הדגם הוקמה של צנתור-transurethral של עכברים מאפשרת לימוד פתולוגיות בשלפוחית השתן, כולל זיהום בדרכי השתן, אך ניתן לבצע רק אצל נקבות. מודל חדש של זכר החדרה-transurethral, המובאים כאן, יאפשר מחקר באזור המסומן חזקה קליניים ואפידמיולוגיים ההבדלים בין המינים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
זיהום בדרכי השתן במודל בעלי חיים קטנים: צנתור-Transurethral של זכר ונקבה עכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
דלקות בדרכי השתן (UTI) הם מאוד נפוצים ברחבי העולם, גביית תחלואה משמעותית והוצאות בריאות הקשורות. מודלים בעלי חיים קטנים, אשר מתאר את הקמת המחלה והתקדמות, היתר דיסקציה של פתוגן-פונדקאי אינטראקציות, מהדור חסינות לזיהום. בעכברים, intravesical החדרה של uropathogenic e. coli, סוכן סיבתי של יותר מ 85% של הקהילה רכשה UTI, recapitulates בשלבים של זיהום נצפתה אצל בני אדם רבים. עד לאחרונה, עם זאת, UTI יכולה רק להיות המודל בבעלי חיים נשית. מגבלה זו יש הפריע חקר הבדלים הקשורים למין UTI, כמו גם אחרים פתולוגיות בשלפוחית השתן, כגון סרטן. כאן, אנו מתארים שיטה להשריש עכברים זכרים המאפשר השוואה ישירה בין בעלי חיים נשי ולספק פרוטוקול נתונים היסטוריים כדי להעריך רקמה בשלפוחית השתן על ידי cytometry זרימה כדי להבין טוב יותר את התגובות מארח זיהום. יחד, גישות אלה יסייעו בזיהוי גורמים מארח שתורמים הטיות סקס שנצפתה UTI ומחלות אחרות הקשורות שלפוחית השתן.
מבוא
דלקות בדרכי השתן (UTI) הם אחד הזיהומים הנפוצים ביותר במדינות המפותחות1. זיהום המחירים דומים בין נקבות וזכרים בין neonates את הקשישים2. נשים בגיל המעבר למבוגרים, אולם, יש שיעור מוגבר מאוד של UTI רכשה הקהילה לעומת גברים2,3. נתון כי מחלה זו משפיעה בעיקר על נשים, מחקר קליני מהותי באופן גורף התמקדה UTI אצל נקבות. אולם, UTI בגברים הוא אתגר הבריאות understudied ומשמעותית4. אכן, בגלל UTI אצל גברים משויכים תחלואה גבוהה יותר, זיהומים אלו באופן שגרתי מוגדרים מסובך4,5.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
עכבר ניסויים נערכו בהתאם לאישור פרוטוקול מספר 2012-0024 מאת Comité d'éthique-en-expérimentation-animale מרכז פריז et Sud (ועדת האתיקה על ניסויים בבעלי חיים), ביישום של אירופה דירקטיבה 2010/63 האיחוד האירופי.
1. הכנת קטטרים
- להכין אחת בצינורית ורידי-גישה לילדים עבור כל קבוצה של עכברים נגועה. באמצעות מנגנון קפיץ מובנה, מעצמכם כל בצינורית של המחט, שהומלץ על ידי היצרן. למחוק את המחטים, לשמר רק את הצינורית תוך ורידי פלסטיק.
- לחטא קטטרים ב תא למינארי למחזור אחד סגול (לעיניים), בדרך כלל 25-30 דקות.
הערה: קטטר יכול לשמש עכבר אחד או יותר, אולם צנתר החדש אמור לשמש בין קבוצות הניסוי, המינים או זני חיידקים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
בפיתוח של פרוטוקול זה, גדודים של עכברים C57Bl/6 נשים וגברים בגילאי 6 עד 8 שבועות היו נטל מושתל, חיידקי מוערכים ב שלפוחיות בנקודות זמן החל 1שעות עד 30 ימים. התוצאות ממחקרים אלה מפורטים במקום אחר (Zychlinsky Scharff. et al., תלוי ועומד). כאן, אנו מציגים נתונים נציג מדלקות 24 שעות ביממה. ראוי לציין, חיידקי הנטל היה מקביל בין זכר ונקבה עכברים-24 שעות לאחר הפגיעה (איור 1). גרסא חדשה בחיידקיים נטל נצפתה בתוך כל קבוצה 24 שעות לאחר הפגיעה, הדומה מה שדווח ב עכברים נקבה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
החדרה-transurethral של עכברים זכרים מציעה אפשרויות רבות מחקר חדש לתוך השפעתה של סקס על המחלה הרירית שלפוחית השתן, אלא גם מציג מספר אתגרים. בראש ובראשונה, מגבלה אחת היא כי החדרה בתחילה עשויה להיות קשה מבחינה טכנית, והתוצאה היא דלקת מופרזת במהלך הכניסה קטטר. שיפור הטכניקה יכולה להיות מושגת על ידי החדרה עכברים מתים עם פתרון צבעוניים, כגון צבע כחול אוונס. כדי לאשר ההתקנה הוא מוצלח, שלפוחיות צריך להיבדק באופן חזותי הנפח של נוזלים מושתל יכול להיות מוערך על ידי מיצוי עם מזרק טוברקולין. לא ניתן להפריז את החשיבות של תנועות עדינות.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים אין לחשוף.
תודות
אנו מודים ד ר מתיו רוסו על קריאה ביקורתית של כתב היד את המעבדה של דנדריטים Immunobiology עבור שלהם תובנות מועילות במהלך פיתוח פרוטוקול והפרוייקט הזה. עבודה זו נתמך בחלקה על ידי מימון מהפעולה האיחוד האירופי השביעי מסגרת תכנית מארי קירי (PCIG11-GA-2012-3221170, LabEx חיסונית-אונקולוגיה (מאי).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| BD Insyte Autoguard Shielded IV צנתרים 24 גרם, קוטר חיצוני 0.7 מ"מ, אורך 14 מ"מ | BD Medical | 381811 או 381411* | * מספר קטלוגי הוא לולאת חיסון תלויה במדינה |
| Greiner Bio-One | 731171 | ||
| LB Miller מרק | Difco | 244620 | |
| LB Miller agar | Difco | 244520 | |
| Cuvettes | Bio-rad | 223-9955 | |
| מזרקים | B בראון | 9166017V | |
| מלקחיים אגודל (אדסון) | Fine Science | Tools 11006-12 | |
| צינורות 5 מ"ל, פוליפרופילן | פלקון | 352063 | |
| רקמות Ruptor בדיקות חד פעמיות | Qiagen | 990890 | |
| 15 מ"ל צינורות כובע הפוך | Thermo Scientific | 362694 | |
| DNAse | Invitrogen | 18047019 | |
| Liberase TM | Sigma-Aldrich | 5401119001 | ולאחסן בטמפרטורה של -20 מעלות; C כדי למנוע הקפאה והפשרה חוזרת ונשנית |
| 100 ומיקרו; מסננות חכמות M MACS | Miltenyi | 130-098-463 | תואם לשפופרות של 15 מ"ל, מועדף |
| 100 ומיקרו; מסנני תאי M | Falcon | 352360 | תואם לצינורות של 50 מ"ל, אם מסננות חכמות של MACS אינן זמינות |
| צלחת 96 באר | Falcon | 353077 | |
| Fc block | BD Pharmingen | 553142 | נוגדן CD16/CD32 |
| נגד עכבר CD45 נוגדן | BD Biosciences | 561487 | אפשרויות צימוד פלואורסצנטיות רבות ושונות זמינות |
| צינורות 5 מ"ל פוליסטירן עם מכסה מסנן | פלקון | ||
| מזרק אינסולין | 352235 Terumo | BS05M2913 | |
| הומוגנייזר כף יד | Qiagen | 9001272 | TissueRuptor |
| זרימה ציטומטר | BD Biosciences | N/A | Fortessa SORP |
| תוכנת ציטומטריית זרימה | BD Biosciences | N/A | Diva |
מקורות
- Hooton, T. M., Stamm, W. E. Diagnosis and treatment of uncomplicated urinary tract infection. Infect Dis Clin North Am. 11 (3), 551-581 (1997).
- Harper, M., Fowlis, G. Management of urinary tract infections in men. Trends in Urology, Gynaecology & Sex....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
