Fettgewebe Stammzellen (ASC) leicht zu isolieren und aus dem Fett von normalen Ratten geerntet. ASC Blätter können mit Handy-Blatt Engineering erstellt werden und können in Zucker Diabetiker fetthaltige Ratten ausstellenden voll-dicke Haut Mängel mit freiliegenden Knochen und dann bedeckt mit einem Bilayer künstlicher Haut transplantiert werden.
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Methodenartikel
Schaffung und Transplantation von einem Fettgewebe-derived Stem Cell (ASC) Blatt in einem diabetischen Wundheilung Modell
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Künstlicher Haut erzielt erhebliche therapeutische Ergebnisse in der klinischen Praxis. Jedoch können künstliche Hautbehandlungen für Wunden bei diabetischen Patienten mit behindert Blutfluss oder große Wunden verlängern. Zellbasierte Therapien erschienen als eine neue Technik für die Behandlung von diabetischen Geschwüren und Zelle-Blatt-Technik verbessert die Wirksamkeit der Zelltransplantation. Eine Reihe von Berichten haben vorgeschlagen, dass Fettgewebe Stammzellen (ASC), eine Art mesenchymaler Stromazellen Zelle (MSC), therapeutisches Potenzial aufgrund ihrer relativen Fülle in Fettgewebe und ihre Zugänglichkeit für die Sammlung im Vergleich zu MSCs aus anderen Geweben zeigen. Daher erscheinen ASC eine gute Quelle für Stammzellen für therapeutische Zwecke. In dieser Studie wurden ASC Blätter aus dem epididymal Fettgewebe Fett von normalen Lewis Ratten mit Temperatur-responsive Kultur Gerichte und normalen Kulturmedium mit Ascorbinsäure erfolgreich erstellt. Die ASC-Blätter wurden in Zucker Diabetes Fettsäuren (ZDF) Ratten verpflanzt, einem Rattenmodell von Typ-2-Diabetes und Adipositas, die verminderte aufweisen Wundheilung. Eine Wunde auf der hinteren kranialen Oberfläche erstellt wurde, ASC Blätter wurden in der Wunde verpflanzt und einem Bilayer Kunsthaut wurde verwendet, um die Blätter zu decken. ZDF-Ratten, die ASC Blätter erhalten hatte besser als ZDF Ratten ohne die Transplantation von ASC Blätter Wundheilung. Dieser Ansatz war begrenzt, da ASC Blätter empfindlich gegen Trockenheit sind, erfordert die Aufrechterhaltung eines feuchten Wundmilieus. Daher wurde Kunsthaut verwendet, um das ASC-Blatt, um Austrocknen zu verhindern, dass zu decken. Die allogene Transplantation von ASC-Blatt in Kombination mit künstlicher Haut könnten auch für andere hartnäckigen Geschwüren oder Verbrennungen, wie Sie mit peripheren arteriellen Verschlusskrankheit und Kollagen-Krankheit beobachtet und könnte für Patienten, die unterernährt sind oder Steroide verwenden verabreicht werden. Somit wäre diese Behandlung der erste Schritt zur Verbesserung der therapeutischen Möglichkeiten für Diabetiker, die Wunde heilen.
Einleitung
Die Bevölkerung von Diabetes-Patienten steigt weltweit und 400 Millionen in 20151erreicht; schätzungsweise 15-25 % der Patienten mit Diabetes sind durch das Fortschreiten der unteren Extremität diabetische Geschwüre2gefährdet. Untere Extremität diabetische Geschwüre sind unlösbar und therapeutische längere mit Aufbautraining nach der vollständigen Wiederherstellung erfordern möglicherweise. Periode oft lange Therapie führt zu einem deutlichen Rückgang der Lebensqualität von Patienten. So müssen neue Therapien, die zu verringern oder zu vermeiden Ärger für die Behandlung von diabetischen Wunden entwickelt werden. Um diabe....
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Protokoll
Alle unten vorgestellten Versuchsprotokolle wurden vom Tierschutzausschuss der Tokyo Women's Medical University School of Medicine genehmigt und entsprechen allen Anforderungen der Richtlinien für die ordnungsgemäße Durchführung von Tierversuchen.
1. Vorbereitung von Tieren, Instrumenten, Nährmedien und Schalen
- Bereiten Sie das vollständige Kulturmedium mit mindestens essentiellem Alpha-Medium vor, das 20 % fötales Rinderserum (FBS) und 1 % Penicillin/Streptomycin enthält. Lagern Sie dies bis zur Verwendung mehrere Monate bei 4 °C.
- Verwenden Sie erwachsene männliche ZDF-Ratten als Modell für Typ-2-diabetische Adiposita....
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Ergebnisse
Dieses Protokoll versucht, eine neue zellbasierte Therapie bei hartnäckigen diabetische Wunden herzustellen. Kurz (wie in Abbildung 1dargestellt), allogene rASC Blätter entstanden aus normalen Ratten mit Zelle-Blatt Engineering und wurden dann mit einem Bilayer künstlicher Haut auf eine voll-dicke Hautdefekt auf einer diabetischen Ratten verpflanzt. Lichtmikroskop Bilder ein gutes Beispiel für eine rASC Blatt (Abbildung 2A) und ein schlechtes Beispiel für.......
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Diskussion
Die kritischsten Schritte für das züchten erfolgreich eine rASC Blatt sind wie folgt: 1) die Temperatur bei etwa 37 ° C während der Kultivierung auf Temperatur reagierende Kultur Gerichte beibehalten werden. Während der Erstellung eines Blattes rASC jedes Verfahren durchgeführt wurde, auf einem 37 ° C Thermo-Teller und jedes Reagenz wurde auf 37 ° C zu verhindern, dass Zellen spontan aus der Schale31abnehmen gewärmt. (2) die Empfänger ZDF Ratten müssen überwacht werden, um die Entfernung der nicht.......
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Offenlegungen
Folgenden Autoren offenlegen finanzielle Beziehungen zu dieser Publikation: Teruo Okano ist Gründer und Direktor des Board of Cell Samen Inc., das Technik und Patente medizinische Universität Tokio Damen lizenziert, und Teruo Okano und Masayuki Yamato sind Akteure in Zelle Samen Inc. Tokyo Medical Frauenuniversität erhält Forschungsgelder aus Zelle Seed Inc. Die anderen Autoren erklären, dass sie keinen finanzielle Beziehungen relevant für diese Publikation.
Danksagungen
Die Autoren danken Dr. Yukiko Koga der Abteilung für plastische und Rekonstruktionschirurgie, Juntendo University School of Medicine, für die praktische Beratung. Wir danken auch Herrn Hidekazu Murata der diabetischen Center of Tokyo Women Medical University School of Medicine für ausgezeichneten technischen Support. Diese Studie wurde unterstützt durch die Schaffung von Innovationszentren für erweiterte interdisziplinäre Bereiche Forschungsprogramm des Projekts für Entwicklungsländer Innovationssysteme "Zelle Blatt Tissue Engineering Center (CSTEC)" vom Ministerium für Bildung, Kultur, Sport, Wissenschaft und Technologie (MEXT) von Japan.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| α-MEM glutamax | Invitrogen | 32571-036 | Carlsbad, CA |
| Fötales Rinderserum (FBS) | Japan Bioserum Co Ltd. | S1650-500 | |
| Penicillin/Streptomycin | Life Technologies | 15140-122 | |
| Kollagenase A | Roche Diagnostics | 10 103 578 001 | Mannheim, Deutschland |
| 60 cm2 Primaria Gewebekulturschale | BD Biosciences | 353803 | Franklin Lakes, NJ |
| Dulbecco's Phosphate Buffer Kochsalzlösung (PBS) | Life Technologies | 1490-144 | |
| 0,25 % Trypsin-Ethylendiamin-Tetraessigsäure (EDTA) | Life Technologies | 25200-056 | |
| L-Ascorbinsäure, Phosphat, Magnesiumsalz, N-Hydrat | Wako | 013-19641 | |
| 35-mm-Kulturschale (UpcellTM) | CellSeed | NUNC-174904 | Tokio, Japan |
| Mikrowarme Platte (MP-1000) | Kitazato Science Co., Ltd. | 1111 | |
| Nagetier-Beatmungsgerät | Stoelting | #50206 | Wood Dale, IL |
| 4% Isofluran | Pfizer Japan | 114-13340-3 | Tokio, Japan |
| Künstliche Haut (Pelnac® ) | Smith & Neffe | PN-R40060 | Tokio, Japan |
| Nicht klebender Verband (Hydrosite plus® ) | Smith & Neffe | 66800679 | Bekannt als Allevyn non-adhessing® in den USA |
| 5-0 Nylon-Naht | Alfresa | EP1105NB45-KF2 | |
| 20 CELLSTAR TUBES | greiner bio-one | 227 261 | |
| 15 mL Zentrifugenröhrchen | Corning Incorporated | 430791 | |
| 14 GOLDMAN-FOX PERIOSTEAL | Hu-Friedy | P14 | Chicago, IL |
Referenzen
- International Diabetes Federation. IDF Diabetes Atlas, 7 ed.. , International Diabetes Federation. Brussels, Belgium. Available from: http://www.diabetesatlas.org/ (2015).
- Boulton, A. J., Vileikyte, L., Ragnarson-Tennvall, G., Apelqvist, J. The global burden of diabetic foot disease. Lancet. 366 (9498), 1719-1724 (2005).
- Zannettino, A. C., et al.
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Nachdrucke und Genehmigungen
