Introduction
Stroke under nyföddhetsperioden är en betydande orsak till död och handikapp, förekommer i så många som en av 2300 levande födda 1. Detta leder till förändrad centrala systemutveckling nervös och ökad långsiktig sjuklighet, inklusive ökad förekomst av epilepsi, cerebral pares, mental retardation, och andra typer av motor eller kognitiv dysfunktion. De livslånga effekterna av tidig stroke gör translationdjurmodeller avgörande för att undersöka mekanismerna för skada och reparation i denna population, inklusive strategier för att skydda den skadade hjärnan eller för att förbättra reparation.
Olika ischemi modeller har använts för att studera hjärnskada hos vuxna djur, och medan Rice-Vannucci (Ändrad Levine) 2 förfarande används ofta för att studera hypoxisk-ischemisk skada i den växande hjärnan, är fokal ischemi-reperfusion en tydlig mekanism för skador orsaka brännskador, med en skadad kärna och Penumbra och oskadad fjärr vävnad. De Koizumi 3 och Longa 4 modeller utvecklades i vuxna råttor för att uppnå övergående mellersta hjärnartären ocklusion via den gemensamma halsartären (CCA) och yttre halsartären (ECA), respektive. I båda modellerna, permanent ligering och kauterisation av artär grenar är viktigt att minimera blödning och för att effektivisera den kirurgiska proceduren, vilket också orsakar skadliga effekter på djurets förmåga att mata och gå upp i vikt efter skada. Vidare finns det distinkta mekanismer skade i omogen hjärna och specifika mönster av skada som ses som ett resultat.
På senare tid har photothrombotic stroke (Rose-Bengal-metoden) 5 och permanent MCA ligation 6 använts för att studera neonatal och vuxen stroke. Både photothrombotic stroke och MCA ligation skapa permanenta förändringar i cerebralt blodflöde som resulterar i en brist på reperfusJon. Reperfusion är en kritisk komponent i utvecklingen och progressionen av fokal skada, med ökad excitotoxicitet, bildning av fria radikaler, och kväveoxidproduktion som leder till fördröjd celldöd som innebär signaleringskaskader som skiljer sig från den ischemiska fasen 7. Hypoxi-ischemi innebär permanent unilateral karotidligering följt av global hypoxi, som också skiljer sig från orsaken till hypoxisk-ischemisk skada hos människor och inte orsakar en konsekvent fokal skada mönster, vilket gör undersökning av den skadade kärnan och Penumbra mer utmanande.
Vi har tidigare beskrivit en icke-hemorragisk ischemi-reperfusion stroke modell i omogen råtta med användning av övergående mellersta hjärnartären ocklusion (MCAO) 8, 9, 10. Detta är en mindre invasiv metod som har åtkomst och ockluderar MCA genom den inre halsartären utan permanent ligatipå eller kauterisation. Detta ger en modell av skada liknar den vanligaste orsaken till stroke under den perinatala perioden 11, 12. Denna ischemi-reperfusion modell skaderesulterar i skador på ipsilaterala striatum och parieto-temporal cortex. Denna modell av tMCAO tillåter också kontroll över hur allvarlig skada genom att variera längden på ocklusion. Undersökning av signalvägar och histologiska förändringar i den skadade kärnan och halvskuggan och i den oskadade ipsilateral och kontralateral vävnad kan ytterligare belysa mekanismerna för skada och reparation i den omogna hjärnan. Denna studie kommer att visa denna viktiga modell skada för den växande hjärnan.
Protocol
Alla djurförsök godkändes av University of California, San Francisco kommittén för djurs forskning och utfördes i enlighet med Guide för skötsel och användning av försöksdjur (US Department of Health and Human Services, publikation nr 85-23, 1985 ). Djuren övervakas noggrant av veterinärer i UCSF Institutional Animal Care och användning kommittén (IACUC) ackrediterat av AAALAC. En Sprague-Dawley-råtta med en 8 dagar gammal kull (10 valpar per kull) erhölls. Mamman och hennes valpar fick mat och vatten efter behag och inrymt i en temperatur- och ljusstyrd djurvård anläggning med dagliga anrikning per IACUC protokollet tills valparna var 10 dagar gammal. Alla kirurgiska instrument som används i detta förfarande autoklaverades för att säkerställa sterilitet. Sterilitet instrument tips bibehålls under hela operationen.
1. Middle Cerebral artärocklusion
- Väg valpen och ensure att det är rätt vikt (19-21 g). Söva valp i 3% isofluran i 100% O2 och se till att det inte finns något svar på en fot nypa. Hålla kroppen yttemperatur mellan 35,5 ° C och 37 ° C med användning av en värmedyna under kirurgiska scenen.
- Säkra djuret i ryggläge med tejp över skulderregionerna. Användning av sterila bomullspinnar, bomullstoppen den anteriora cervikala området med povidon-jod-lösning följt av en bomullstopp av 70% etanol i dubbeldestillerat vatten, omväxlande mellan varje lösning för fyra kompresser totalt.
- Lokalt infiltrera 0,25% bupivakain i den planerade snittet platsen. Med användning av ett stereoskop, gör en mittlinje 5 till 7 mm anterior cervikal incision för att exponera den gemensamma halsartären (CCA). Placera 2-4 upprullningsdon att hålla kaviteten öppna och artären exponeras.
- Lokalisera den inre halsartären (ICA), occipital artär (OA), och yttre halsartären (ECA). Brudgummen artärerna för att få en klar bild. Var bileful inte störa vagusnerven.
OBS: För skenopererade valpar är inicision lämnas öppen och artärerna exponeras, varefter snittet sys stängd. Den totala anestesitiden är likvärdig med ocklusion kirurgi. - Skära 1,5 cm av 6-0 silkes flätad sutur tråden. Unbraid suturen, dra ut enkelsträngar. Se till att de enskilda delarna är snyggt och inte sliten.
OBS: Om det är nödvändigt, jämna ut de slitna ändarna genom att doppa enda sträng i sterilt vatten och grooming strand med forcep tips. - Håll suturen strand med 45-graders pincett flyttar pincetten i en svepande båge rörelse för att gå under ICA så att forcep tips fram mellan ICA och OA.
OBS: Om dissektion är gjort bra, kommer detta steg att vara relativt lätt. Om ICA och OA vidrör, vara noga med att inte brista artärerna när du använder pincett för att isolera ICA. Om blödningen inträffar sätta press på artären med pincett tillsblödningen stoppar. Absorbera blodet med en steril bomullstopp. - Ta slutet av suturtråden som innehas av pincett och dra den så att slutet är lätt att komma åt. Frigöra strängen från tången och backa pincetten ut från under ICA, vända den rörelse i steg 1,5 (Figur 1A).
- Knyta en temporär ligatur runt ICA vid basen, närmast där det separerar från CCA.
OBS: Det är viktigt att knyta knuten så att änden av strängen som skall dras för att ta bort knuten är tillräckligt lång (större än 1 mm, mindre än 3 mm) för att enkelt gripa med pincett, och samtidigt säkerställa att det finns en lämplig mängd av suturtråd på andra sidan på knuten för indragning. - Försiktigt dra tillbaka ICA i sidled och använda en klämma för att fästa tråden till överflödig hud nära armhålan regionen på motsatt sida snittet. Se till att denna indrag sträng är spänd tillräckligt för att stoppa blodflödet innan du fortsätter till nästa steg, tillminimera risken för okontrollerad blödning. Observera att artären är platt och blek.
OBS! Inte över indragning, eftersom det kan orsaka en helt eller delvis riva av ICA. Indragnings kan justeras precis innan den arteriotomy genom att dra i strängen på motsatt sida till klippet. - Använda 45 ° pincett för att greppa en annan unbraided suturtråd och loop den under och runt ICA, såsom i steg 1,5. Positionen denna sträng lateralt till indragnings strängen (Figur 1B).
OBS: Detta steg kan också göras före indragning. Om du är osäker om kvaliteten på indragning, kan denna knut vara mycket löst bundna innan nästa steg. - Skär en 0,2 mm arteriotomi halvvägs mellan de bundna och obundna ligaturer, erring närmare den bundna ligaturen.
OBS: Blod som återstår i det bundna-off artär kan tömmas genom arteriotomin men bör inte överstiga 5 mikroliter. Om blödning kvarstår, dra försiktigt indragnings strand för att öka indragning, med omsorg för att envoid att skada artären från överdriven spänning. - Med användning av en metrisk linjal, mäta den ockluderande suturen och skär suturen med en extra ersättning på 2-3 mm för avlägsnande av tillslutningsanordningen under reperfusion. Håll tillslutning med 45-graders pincett och använda raka pincett för att skapa en krök vid lämplig längd för att nå MCA, markerar en rastplats för avancemang.
NOTERA: En 10 mm ocklusion längd från silikonspetsänden till bojen används för P10 Sprague Dawley eller Long Evans råttungar inom detta viktområde. - Med användning av 45 ° pincett, mata det silikonbelagda nylon ocklusion suturen in i arteriotomin och mata fram suturen till böjen som markerar förutbestämt avstånd till MCA (Figur 1C). Se till att framsteg känns smidig; omedelbart stoppa avancemang om motstånd känns. Under avancemang, sikta suturen i en riktning som är parallell med CC / ECA, mot huvudet.
OBS: Om suturen är avancerad dorsalt, motdjurets rygg, kan den gå in i pterygopalatine pulsådern (PTA). Om motstånd känns efter 3-5 mm av avancemang, har suturen drabbat PTA-övergången. Backa tillslutning av artären tills silikon huvudet är nära arteriotomy före justering avancemang riktning. Det är inte nödvändigt att helt ta bort tillslutningen från arteriotomy. - Säkra tillslutningsanordningen genom att knyta en temporär ligatur, med hjälp av strängen från steg 1,10 (figur 1D).
- Ta upprullningsdonet klippet. Trimma strängarna i båda de temporära ligaturer, så att strängen av knut som dras för att ta bort knuten är lätt att förstå med raka pincett och är längre än den sträng som dras för att dra åt knuten.
OBS: Trådarna måste vara tillräckligt kort, så att de inte trasslar i kaviteten efter förslutning. - Ta bort upprullningsdon och stäng kaviteten med hjälp av 6-0 flätat silke att skapa tre till fyra avbrutna suturer.
- Ta valpen frånanestesi och placera den på en värmedyna i rumsluften. Övervaka valpen tills den har återfått tillräckligt medvetandet för att upprätthålla sternala VILA och se till att den till fullo har återhämtat sig innan han återvände till dammen. Säkerställa att den pup bibehåller en kroppsyta temperatur mellan 35,5 ° C och 37 ° C.
- Under ocklusion, kan diffusion-viktade magnetresonansavbildning (DW-MRI) under isoflurananestesi användas för att verifiera den lämpliga induktion av skada. Figur 2 uppvisar en fortlöpande ischemisk skada detekteras av DW-MRI under tMCAO 9.
OBS: Diffusion vägda spinneko plan avbildning utförs 10-15 min före reperfusion. Hela hjärnan avbildas med seriella 2-mm-tjocka koronala sektioner med användning av följande pulssekvensinställningar: TR / TE = 5000/60 ms, 4 medelvärden, synfält = 35 mm, datamatris = 128x128, diffusionsgradient varaktighet = 20 ms, separations = 29,7 ms, amplitud = 70mT / m och b-faktor = 1,045 s / mm 2.Djur som uppvisar en brist på kortikal engagemang eller atypiska ischemisk skada, såsom i hjärnstammen, är undantagna.
2. Reperfusion
OBS: Ocklusion utförs under 3 timmar för att orsaka en måttlig till svår mängd skador som omfattar striatum och cortex.
- Vid approximativt 2 h och 50 min efter ocklusion av MCA, söva valp i 3% isofluran i 100% O2. Upprätthålla en kroppsyta temperatur mellan 35,5 ° C och 37 ° C med användning av en värmedyna under kirurgiska scenen.
- Avlägsna de avbrutna suturer från steg 1,16 och lokalisera korsningen, vilket markeras med de två ligaturer och den bakre änden av den ockluderande suturen.
OBS: Sham drivna djur induceras och förblir under narkos för motsvarande tidsperiod för att de inneslutna djuren. Snittet åter öppnas och sys stängd. För skenopererade djur, gå vidare till steg 2.11. - noggrant obundetden mest laterala knut tidigare bundet i steg 1,14 genom att dra längre strängen.
OBS: Om det finns motstånd i obundet knuten, stanna för att kontrollera att rätt sträng knut dras. Om motståndet fortsätter öka förstoringen för en bättre vy. Var försiktig när du obundet, eftersom det är möjligt att skada artären under detta steg. - Avlägsna suturtråden från kaviteten.
- Vid exakt tre timmar efter MCA ocklusion långsamt backa ockluderande suturen ur artären. Det blir inget motstånd.
OBS: I de flesta fall blir det ingen blödning. Om en liten mängd blödning inträffar utöva påtryckningar på artären vid arteriotomy stället. - Använd pincett för att utöva påtryckningar på arteriotomy, som nästa steg åter ICA blodflödet för reperfusion.
- Noggrant obundet den mediala knut med samma metod som i steg 2,3.
- Ta bort suturtråden från kroppen och tillämpa en blodstillande medel till arteriotomy att stoppa blödning. Se till att blödningen har slutat.
OBS: Return of the artären ursprungliga form och röd färg bekräftar att ICA blodflödet har återställts. - Ta bort upprullningsdon och stäng hålrummet med tre till fyra avbrutna suturer av 6-0 flätat silke.
- Ta valpen från anestesi och placera den på en värmedyna i rumsluften. Övervaka den tills den har återfått tillräckligt medvetandet för att upprätthålla sternala VILA och säkerställa full återhämtning innan han återvände till dammen. Säkerställa att den pup bibehåller en kroppsyta temperatur mellan 35,5 ° C och 37 ° C.
- Inspektera valparna dagligen under 5 dagar. Recprd deras vikter och inspektera snitt platser nära för lämplig healing. Ta suturerna efter 7-14 dagar. Post-tMCAO skada kan avbildas med MRI, om så önskas 9.
OBS: Djur kan förlora upp till 1 g vikt på den första dagen, men kommer vanligtvis återfå vikt utan ingripande och vara inom en liknande vägat intervall med kontroller av dagarna 4-5. I sällsynta fall kan en valp förlora alltför stor vikt eller har svårt utfodring kräver oral sondmatning flöden i 2-3 dagar. - Vid P21, kan skada på ett tillförlitligt sätt bedömas med sensomotoriska beteendetester, såsom rotarod eller cylinder uppfödning. Kognitiv testning kan utföras så tidigt som 4-6 veckors ålder med användning av bedömningar såsom nya objektigenkänning eller Morris vattenlabyrint 13.
- Euthanize råttorna genom intraperitoneal injektion av Euthasol (50 mg / kg) för hjärnans skörd 11, 12.
- Histologisk analys för att bedöma skada volym eller svar på ingrepp kan utföras med kresylviolett eller H & E-färgning (figur 3) 10.
Representative Results
Svårighetsgraden av skada orsakad av tMCAO är i hög grad beroende på både ocklusion tid och erfarenhet av kirurgen. En 90-min ocklusion ofta producerar en mild till måttlig skada mönster, medan 3 h ger en måttlig till allvarlig skada. Svårighetsgraden av skada kan bedömas genom en mängd olika metoder, inklusive MRI, histologi, eller kort- eller långsiktiga beteendeanalyser. Figur 2 visar ett exempel på DW-MRI utförs 75 min i en 90-min ocklusion, vilket bekräftar ischemisk skada som involverar den ipsilaterala hemisfären. Diffusion viktade avbildnings demonstrerar ökad diffusion i ipsilaterala striatum och majoriteten av den ipsilaterala cortex, utan kontralaterala förändringar, under den akuta ischemiska fasen. Detta korrelerar med en måttlig nivå av långsiktig skada som involverar både cortex och den djupa grå.
Ocklusion av MCA resulterar icelldöd som börjar i striatum för mindre allvarliga skador och utvecklar försämring kortikala och hippocampus skador under längre ocklusion tider och allvarligare skador. Under optimeringen av den kirurgiska teknik, såsom bestämning av suturen instickslängd, MRI rekommenderas starkt, eftersom det möjliggör bekräftelse av korrekt sutur placering och visualisering av ödem och skada progression under ocklusion 14, 15, 16. Om MRI inte är tillgänglig, H & E eller kresylviolett färgning är enkla och tillförlitliga histologiska metoder för att bestämma skada morfologi och kan användas vid både tidiga och sena tidpunkter efter tMCAO. Figur 3 visar en måttlig till svår skada mönster på histopatologisk undersökning efter en 3 h ocklusion, vilket visar cystbildning och volym i den ipsilaterala striatum och cortex.
10.
Även med mild skada, rörelse förändringar, såsom cirklande och hemipares, noteras under ocklusion period. Med mer allvarlig skada, kommer dessa förändringar kvarstår efter reperfusion. Ytterligare beteendetestning kan användas för att bedöma allvarligheten av skada, inklusive rotarod eller cylinder uppfödning testning för sensomotorisk funktion och Morris vattenlabyrint förkognitiv funktion 13.
Figur 1: Live Kirurgiska Bilder av tMCAO ordningen. (A) Den första suturtråd en ögla runt ICA, som beskrivs i steg 1,6. (B) Den första temporära ligaturen är bundna och ICA är indragen. Den andra suturtråd en ögla runt ICA, lateralt till den första suturen strängen, som beskrivs i steg 1,9. (C) Den silikonbelagda ocklusion sutur matas in i arteriotomin stället, såsom beskrivs i detalj i steg 1,12. (D) Den andra tillfälliga ligaturen är knuten för att fästa tillslutningsanordningen på plats, såsom beskrivs i detalj i steg 1,14. Scale bar = 1 mm.
Figur 2: MRI Under OCCLusion Demonstrerar den Lämplig Ensidiga skada. Anterior till posterior, koronala bild skivor av DW-MRI, som utförts under en 90 min ocklusion, visar ökad diffusion involverar den ipsilaterala hemisfären (pilar), vilket överensstämmer med pågående ischemisk skada i den akuta fasen. Återgivet med tillstånd från Stroke 11. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Ensidig Skada Involvera striatum och Cortex på 4 veckor efter tMCAO. Posteriort anterior, kresyl-violett-färgade koronala hjärnan sektioner (vardera 50 | im) skördas från P38 djur demonstrerar tämligen svåra skador (pilarna visar ipsilaterala cystbildning och reducerad kortikal ochstriatal volym) efter en 3 h tMCAO vid P10. Det runda hålet på vänster sida betecknar en kontralaterala hemisfären identifierare. Scale bar = 5 mm. Återgivet med tillstånd från Neurobiology of Disease 12. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Discussion
Kritiska steg inom det protokoll
För det första är det viktigt att upprätthålla normotermi från initieringen av anestesi tills fullständig återhämtning, eftersom det är kända effekterna av både hypotermi 17 och hypertermi 18 på utvecklingen av hjärnskada i både omogna och mogna djur. Sekund, medan säkring av djuret och tillbakadragning av snittet, optimal placering för att övervaka andning och för att säkerställa att luftstrupen är fritt från kompressions är viktigt. För det tredje, undviker att klämma eller sträcka vagusnerven, eftersom det kan orsaka förändringar i hjärtfrekvens med vagal stimulering. För det fjärde, eftersom indragning av ICA är nödvändigt för att kontrollera blödning under arteriotomy, uppmärksamhet måste ägnas till graden av spänning under indragning att undvika skador på artären. Om artären går sönder från indragning, eller om det är en dålig arteriotomy snitt, djuret bör uteslutas från analys på grund av riskenav blödning och dålig reperfusion.
Ändringar och felsökning
Med hjälp av MRI som en guide kan suturen längd optimeras för att säkerställa att silikonspetsen sluter ordentligt MCA för att skapa fokus ischemi. Om MRI inte är tillgängligt får valpar avlivas före reperfusion för dissekering att visualisera placeringen av suturen. Justera suturen längd som behövs. Valpen vikt korrelerar starkt med krav den ockluderande suturen längd. Ocklusion tid kan modifieras för att justera graden av skadornas svårighetsgrad.
Dessutom sutur form och längd är kritiska. För P10 Sprague-Dawley och Long Evans-råttor av hankön vägande 19-21 g, den 10 mm den optimala längden av insättning i vår erfarenhet. Ytterligare införing av ockluderande suturen kan resultera i perforering av MCA. Vidare kommer konsistensen i form av den ockluderande filamentet i varje operation resultera i en ökad konsistens av skada pattern 19, 20. Av denna anledning rekommenderar vi att du använder professionellt tillverkade suturer för detta specifika ändamål. Det är också viktigt att notera att skadan mönstret kan variera mellan utövare på grund av till synes små skillnader i teknik.
Begränsningar av tekniken
Utföra denna teknik i en liten, utveckla gnagare kräver betydande erfarenhet. Om det utförs på rätt sätt, är kirurgen kan orsaka en mycket konsekvent skada mönster över djur av olika storlekar och uppnå en överlevnadsgrad högre än 95%. Dessutom ordentliga kirurgiska verktyg är viktigt. Kirurgiska instrument måste vara väl underhållas för att säkerställa att alla instrument tips approximerar ordentligt.
Betydelsen av denna teknik med avseende på befintliga eller alternativa metoder
Medan hypoxi-ischemi eller Rice-Vannucci modell 2
Framtida tillämpningar efter att behärska denna teknik
Denna modell liknar den vanligaste orsaken till stroke i humana nyfödda, ett transient ocklusiv tromb som sker under den perinatala perioden 11, 21. Etiologin är inte helt klar och är troligen multifaktoriell, men det förutsätts i de flesta fall to resultera från emboli som passerar från moderkakan 11. Dessutom har många nyfödda med förmodade perinatal stroke ofta närvarande med senare anfallsaktivitet eller subtil fokal neurologisk undersökning Avvikelser 22. Detta gör användningen av en konsekvent, translationell skada modell för att identifiera mekanismer för skador progression och möjliga terapeutiska strategier avgörande.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Isoflourane | Henry Schein | 50033 | anesthetic, at 3% |
| Trinocular Surgioscope | World Precision Instruments | PSMT5N | |
| Heating pad | Sunbeam | 000731-500-000 | low to medium setting |
| IR Thermometer | Extech Instruments | 72-5270 | |
| Retraction kit for small animals | Fine Science Tools | 18200-20 | |
| CermaCut Scissors | Fine Science Tools | 14958-09 | |
| Dumont #5SF Forceps | Fine Science Tools | 112522-00 | 2x |
| Dumont #5/45 Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | 2x |
| B-2 Micro Clamp | Fine Science Tools | 00398-02 | |
| Forcepts for Clamp Application | Fine Science Tools | 00072-14 | |
| Micro Vannas Scissors | Fine Science Tools | 15000-03 | 2mm cutting edge |
| Occlusion Sutures | Doccol | 602123PK10 | 701712PK5Re |
| Ruler | Fine Science Tools | ||
| Hemostatic Agent | Avitene | DVL1010590 | |
| 6-0 Perma-Hand Silk Reverse CuttingSuture | Ethicon | 769G | |
| Euthasol | Virbac | 710101 | 0.22 mL/kg |
| Cotton Tipped Applicators | Henry Schein | 100-9249 | |
| Laboratory Tape | VWR | 89097-990 |
References
- Grunt, S., et al. Incidence and outcomes of symptomatic neonatal arterial ischemic stroke. Pediatrics. 135 (5), 1220-1228 (2015).
- Rice, J. E., Vannucci 3rd, R. C., Brierley, J. B. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat. Ann Neurol. 9 (2), 131-141 (1981).
- Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. I: a new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8 (8), (1986).
- Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
- Labat-gest, V., Tomasi, S. Photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies. J Vis Exp. (76), (2013).
- Renolleau, S., Aggoun-Zouaoui, D., Ben-Ari, Y., Charriaut-Marlangue, C. A model of transient unilateral focal ischemia with reperfusion in the P7 neonatal rat: morphological changes indicative of apoptosis. Stroke. 29 (7), 1454-1460 (1998).
- Perlman, J. M. Intervention strategies for neonatal hypoxic-ischemic cerebral injury. Clin Ther. 28 (9), 1353-1365 (2006).
- Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. Neonatal reversible focal cerebral ischemia: a new model. Neurosci Res. 32 (4), 349-353 (1998).
- Gonzalez, F. F., et al. Erythropoietin increases neurogenesis and oligodendrogliosis of subventricular zone precursor cells after neonatal stroke. Stroke. 44 (3), 753-758 (2013).
- Larpthaveesarp, A., Georgevits, M., Ferriero, D. M., Gonzalez, F. F. Delayed erythropoietin therapy improves histological and behavioral outcomes after transient neonatal stroke. Neurobiol Dis. , (2016).
- Rutherford, M. A., Ramenghi, L. A., Cowan, F. M. Neonatal stroke. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 97 (5), 377-384 (2012).
- van der Aa, N. E., Benders, M. J., Groenendaal, F., de Vries, L. S. Neonatal stroke: a review of the current evidence on epidemiology, pathogenesis, diagnostics and therapeutic options. Acta Paediatr. 103 (4), 356-364 (2014).
- Gonzalez, F. F., et al. Erythropoietin sustains cognitive function and brain volume after neonatal stroke. Dev Neurosci. 31 (5), 403-411 (2009).
- Dudink, J., et al. Evolution of unilateral perinatal arterial ischemic stroke on conventional and diffusion-weighted MR imaging. AJNR Am J Neuroradiol. 30 (5), 998-1004 (2009).
- Derugin, N., et al. Magnetic resonance imaging as a surrogate measure for histological sub-chronic endpoint in a neonatal rat stroke model. Brain Res. 1066 (1-2), 46-56 (2005).
- Dzietko, M., Wendland, M., Derugin, N., Ferriero, D. M., Vexler, Z. S. Magnetic resonance imaging (MRI) as a translational tool for the study of neonatal stroke. J Child Neurol. 26 (9), 1145-1153 (2011).
- Mancuso, A., Derugin, N., Hara, K., Sharp, F. R., Weinstein, P. R. Mild hypothermia decreases the incidence of transient ADC reduction detected with diffusion MRI and expression of c-fos and hsp70 mRNA during acute focal ischemia in rats. Brain Res. 887 (1), 34-45 (2000).
- Kasdorf, E., Hyperthermia Perlman, J. M. Inflammation, and Perinatal Brain Injury. Pediatric Neurology. 49 (1), 8-14 (2013).
- Bouley, J., Fisher, M., Henninger, N. Comparison between coated vs. uncoated suture middle cerebral artery occlusion in the rat as assessed by perfusion/diffusion weighted imaging. Neurosci Lett. 412 (3), 185-190 (2007).
- Shimamura, N., Matchett, G., Tsubokawa, T., Ohkuma, H., Zhang, J. Comparison of silicon-coated nylon suture to plain nylon suture in the rat middle cerebral artery occlusion model. J Neurosci Methods. 156 (1-2), 161-165 (2006).
- Kirton, A., deVeber, G. Paediatric stroke: pressing issues and promising directions. Lancet Neurol. 14 (1), 92-102 (2015).
- Nelson, K. B. Perinatal ischemic stroke. Stroke. 38, 742-745 (2007).
