Engenharia de Tecidos por Intrínseca Vascularização numa<em&gt; In Vivo</em&gt; Câmara Engenharia de Tecidos

Resumo

Esta é uma diretriz para a construção de tecido vascularizado in vivo usando uma alça arteriovenosa microcirúrgica ou uma configuração de pedículo de fluxo dentro de uma câmara de engenharia de tecidos. Os tecidos vascularizados gerados podem ser empregados para regeneração de órgãos e substituição de defeitos teciduais, bem como para testes de drogas e modelagem de doenças.

Resumo

Na cirurgia de reconstrução, há uma necessidade clínica para uma alternativa aos actuais métodos de reconstrução autólogos, que são complexos, dispendiosos e de comércio um defeito para o outro. A engenharia de tecidos mantém a promessa de abordar esta demanda crescente. No entanto, a maioria das estratégias de engenharia de tecidos não conseguem gerar substitutos de tecidos estáveis ​​e funcionais por causa da má vascularização. Este artigo centra-se em um modelo de câmara in vivo engenharia de tecidos da vascularização intrínseca, onde uma artéria e uma veia perfusão ou como um loop arteriovenosa ou uma configuração pedículo flow-through é dirigido dentro de uma câmara oca protegida. Neste sistema baseado na câmara de germinação ocorre a partir angiogénico nos vasos arteriovenosas e este sistema atrai a migração celular endógeno isquémica e inflamatório accionado que preenche o espaço gradualmente câmara com tecido fibro-vascular. células exógena / implantação matriz no momento da construção da câmara aumenta sur celularvência e determina a especificidade dos tecidos de engenharia que se desenvolvem. Os nossos estudos demonstraram que este modelo de câmara pode gerar com êxito diferentes tecidos, tais como gordura, o músculo cardíaco, fígado e outros. No entanto, são necessárias modificações e refinamentos para assegurar a formação de tecido alvo é consistente e reproduzível. Este artigo descreve um protocolo normalizado para a fabricação de dois modelos de câmara engenharia de tecidos vascularizados diferentes in vivo.

Introdução

Fabricação de tecido vascularizado funcional, utilizando uma abordagem de engenharia de tecidos é um paradigma emergente na medicina regenerativa. ^1,2 Muitas abordagens para projetar o tecido novo e saudável para a substituição de tecido lesionado ou órgãos defeituosos têm sido desenvolvidos, ^3-6 experimentalmente em modelos animais pequenos com promissor potencial clínico ^7,8. No entanto, a vascularização continua a ser um dos maiores desafios para a engenharia de tecidos que limitam o seu potencial de crescimento de tecidos tamanho clinicamente relevante. ⁹

As abordagens actuais para vasculari....

Protocolo

Os protocolos aqui descritos foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal de St. Vincent Hospital Melbourne, Austrália, e foram conduzidos em estrita observância às orientações australianos Conselho Nacional de Saúde e Pesquisa Médica.

NOTA: Dois protocolos de câmara são descritos abaixo. Os dois modelos diferentes e os seus modelos específicos de câmara são ilustradas na Figura 1. Câmara (1) é feita de policarbonato (para o modelo de rato câmara anelar arteriovenosa). Ele é cilíndrico com um diâmetro interno de 13 mm e altura de 4 mm. Uma janela em um ponto na parede permite o acesso desimpedido para o pedículo. No segundo modelo (por fluxo através de rato modelo....

Resultados

A criação de câmaras microcirúrgico em engenharia de tecido foi realizado como descrito no protocolo acima. Os tecidos geradas dentro das câmaras podem ser examinados histologicamente como descrito no passo 3. protocolo Vários tipos de tecido foram projetados com sucesso utilizando a câmara de vascularizado in vivo (Figura 2). Estas incluem tecido cardíaco com cardiomiócitos neonatais de rato (Figura 2a), o tecido do músculo esquelético de rato .......

Discussão

Engenharia da microcirculação está sendo investigado, essencialmente através de duas abordagens. A primeira envolve o desenvolvimento de uma rede vascular altamente interligada dentro da construção in vitro de modo a que, quando implantados, os capilares do leito vascular hospedeiro ligar com aqueles do transplantado construir através de um processo chamado inosculation, garantindo assim a entrega de nutrientes, não só para a periferia mas também para o núcleo. ^21,32,33 Isto é chamado de pré-vascular.......

Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo

Nome	Empresa	Número de catálogo	Comentários
1 Lâmina de bisturi 15	Braun	BB515
1 Pinça Adson dentada	Braun	BD527R
1 Porta-agulha	Braun	BM201R
1 Coagulador bipolar	Braun	US335
1 Porta-agulha microcirúrgico B-15-8,3	S & T	00763
1 Pinça microcirúrgica dilatadora D-5a.2	S & T	00125
1 Pinça microcirúrgica de ourives JF-5	S & T	00108
1 Tesoura microcirúrgica - reta SAS-11	S & T	00098
1 Tesoura microcirúrgica - curva SDC-11	S & T	00090
2 Clipes simples B-3	S & T	00400
2 Fios de sutura de náilon 10/0	S & T	03199
1 Fio de sutura de náilon 6/0	Braun	G2095469
2 Fios de sutura de seda 4/0	Braun	C0760145
Xilocaína 1%	Dealmed	150733	10 mg/ml
Heparina sódica	Dealmed	272301	5.000 UI/ml
Ringer lactato	Baxter	JB2323	500 ml
1 Câmara em forma de cúpula para engenharia de tecidos	confeccionada sob medida
1 Câmara de fluxo contínuo	confeccionada sob medida
Lectina I, Griffonia Simplicifolia	Vector Laboratories	B-1105	1,67 μg/ml
Anticorpo contra Troponina T	Abcam	Ab8295	4 μg/ml
Anticorpo específico para humano Ku80	Abcam	Ab80592	0,06 μg/ml
Anticorpo contra Desmina	Dako	M0760	2,55 μg/ml
Corante Cell Tracker CM-DiI	Thermo Fisher Scientific	C-7000	3 mg/106 células
Lethabarb (pentobarbitona sódica)	Virbac Animal Health	LETHA450	325 mg/ml
Almofada térmica flexível	Redzone Heating	RZ/Medium