Introduction
Slagtilfælde under den neonatale periode er en væsentlig årsag til død og invaliditet, der forekommer i så mange som 1 i 2300 levendefødte 1. Dette fører til ændret udvikling af centralnervesystemet og øget langsigtet sygelighed, herunder øget forekomst af epilepsi, cerebral parese, mental retardering, og andre typer af motor eller kognitiv dysfunktion. De livslange virkninger af tidlig slagtilfælde gøre translationelle dyremodeller afgørende for behandlingen mekanismerne i skade og reparation i denne population, herunder strategier for at beskytte den skadede hjerne eller at forbedre reparation.
Forskellige iskæmimodeller er blevet anvendt til at undersøge hjerneskade hos voksne dyr, og mens Rice-Vannucci (Modified Levine) 2 procedure er almindeligt anvendt til at studere hypoxisk-iskæmisk skade i udviklende hjerne, fokal iskæmi-reperfusion er en særskilt mekanisme skade forårsager fokal skade, med en skadet kerne og penumbra og uskadt remote væv. De Koizumi 3 og Longa 4 modeller blev udviklet i voksne rotter for at opnå forbigående mellem-cerebral arterieokklusion via den fælles carotidarterie (CCA) og ydre carotidarterie (ECA), hhv. I begge modeller, permanent ligation og ætsninger af arterie grene er vigtigt at minimere blødning og at strømline den kirurgiske procedure, som også forårsager bivirkninger på dyrets evne til at fodre og at tage på i vægt efter skade. Desuden er der distinkte skade mekanismer i umodne hjerne og specifikke mønstre af skade ses som et resultat.
For nylig er photothrombotic slagtilfælde (Rose-Bengal metode) 5 og permanent MCA ligering 6 blevet anvendt til at undersøge neonatale og voksne slagtilfælde. Både photothrombotic slagtilfælde og MCA ligation skabe permanente ændringer i cerebral blodgennemstrømning, der resulterer i en mangel på reperfusion. Reperfusion er en kritisk komponent i udviklingen og progressionen af fokal skade, med øget excitotoksicitet, dannelse af frie radikaler, og nitrogenoxidproduktion fører til forsinket celledød, der involverer signalering kaskader, der er forskellige fra den iskæmiske fase 7. Hypoxi-iskæmi involverer permanent unilateral carotid ligering efterfulgt af global hypoxi, som adskiller sig også fra årsagen til hypoxisk-iskæmisk skade hos mennesker og forårsager ikke en ensartet fokal skade mønster, hvilket gør undersøgelse af den skadede kerne og Penumbra mere udfordrende.
Vi har tidligere beskrevet en ikke-hæmorrhagisk iskæmireperfusion slagtilfælde model i umodne rotter under anvendelse af forbigående mellem-cerebral arterieokklusion (MCAO) 8, 9, 10. Dette er en mindre invasiv metode, der får adgang og lukker MCA gennem den interne halspulsåre uden permanent ligatipå eller ætsninger. Dette tilvejebringer en model for skade ligner den mest almindelige årsag til slagtilfælde i den perinatale periode 11, 12. Denne iskæmireperfusion model af skade resulterer i beskadigelse af ipsilaterale striatum og parieto-temporale cortex. Denne model af tMCAO tillader også kontrol over alvorligheden af kvæstelser ved at variere varigheden af okklusion. Undersøgelse af signalveje og histologiske forandringer i den skadede kerne og Penumbra og i den ikke skadede ipsilaterale og kontralaterale væv kan yderligere belyse de mekanismer skade og reparation i umoden hjerne. Denne undersøgelse vil demonstrere denne vigtige skade model for udvikling af hjernen.
Protocol
Alle dyr forskning blev godkendt af University of California, San Francisco Komité for Dyrs Forskning og blev udført i overensstemmelse med den vejledning for pleje og anvendelse af forsøgsdyr (US Department of Health and Human Services, publikation nr 85-23, 1985 ). Dyrene blev nøje overvåget af dyrlæger fra UCSF Institutional Animal Care og brug Udvalg (IACUC), akkrediteret af AAALAC. En Sprague-Dawley-rotte med en 8 dage gammel kuld (10 unger per kuld) blev opnået. Moderen og hendes unger fik mad og vand ad libitum og har til huse i en temperatur- og lys-kontrollerede dyr pleje facilitet med daglig berigelse, pr lACUC protokol, indtil hvalpene var 10 dage gammel. Alle kirurgiske instrumenter, der anvendes i denne procedure, blev autoklaveret for at sikre sterilitet. Sterilitet af instrument tip opretholdes under hele operationen.
1. Mellemøsten cerebralarterieokklusion
- Afvej hvalpen og ensure, at det er den rigtige vægt (19-21 g). Anesthetize pup i 3% isofluran i 100% O2 og sikre, at der ikke er nogen reaktion på en fod knivspids. Opretholde kroppens overfladetemperatur mellem 35,5 ° C og 37 ° C med anvendelse af en varmepude under den kirurgiske scene.
- Fastgør dyret i liggende stilling med tape over skulderen regioner. Anvendelse sterile vatpinde, svaber anterior cervikale område med povidon-iod-opløsning efterfulgt af en vatpind af 70% ethanol i dobbeltdestilleret vand, vekslende mellem hver opløsning i fire podninger total.
- Lokalt infiltrere 0,25% bupivacain i den planlagte incisionssted. Under anvendelse af et stereoskop, lave en midterlinjen 5 til 7 mm anterior cervikal incision for at blotlægge fælles carotidarterie (CCA). Placere 2-4 retraktorer at holde hulrummet åbent og arterien blotlagt.
- Find den indre carotidarterie (ICA), occipitale arterie (OA), og ydre carotidarterie (ECA). Soignere arterierne for at få et klart billede. Vær bileful ikke at forstyrre vagusnerven.
BEMÆRK: skinopererede unger er inicision åben og arterierne er udsat, hvorefter incisionen sutureres lukket. Den samlede anæstesi tid svarer til den for okklusion kirurgi. - Skær 1,5 cm af 6-0 silke flettet sutur tråd. Unbraid sutur, trækker ud enkelte strenge. Sørg for, at de enkelte tråde er pæne og ikke flosset.
BEMÆRK: Hvis det er nødvendigt, glatte de flossede ender ved at dyppe enkelt streng i sterilt vand og grooming strengen med pincetspidser. - Hold suturtråden med 45 grader pincet, bevæge tangen i en fejende bue bevægelse at gå under ICA således at pincetspidser emerge mellem ICA og OA.
BEMÆRK: Hvis dissektion er gjort godt, vil dette trin være relativt let. Hvis ICA og OA er rørende, passe på ikke at briste arterierne ved brug af pincet til at isolere ICA. Hvis der opstår blødning, lægge pres på arterien med pincet, indtilblødningen stopper. Absorbere blodet med en steril podepind. - Grib enden af suturtråden, der fastholdes af de pincet, og træk det så enden er let at få adgang. Slip streng fra tangen og tilbage tangen ud fra under ICA, vende bevægelsen i trin 1.5 (figur 1A).
- Bind en midlertidig ligatur rundt ICA i bunden, nærmest hvor det adskilles fra CCA.
BEMÆRK: Det er vigtigt at binde knude, således at enden af strengen, som vil blive trukket for at fjerne knuden er lang nok (større end 1 mm, mindre end 3 mm) til nemt gribe med pincet og samtidig sikre, at der er en passende mængde af suturtråd på den anden side af knuden til tilbagetrækning. - trække omhyggeligt ICA sideværts og bruge et klip for at fastgøre strengen til overskydende hud nær armhulen region på siden modsat snittet. Sikre, at denne tilbagetrækningsnål streng er stram nok til at stoppe blodgennemstrømning før man går videre til det næste trin, atminimere risikoen for ukontrolleret blødning. Bemærk, at arterien er flad og bleg.
BEMÆRK: Må ikke over-tilbagetrækning, da det kan forårsage en hel eller delvis tåre af ICA. Tilbagetrækningen kan justeres lige før arteriotomien ved at trække på strengen på siden modsat til clipsen. - Anvende 45 ° pincet til at gribe en anden uflettet suturtråd og loop det under og omkring ICA, som i trin 1.5. Position denne streng lateralt for tilbagetrækning streng (figur 1B).
BEMÆRK: Dette trin kan også gøres før tilbagetrækning. Hvis du er usikker på kvaliteten af tilbagetrækning, kan denne knude være meget løst bundet før det næste trin. - Skær en 0,2 mm arteriotomi midtvejs mellem de bundne og ubundne ligaturer, vildfarende tættere på den bundne ligaturen.
BEMÆRK: Blood er tilbage i den bundne-off arterie kan tømme gennem arteriotomien men bør ikke overstige 5 uL. Hvis blødningen fortsætter, forsigtigt trække tilbagetrækning strengen at øge tilbagetrækning, med omhu for at envoid beskadige arterie fra stor spænding. - Ved hjælp af en metrisk lineal, måle okkluderende sutur og skære sutur med en ekstra godtgørelse på 2-3 mm til fjernelse af okklusionsindretningens under reperfusion. Hold okkluderen med 45-graders pincet og bruge lige pincet til at oprette en bøje i passende længde til at nå MCA, som markerer en stoppested for avancement.
BEMÆRK: En 10 mm okklusion længden fra silikone spids ende til bøjningen anvendes til P10 Sprague Dawley eller Long Evans rotteunger i denne vægtområde. - Anvendelse 45 ° pincet, fodre silicone-behandlet nylon okklusion sutur i arteriotomien og fremme suturen til bøjningen, der markerer forudbestemt afstand til MCA (figur 1C). Sørg for, at avancement føles glat; straks standse fremføring hvis der mærkes modstand. Under avancement, sigter den sutur i en retning, der er parallel med CC / ECA, mod hovedet.
BEMÆRK: Hvis sutur er avanceret dorsalt, moddyrets ryg, kan det løbe ind pterygopalatinarterien (PTA). Hvis der mærkes modstand efter 3-5 mm af fremføring, har suturen ramt PTA krydset. Back okklusionsindretningens ud af arterien, indtil silikone hoved er nær arteriotomien før justering avancement retning. Det er ikke nødvendigt helt at fjerne den okklusionsindretning fra arteriotomien. - Fastgør okkluder ved at binde en midlertidig ligatur, ved hjælp af streng fra trin 1,10 (figur 1D).
- Fjern retraktoren klip. Trim strengene i begge de midlertidige ligaturer så streng af knuden, der er trukket for at fjerne knuden er let at forstå med lige pincet og er længere end den streng, der er trukket til at stramme knuden.
BEMÆRK: Strengene skal være kort nok til, at de ikke i karambolage i hulrummet efter lukningen. - Fjern retraktorer og luk hulrum ved hjælp 6-0 flettet silke at skabe tre til fire afbrudte suturer.
- Fjern hvalpen fraanæstesi og placere den på en varmepude i rumluften. Overvåg hvalpen indtil den har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til at opretholde brystleje og sikre, at det fuldt ud er kommet inden den sendes tilbage til dæmningen. Sikre, at pup opretholder en legemsoverflade temperatur mellem 35,5 ° C og 37 ° C.
- Under okklusion, kan diffusion-vægtet magnetisk resonans (DW-MRI) under isofluran-anæstesi anvendes til at verificere den passende induktion af skade. Figur 2 viser igangværende iskæmisk læsion påvises ved DW-MRI under tMCAO 9.
BEMÆRK: Diffusion-vægtet spin-ekko plane billeddannelse udføres 10-15 min før reperfusion. Hele hjernen afbildes med serielle 2-mm-tykke koronale sektioner ved hjælp af følgende pulssekvens indstillinger: TR / TE = 5.000 / 60 ms, 4 gennemsnit, synsfelt = 35 mm, datamatrix = 128x128, diffusionsgradienten varighed = 20 ms, separation = 29,7 ms, amplitude = 70mT / m og b-faktor = 1.045 s / mm2.Dyr, som udviser en mangel på cortical involvering eller atypisk iskæmisk læsion, såsom i hjernestammen, er undtaget.
2. Reperfusion
BEMÆRK: Okklusion udføres i 3 timer for at bevirke en moderat til svær omfanget af den skade, der involverer striatum og cortex.
- På cirka 2 timer og 50 minutter efter okklusion af MCA, anesthetize pup i 3% isofluran i 100% O2. Opretholde en legemsoverflade temperatur mellem 35,5 ° C og 37 ° C med anvendelse af en varmepude under den kirurgiske scene.
- Fjern de afbrudte suturer fra trin 1.16 og lokalisere krydset, der er præget af de to ligaturer og bagenden af den okkluderende sutur.
BEMÆRK: Sham-opererede dyr induceres og forbliver under anæstesi i en tilsvarende tidsperiode til de tillukkede dyr. Snittet er igen åbnet og sutureres lukket. For sham-opererede dyr, fortsætte til trin 2.11. - omhyggeligt afbindeden mest laterale knude tidligere bundet i trin 1.14 ved at trække længere streng.
BEMÆRK: Hvis der er modstand i afbinding knuden, stop for at kontrollere, at den korrekte streng af knuden trækkes. Hvis modstanden fortsætter, øge forstørrelsen for en bedre visning. Vær forsigtig, når afbinding, da det er muligt at beskadige arterie i dette trin. - Fjern suturtråden fra hulrummet.
- Ved præcis 3 timer efter MCA okklusion, langsomt bakke den okkluderende sutur ud af arterien. Der vil ikke være nogen modstand.
BEMÆRK: I de fleste tilfælde vil der ikke være nogen blødning. Hvis der opstår en lille mængde af blødning, lægge pres på arterien på arteriotomistedet. - Brug pincet at påføre tryk på arteriotomien, som næste skridt genskaber ICA blodgennemstrømning til reperfusion.
- løsne forsigtigt mediale knude ved hjælp af samme metode som i trin 2.3.
- Fjern suturtråden fra kroppen og anvende et hæmostatisk middel til arteriotomien at stoppe blødningen. Sørg for, at blødningen er stoppet.
BEMÆRK: Return of arterien oprindelige form og rød farve bekræfter, at ICA blodgennemstrømningen er genoprettet. - Fjern retraktorer og luk hulrum med tre til fire afbrudte suturer af 6-0 flettet silke.
- Fjern hvalpen fra anæstesi og placere den på en varmepude i luften i rummet. Overvåg den, indtil den har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til at opretholde brystleje og sikre fuld helbredelse inden den sendes tilbage til dæmningen. Sikre, at pup opretholder en legemsoverflade temperatur mellem 35,5 ° C og 37 ° C.
- Undersøg hvalpene dagligt i 5 dage. Recprd deres vægte og inspicere de steder indsnit nøje for passende helbredelse. Fjern suturerne efter 7-14 dage. Post-tMCAO skade kan afbildes med MR, hvis det ønskes 9.
BEMÆRK: Dyr kan miste op til 1 g vægt på den første dag, men vil typisk genvinde vægten uden indgriben og være inden for et lignende vejet interval til kontrol af dage 4-5. Sjældent kan en pup miste overdreven vægt eller har svært fodring, kræver oral sondeernæring feeds for 2-3 dage. - Ved P21, kan skade beregnes pålideligt sensomotoriske adfærdsmæssige tests, såsom rotarod eller cylinder opdræt. Kognitive test kan udføres så tidligt som 4-6 ugers alderen ved anvendelse af vurderinger, såsom hidtil ukendte objekt anerkendelse eller Morris water maze 13.
- Aflive rotterne ved intraperitoneal injektion af Euthasol (50 mg / kg) til hjernehøst 11, 12.
- Histologisk analyse for at vurdere skade volumen eller reaktion på indgreb kan udføres med cresylviolet eller H & E-farvning (figur 3) 10.
Representative Results
Alvorligheden af kvæstelser forårsaget af tMCAO er stærkt afhængig af både occlusionstiden og oplevelsen af kirurgen. En 90-min okklusion ofte producerer en mild til moderat skade mønster, mens 3 timer frembringer en moderat til svær skade. Sværhedsgraden af skade kan bedømmes gennem en række forskellige metoder, herunder MRI, histologi eller kort- eller langsigtede adfærdsmæssige analyser. Figur 2 viser et eksempel på DW-MRI udført 75 min i en 90-min okklusion, hvilket bekræfter iskæmisk skade involverer den ipsilaterale hemisfære. Diffusion vægtet imaging demonstrerer øget diffusion i den ipsilaterale striatum og størstedelen af den ipsilaterale cortex, uden kontralaterale ændringer, i den akutte iskæmiske fase. Dette korrelerer til et moderat niveau af langvarig skade, der involverer både cortex og den dybe grå masse.
Okklusion af MCA resulterer icelledød, der begynder i striatum for mindre alvorlige skader og udvikler forværring kortikale og hippocampus skade i længere okklusion tider og mere alvorlig skade. Under optimeringen af den kirurgiske teknik, såsom bestemmelse af suturen indstikslængde, MRI anbefales, da det giver mulighed for bekræftelse af korrekte sutur placering og visualisering af ødem og skade progression under okklusion 14, 15, 16. Hvis MR ikke er til rådighed, H & E eller cresylviolet farvning er enkle og pålidelige histologiske metoder til at bestemme skade morfologi og kan bruges på både tidlige og sene tidspunkter efter den tMCAO. Figur 3 viser en moderat til svær skade mønster på histopatologisk undersøgelse efter en 3 h okklusion, hvilket viser cyste dannelse og volumen i den ipsilaterale striatum og cortex.
10.
Selv med mild skade, bevægeapparatet ændringer, såsom cirkelbevægelser og hemiparese, er noteret under okklusion periode. Med mere alvorlig skade, vil vare ved disse ændringer efter reperfusion. Yderligere adfærdsmæssig testning kan anvendes til at vurdere alvorligheden af kvæstelser, herunder rotarod eller cylinder opdræt test for sensormotorisk funktion og Morris water maze forkognitiv funktion 13.
Figur 1: Levende Kirurgiske Images of the tMCAO Procedure. (A) Første suturtråd i en løkke ICA, som beskrevet i trin 1.6. (B) Det første midlertidige ligatur bundet og ICA er trukket tilbage. Den anden suturtråd i en løkke ICA, lateralt for første suturtråden, som beskrevet i trin 1.9. (C) Den siliconeovertrukket okklusion sutur føres ind i arteriotomistedet, som beskrevet i trin 1.12. (D) Den anden midlertidige ligatur er bundet til at sikre okklusionsindretningen på plads, som beskrevet i trin 1.14. Målestok = 1 mm.
Figur 2: MRI Under OCCLusion Demonstrerer Passende Ensidig Skade. Anterior til posterior, koronale billedudsnit af DW-MRI, udført under en 90 min okklusion, demonstrerer øget diffusion involverer den ipsilaterale hemisfære (pile), hvilket er konsistent med igangværende iskæmisk læsion i den akutte fase. Genoptrykt med tilladelse fra Stroke 11. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Ensidig Skade Involvering striatum og Cortex ved 4 uger efter tMCAO. Posterior til anterior, cresyl-violet-farvede coronale hjernesnit (hver 50 um) høstet fra p38 dyr demonstrerer temmelig alvorlig skade (pilene viser ipsilaterale cyste dannelse og reduceret cortical ogstriatal volumen) efter en 3 h tMCAO ved P10. Den runde hul på venstre side repræsenterer en kontralateral hemisfære id. Målestok = 5 mm. Genoptrykt med tilladelse fra neurobiologi of Disease 12. Klik her for at se en større version af dette tal.
Discussion
Kritiske trin i protokollen
For det første er det vigtigt at opretholde normotermi fra initieringen af anæstesi indtil fuldstændig genvinding, som der er kendte effekter af både hypotermi 17 og hypertermi 18 på progression af hjerneskade i både umodne og modne dyr. Sekund, mens der sikres dyret og tilbagetrækning af indsnit, optimal positionering for at overvåge åndedræt og sikre, at luftrøret er fri for kompression er afgørende. Tredje, undgå klemning eller strække vagusnerven, da dette kan forårsage ændringer i hjertefrekvens med vagal stimulering. For det fjerde, fordi tilbagetrækning af ICA er nødvendig for at kontrollere blødning under arteriotomien, skal man være opmærksom på graden af spænding under tilbagetrækning for at undgå at beskadige arterie. Hvis arterien går i stykker fra tilbagetrækning, eller hvis der er en dårlig arteriotomi snit, dyret skal udelukkes fra analysen på grund af risikoenaf blødning og dårlig reperfusion.
Ændringer og fejlfinding
Anvendelse af MRI som en guide, kan suturen længde optimeres for at sikre, at silikone spids korrekt okkluderer MCA at skabe den fokal iskæmi. Hvis MR ikke er til rådighed, kan hvalpene aflives før reperfusion til dissektion at visualisere placeringen af sutur. Juster suturen længde efter behov. Den fødselsvægt stærkt korrelerer med kravene til okkluderende sutur længde. Occlusionstiden kan modificeres til at justere graden af skade sværhedsgrad.
Desuden sutur form og længde er kritiske. For P10 Sprague-Dawley og Long Evans hanrotter, der vejer 19-21 g, 10 mm er den optimale længde af insertion i vores erfaringer. Yderligere indføring af den okkluderende sutur kan resultere i perforering af MCA. Endvidere vil konsistensen i form af glødetråden okkluderende i hver kirurgi resultere i en forøget konsistens skade pattern 19, 20. Derfor anbefales det at bruge professionelt fremstillede suturer til dette specifikke formål. Det er også vigtigt at bemærke, at skaden mønster kan variere mellem praktikere på grund af tilsyneladende små forskelle i teknik.
Begrænsninger af teknikken
Udførelse af denne teknik i en lille, udvikling gnaver kræver betydelig erfaring. Hvis udføres korrekt, kirurgen er i stand til at forårsage en meget konsekvent skade mønster tværs dyr af forskellig størrelse og nå en overlevelsesrate på mere end 95%. Desuden ordentlig kirurgiske værktøjer er afgørende. Kirurgiske instrumenter skal være godt vedligeholdt for at sikre, at alle instrumenter tips tilnærme ordentligt.
Betydningen af denne teknik i forhold til eksisterende eller alternative metoder
Mens hypoxi-iskæmi, eller Rice-Vannucci model 2
Fremtidige applikationer efter mastering denne teknik
Denne model ligner den mest almindelige årsag til slagtilfælde i menneskelige nyfødte, en forbigående okklusiv trombe, der forekommer i den perinatale periode 11, 21. Ætiologien er ikke helt klar og er mest sandsynligt multifaktoriel, men det antages i de fleste tilfælde to skyldes emboli passerer fra moderkagen 11. Desuden er mange nyfødte med formodet perinatal slagtilfælde ofte til stede med senere anfaldsaktivitet eller subtile fokal neurologisk undersøgelse abnormaliteter 22. Dette gør anvendelsen af en konsekvent, translationel skade model til identifikation mekanismer skade progression og mulige terapeutiske strategier afgørende.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflourane | Henry Schein | 50033 | anesthetic, at 3% |
| Trinocular Surgioscope | World Precision Instruments | PSMT5N | |
| Heating pad | Sunbeam | 000731-500-000 | low to medium setting |
| IR Thermometer | Extech Instruments | 72-5270 | |
| Retraction kit for small animals | Fine Science Tools | 18200-20 | |
| CermaCut Scissors | Fine Science Tools | 14958-09 | |
| Dumont #5SF Forceps | Fine Science Tools | 112522-00 | 2x |
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | 2x |
| B-2 Micro Clamp | Fine Science Tools | 00398-02 | |
| Forcepts for Clamp Application | Fine Science Tools | 00072-14 | |
| Micro Vannas Scissors | Fine Science Tools | 15000-03 | 2mm cutting edge |
| Occlusion Sutures | Doccol | 602123PK10 | 701712PK5Re |
| Ruler | Fine Science Tools | ||
| Hemostatic Agent | Avitene | DVL1010590 | |
| 6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture | Ethicon | 769G | |
| Euthasol | Virbac | 710101 | 0.22 mL/kg |
| Cotton Tipped Applicators | Henry Schein | 100-9249 | |
| Laboratory Tape | VWR | 89097-990 |
References
- Grunt, S., et al. Incidence and outcomes of symptomatic neonatal arterial ischemic stroke. Pediatrics. 135 (5), 1220-1228 (2015).
- Rice, J. E., Vannucci 3rd, R. C., Brierley, J. B. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat. Ann Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).
- Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8 (8), (1986).
- Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
- Labat-gest, V., Tomasi, S. Photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies. J Vis Exp. (76), (2013).
- Renolleau, S., Aggoun-Zouaoui, D., Ben-Ari, Y., Charriaut-Marlangue, C. A model of transient unilateral focal ischemia with reperfusion in the P7 neonatal rat: morphological changes indicative of apoptosis. Stroke. 29 (7), 1454-1460 (1998).
- Perlman, J. M. Intervention strategies for neonatal hypoxic-ischemic cerebral injury. Clin Ther. 28 (9), 1353-1365 (2006).
- Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. Neonatal reversible focal cerebral ischemia: a new model. Neurosci Res. 32 (4), 349-353 (1998).
- Gonzalez, F. F., et al. Erythropoietin increases neurogenesis and oligodendrogliosis of subventricular zone precursor cells after neonatal stroke. Stroke. 44 (3), 753-758 (2013).
- Larpthaveesarp, A., Georgevits, M., Ferriero, D. M., Gonzalez, F. F. Delayed erythropoietin therapy improves histological and behavioral outcomes after transient neonatal stroke. Neurobiol Dis. , (2016).
- Rutherford, M. A., Ramenghi, L. A., Cowan, F. M. Neonatal stroke. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 97 (5), 377-384 (2012).
- van der Aa, N. E., Benders, M. J., Groenendaal, F., de Vries, L. S. Neonatal stroke: a review of the current evidence on epidemiology, pathogenesis, diagnostics and therapeutic options. Acta Paediatr. 103 (4), 356-364 (2014).
- Gonzalez, F. F., et al. Erythropoietin sustains cognitive function and brain volume after neonatal stroke. Dev Neurosci. 31 (5), 403-411 (2009).
- Dudink, J., et al. Evolution of unilateral perinatal arterial ischemic stroke on conventional and diffusion-weighted MR imaging. AJNR Am J Neuroradiol. 30 (5), 998-1004 (2009).
- Derugin, N., et al. Magnetic resonance imaging as a surrogate measure for histological sub-chronic endpoint in a neonatal rat stroke model. Brain Res. 1066 (1-2), 46-56 (2005).
- Dzietko, M., Wendland, M., Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. Magnetic resonance imaging (MRI) as a translational tool for the study of neonatal stroke. J Child Neurol. 26 (9), 1145-1153 (2011).
- Mancuso, A., Derugin, N., Hara, K., Sharp, F. R., Weinstein, P. R. Mild hypothermia decreases the incidence of transient ADC reduction detected with diffusion MRI and expression of c-fos and hsp70 mRNA during acute focal ischemia in rats. Brain Res. 887 (1), 34-45 (2000).
- Kasdorf, E., Hyperthermia Perlman, J. M. Inflammation, and Perinatal Brain Injury. Pediatric Neurology. 49 (1), 8-14 (2013).
- Bouley, J., Fisher, M., Henninger, N. Comparison between coated vs. uncoated suture middle cerebral artery occlusion in the rat as assessed by perfusion/diffusion weighted imaging. Neurosci Lett. 412 (3), 185-190 (2007).
- Shimamura, N., Matchett, G., Tsubokawa, T., Ohkuma, H., Zhang, J. Comparison of silicon-coated nylon suture to plain nylon suture in the rat middle cerebral artery occlusion model. J Neurosci Methods. 156 (1-2), 161-165 (2006).
- Kirton, A., deVeber, G. Paediatric stroke: pressing issues and promising directions. Lancet Neurol. 14 (1), 92-102 (2015).
- Nelson, K. B. Perinatal ischemic stroke. Stroke. 38, 742-745 (2007).
