están en proceso de desarrollo y las clínicas no pueden obtenerlas. Aquí, describimos una fabricación fácil de estas NPs foto-sensibles con NPs de oro disponibles comercialmente y liposomas termo-sensibles. La calceína se utiliza como fármaco modelo para evaluar la eficiencia de la encapsulación y el perfil cinético de liberación tras la estimulación de calor/luz. Finalmente, demostramos que esta liberación fotoactivada se debe a la ruptura de la membrana causada por la cavitación de microburbujas, que se puede medir con hidrófono.
Introducción
La posibilidad de desencadenar la liberación del fármaco mediante estímulos externos es una forma atractiva para entregar los medicamentos en las modas espacialidad, temporalidad y dosificación controlada con especificidad maximizada y efectos adversos mínimos. Entre una amplia gama de sistemas exógenos estímulos que responden (la luz, el campo magnético, ultrasonido, radiación de microondas), plataformas de luz provocada son atractivos, debido a su carácter no invasivo, la sencillez y la adaptabilidad en las clínicas. 1 Una amplia investigación en la última década ha proporcionado una variedad de tecnologías de plataforma, como el oro responsables del inf....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
1. Preparación
- Limpias redondo de 100 ml matraces de fondo utilizando agua regia (1 parte de ácido nítrico concentrado (HNO 3) y 3 partes de ácido clorhídrico concentrado (HCl)) y lavar los frascos con agua DI. Autoclave los frascos y se secan en un horno de aire caliente a 100 ° C durante 15 minutos. Envolver y almacenar los frascos estériles hasta su uso.
- Esterilizar el conjunto de mini-extrusora de mano utilizando etanol al 70%.
- Encienda el evaporador rotatorio y ajustar la temperatura del baño de agua caliente y la torre de refrigeración a 37 ° C y 4 ° C, respectivamente.
- Preparar 60 mM de calceína solución madr....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
Los liposomas se prepararon usando una técnica de hidratación de película delgada convencional con DPPC, MPPC y DSPE-PEG2000 en una relación molar de 86: 10: 4 o 7,95: 0,65:. 1,39 mg / ml 12 El tamaño de Au NPs es crítica para determinar la luz para calentar la eficiencia de conversión durante el siguiente experimento de excitación láser. Más pequeño es el tamaño de Au PN, mayor es la eficiencia de transducción. 13 Por lo tanto 5 nm Au PN, las muestras más pequeñas .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
hidratación de película delgada es el método convencional para la preparación de liposomas. disolventes orgánicos (cloroformo en este caso) se utilizó por primera vez para disolver los lípidos y luego se retiraron en un evaporador rotatorio a 37 ° C para generar una fina película lipídica en el matraz. Esta película de lípido se hidrató con la solución acuosa que contiene 60 mM de calceína y 5 nm Au NPs. Durante el proceso de hidratación, la temperatura se mantuvo alrededor de 50 ° C y el matraz se agita constantemente .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
No hay conflicto de intereses se declaran.
Agradecimientos
Este trabajo fue parcialmente apoyado por los Fondos de Investigación Académica de nivel 1 por Singapur Ministerio de Educación (RG 64/12 al CX) y el Instituto NTU-Noroeste de Nanomedicina.
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 1,2-Dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DPPC) | Avanti Polar Lipids (Alabama, EE. UU.) | 850355P | Polvo, almacenar a -20 & grados; C |
| 1-palmitoil-2-hidroxi-sn-glicero-3-fosfocolina (MPPC) | Avanti Polar Lipids (Alabama, EE. UU.) | 855675P | Polvo, almacenar a -20 & grados; C |
| 1,2-distearoyl-sn-glicero-3-fosfoetanol-amina-N-[metoxi(polietilenglicol)-2000] (sal de amonio) (DSPE-PEG2000) | Avanti Polar Lipids (Alabama, EE. UU.) | 880120P | Polvo, almacenar a -20 & grados; |
| C Nanopartículas de Oro | Sigma Aldrich | 752568-100mL | 5 partículas de nm, estabilizadas a 0,1 mM PBS |
| Calcein | Sigma Aldrich | C0875-10g | 60 mM, pH 7,4 (ajustado con NaOH) |
| solución salina tamponada con fosfato (PBS) | Sigma Aldrich | P5493 | 0,1 mM, pH 7,4 |
| Agua bidestilada | Sistema | ||
| Triton X100 | Sigma, Ciencias de la Vida | X-100 | Para interrumpir los liposomas para calcular la encapsulación total |
| Rotavapor | Buchi (Suiza) | R 210 | Utilizado para la preparación de lipososmo |
| Baño calefactor | Buchi (Suiza) | B 491 | Utilizado para la preparación de lipososmo |
| Controlador de vacío | Buchi (Suiza) | V-850 | Utilizado para la preparación de lipososmo |
| Bomba de vacío | Buchi (Suiza) | V-700 | Utilizado para la preparación de lipososmo |
| Baño de recirculación con controlador de temperatura | Polyscience | Utilizado para la preparación de lipososmo | |
| Conjunto de miniextrusora con bloque calefactor | Avanti Polar Lipids (Alabama, EE. UU.) | 610000 | Utilizado para la extrusión de liposomas |
| Jeringas, 1,000 μ l | Avanti Polar Lipids (Alabama, EE. UU.) | 610017 | utilizado para la extrusión de liposomas Membrana de |
| filtro de policarbonato, 200 nm | Whatmann | 800281 | Se utiliza para la extrusión de liposomas |
| Soporte de filtro | Avanti Polar Lipids (Alabama, EE. UU.) | 610014 | Se utiliza para la extrusión de liposomas |
| PD 10 Desalinización de culomas, medio Sephadex G-25 | GE Healthcare, Ciencias de la vida | 17-0851-01 | Se utiliza para purificar los liposomas |
| Centrífuga | Centrífugas de laboratorio Sigma | 3K30 | Se utilizan para concentrar la solución liposomal |
| Rotor | Sigma | 19777-H | Se utiliza para concentrar la solución liposomal |
| Zetasizer | Nano ZS Malvern | Se utiliza para la determinación del tamaño del liposoma y el zetapotencial | |
| Espectrofotómetro UV-Visible | Shimadzu | UV-2450 | Se utiliza para medir la absorbancia de las muestras |
| Espectrofluorómetro fluorescente | Molecular Devices | SpectraMax M5 | Se utiliza para medir la emisión de fluorescencia de las muestras |
| Nd:YAG Laser | NewWave Research | 532 nm; Potencia máxima: 17 Mj; Ancho: 406 NSEC; Se utiliza para la irradiación de muestras | |
| Hidrófono | HNR ONDA | HNR-1000 | 1 mm de diámetro y sensibilidad de 450 nV / Pa, rango de frecuencia de trabajo adecuado: 0.25-10 MHz; Calibración: 50 mV/Bar; Se utiliza para medir las señales acústicas |
| Osciloscopio digital | LECORY - Wave Runner 64Xi-A | Frecuencia: 600 MHz; Frecuencia de muestreo máxima: 10 Gs/seg (a dos canales); Se utiliza para registrar las señales acústicas medidas |
Referencias
- McCoy, C. P., et al. Triggered drug delivery from biomaterials. Expert Opin. Drug Deliv. 7 (5), 605-616 (2010).
- Yavuz, M. S., et al. Gold nanocages covered by smart polymers for controlled release with near-infrared light. Nat. Mater. 8
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
