Isolamento di perivascolare Multipotent precursori delle cellule popolazioni dal cardiache umane Tissue

James E. Baily; William C.W. Chen; Nusrat Khan; Iain R. Murray; Zaniah N. González Galofre; Johnny Huard; Bruno Péault

doi:10.3791/54252

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Articolo metodologico

Isolamento di perivascolare Multipotent precursori delle cellule popolazioni dal cardiache umane Tissue

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DOI:

10.3791/54252

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8 ottobre 2016

James E. Baily¹ , William C.W. Chen²^,³ , Nusrat Khan⁴ , Iain R. Murray⁴ , Zaniah N. González Galofre⁴ , Johnny Huard⁵^,⁶ , Bruno Péault⁴^,⁷

¹Centre for Cardiovascular Science, Queen's Medical Research Institute, University of Edinburgh, ²Department of Bioengineering and Orthopaedic Surgery, University of Pittsburgh, ³Research Laboratory of Electronics and Department of Biological Engineering, Massachusetts Institute of Technology, ⁴MRC Centre for Regenerative Medicine, University of Edinburgh, ⁵Stem Cell Research Center, Department of Orthopaedic Surgery, University of Pittsburgh, ⁶Department of Orthopaedic Surgery, University of Texas Health Science Center at Houston, ⁷Department of Orthopaedic Surgery, UCLA Orthopaedic Hospital, David Geffen School of Medicine, University of California at Los Angeles

In questo articolo

Sommario

tessuto cardiaco umano alberga popolazioni di cellule precursore perivascolari multipotenti che possono essere adatti per la rigenerazione del miocardio. La tecnica qui descritta permette l'isolamento e la purificazione simultanea di due popolazioni di cellule stromali multipotenti associati con i vasi sanguigni nativi, cioè CD146 ⁺ CD34 ^- periciti e CD34 ⁺ CD146 ^- cellule avventiziale, dal miocardio umano.

Abstract

Le cellule staminali/stromali mesenchimali multipotenti (MSC) sono state convenzionalmente isolate, attraverso la loro aderenza plastica, dai digestati del tessuto primario, mentre la loro posizione anatomica del tessuto è rimasta poco chiara. La recente scoperta dell'espressione di marcatori perivascolari e MSC definiti da cellule perivascolari in più tessuti da parte del nostro gruppo e di altri ricercatori ha fornito l'opportunità di isolare e purificare in modo prospettico specifiche sottopopolazioni omogenee di cellule precursori perivascolari multipotenti. Abbiamo precedentemente dimostrato l'uso del cell sorting attivato fluorescente (FACS) per purificare i periciti microvascolari CD146⁺CD34^- e le cellule avventiziali vascolari CD34⁺CD146^- dal muscolo scheletrico umano. Qui descriviamo un metodo per isolare simultaneamente questi due sottogruppi di cellule perivascolari dal miocardio umano mediante FACS, basato sull'espressione di un insieme definito di marcatori di superficie cellulare per selezioni positive e negative. Questo metodo rende quindi disponibili due sottopopolazioni specifiche di cellule precursori cardiache multipotenti simili alle MSC per l'uso nella ricerca di base e/o nelle indagini terapeutiche.

Introduzione

Il cuore è stato a lungo considerato un organo post-mitotico. Tuttavia, studi recenti hanno dimostrato la presenza di fatturato cardiomiociti limitata nel cuore degli uomini adulti ^1. Cellule staminali / progenitrici nativa con cardiomiociti potenziale di differenziazione sono stati individuati all'interno del miocardio in roditori adulti e cuori umani, tra cui Sca-1 ^+, c-kit ^+, Cardiosphere di formazione, e, più recentemente, le cellule precursori perivascolari ^2,3. Queste cellule rappresentano candidati interessanti per le terapie volte a migliorare cardiaco riparazione / rigenerazione attraverso il trapianto di cellu....