Introduction
99m Tc fortfarande den dominerande radioisotoper som används inom diagnostisk nukleärmedicin, med över 50 miljoner avbildningsförfaranden som sker per år i hela världen en, två, tre. Majoriteten av 99m Tc medel som används kliniskt är perfusion typ radioaktiva läkemedel. Det finns ett begränsat antal aktivt målinriktade föreningar i vilka 99mTc är riktad för att binda en specifik biomarkör genom ligering till en målkonstruktion. Skapandet av riktade 99mTc radiofarmaka ofta hindras av inverkan av 99m Tc-ligandkomplex på förmågan hos målmolekylen att binda biomarkör av intresse, eller isotop halveringstid är inte tillräckligt lång för att användas med högre molekylvikt biomolekyler såsom antikroppar. Det senare kräver vanligen flera dagar innan bilder förvärvas för att biomolekylen att rensa från icke-mål tiss deringar. Pre-målinriktning erbjuder en alternativ metod för att övervinna dessa utmaningar.
Pre-inriktning i kombination med bioorthogonal kemi har visat sig vara ett effektivt sätt att utveckla nya molekylära avbildningssonder för både fluorescens och radio avbildning 4, 5, 6, 7, 8. Den inversa efterfrågan elektron Diels-Alder (IEDDA) reaktion mellan 1,2,4,5-tetrazin (Tz) och trans -cyclooctene (TCO) derivat, såsom visas i figur 1, har visat sig vara särskilt effektivt 6. Den IEDDA reaktion med dessa komponenter kan uppvisa snabb kinetik i PBS (k 2 ≈ 6000 M -1 s -1) och hög selektivitet, vilket gör den idealisk för in vivo pre-inriktade program 9, 10.
e_content "> Den vanligaste metod som används innebär att administrera en TCO-härledda målsökningsvektom och efter en tillräcklig fördröjningsperiod, är en radiomärkt tetrazin administreras. Radiomärkta tetrazines baserat på 11 C, 18 F, 64 Cu, 89 Zr, och 111 i har varit rapporterade 11, 12, 13, 14, 15. däremot finns det endast en rapport av en 99m Tc-märkta Tz, som framställdes med hjälp av en HYNIC ligand kräver användning av co-ligander för att förhindra proteinbindning och nedbrytning in vivo 16. som ett alternativ, rapporterar vi här syntesen av 99m Tc (i) märkt tetrazines med användning av en familj av ligander som bildar stabila tretandade komplex med en [99m Tc (CO) 3] ^ kärna.Figur 1: bioorthogonal IEDDA reaktion mellan tetrazin och trans -cyclooctene. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Familjen av ligander framställda innehålla tretandade kelater som varierar i polaritet och arten av länkgruppen mellan metallbindande regionen och den Tz (Figur 2). Målet var att identifiera en 99m Tc-tetrazin konstruera som effektivt kan lokalisera och reagera med TCO-märkta ställen in vivo och snabbt klart inte är förenade i syfte att ge hög mål till icke-mål-förhållanden. För att testa ligander, var en TCO-derivat av en bisfosfonat (TCO-BP) används 17. Vi har visat tidigare att TCO-BP lokaliserar till områden med aktiv benmetabolism och kan reagera medradiomärkta tetrazines in vivo 18. Det är en bekväm reagens för att testa nya tetrazines, eftersom det kan framställas i ett enda steg och experiment kan utföras i normala möss, där lokaliseringen inträffar primärt i lederna (knän och axlar).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djurstudier har godkänts av Animal forskningsetik styrelsen vid McMaster University i enlighet med kanadensiska rådet om Animal Care (CCAC) riktlinjer.
1. Radiomärkning av Tz-tretandade ligander med 99m Tc
VARNING: Följande procedurer kräver användning av radioaktiva föreningar. Arbetet bör endast ske i en licensierad laboratorium med anslutning till säkerhet och bortskaffande regler. Mikrovågsugn reaktioner bör utföras i en mikrovågsugn är särskilt utformad för kemisk syntes.
- Syntes av [99mTc (CO) 3 (H2O) 3] + 19, 20
- I en mikrovågsugn ampull, kombinera 8 mg K 2 [BH 3 CO 2], 15 mg Na 2 CO 3, 20 mg Na 2 B 4 O 7 · 10H 2 O, och 25 mg KOCO [CH (OH)]2 COONa · 4H 2 O. Purge flaskan under 10 minuter med argongas.
- Tillsätt 4 ml 99m TcO 4 - (~ 1100 MBq, ~ 30 mCi) i 0,9% koksaltlösning till flaskan.
- Värm reaktionsblandningen i en mikrovågsugn i 3,5 min vid 110 ° C efter 10 s av omrörning för att säkerställa grundlig blandning av reagenserna.
- Justera pH i lösningen till 3,5 till 4 med användning av ~ 400 mikroliter av 1 M HCl. Kontrollera med hjälp av pH-papper.
- Radiomärkning av tetrazin ligander 1-5
- Lös 2 mg av varje ligand (föreningar 1-5) i 250 mikroliter MeOH 21.
- Tillsätt 250 mikroliter av [99m Tc (CO) 3 (H2O) 3] + (~ 74 MBq, ~ 2 mCi) till varje lösning.
- Upphetta reaktionsblandningen med hjälp av en mikrovågsugn under 20 min vid 60 ° C.
OBS: Detta steg var identisk för alla 5 tetrazines. - För föreningar 2- 5, indunsta lösningsmedlet och åter dissolve de erhållna produkterna i 1 ml 1: 1 volym / volym DCM: TFA.
- Värm de upplösta reaktionsprodukter (2-5) vid 60 ° C i en mikrovågsugn under 6 min (2-4) eller 10 min (5).
- Efter kylning till rumstemperatur, indunsta lösningsmedlet med hjälp av en förångare (36 ° C, 8 mbar, 3 min, 6000 rpm) och upplösa den torkade föreningen i 1: 1 ACN: H2O eller 1: 1 MeOH: H2O, före HPLC rening.
- Rena de 99m Tc-märkta föreningar (1-5), inklusive separering av den märkta produkten från omärkt tetrazin ligand, med användning av HPLC (C 18 omvänd fas). Typiskt använda en elueringsgradient av 30:70 ACN: H2O (båda med 0,1% TFA) till 40:60 ACN: H2O över 20 min (18 min) och en C 18 analytisk 4,6 x 100 mm kolonn. Använd både UV (254 nm) och gamma upptäckt.
- Ta ett litet urval av varje märkt produkt och jämföra dess HPLC-retentionstid med den för en co-injected, icke-radioaktiv, Re-märkt standard (0,125 mg i 20% metanol-H2O). Re-märkt standard identifieras i UV HPLC-spår, och kommer att elueras vid samma tidpunkt som den 99m Tc-märkt förening i γ-HPLC-spår. Detta samtidig injektion visar toppar vid jämförbara retentionstider, vilket bekräftar identiteten på den 99m Tc-märkta föreningen.
- Indunsta lösningsmedlet från HPLC-fraktioner med användning av en evaporator (36 ° C, 8 mbar, 3 min, 6000 rpm).
- Formulera den renade föreningen i en koncentration av 7,4 kBq / mikroliter i PBS, innehållande 0,5% BSA och 0,01% Tween-80.
- För att säkerställa de märkta föreningarna är stabila, utföra en in vitro stabilitetsstudie. Inkubera den formulerade föreningen vid 37 ° C under 1, 4 och 6 h, injicera en liten mängd (3,7 MBq) av blandningen på HPLC vid varje tidpunkt för att bedöma stabiliteten.
2. Pre-riktade Bio-distributionsstudier
- Med användning av 7-9 veckor gamla, Balb / c-möss (n = 3), administrera TCO-BP formuleras i saltlösning (20 mg / kg) (5 pg / pL), via svan-ven injektion.
- Placera musen i fysisk kvarhållande anordning, och identifiera venerna belägna på sidoytor svansen och torka med en spritsudd. Vid approximativt 2 cm från änden av svansen, sätt i en 30-gauge nål i en grund vinkel, parallellt med venen. Tryck långsamt in kolven för att injicera, avlägsna nålen och tillämpa ren kompress svamp vid injektionsstället med lätt tryck tills det slutar att blöda.
- Vid en h efter injektion av TCO-BP, administrera ~ 0,74 MBq (20 | iCi) av 99m Tc-tetrazin som formulerats i 100 | il av 0,5% BSA, 0,01% Tween-80 i PBS, via svan-ven injektion.
- Studier bio-distributions
- Vid den önskade tidpunkten (t = 6 h), söva mössen med användning av 3% isofluran och 2% syre gasblandning. Visa en tille nypa uttag på sövd musen för att säkerställa att de är i enlighet med kirurgisk plan av anestesi.
- Samla blod (1 ml) via hjärtpunktion med användning av en spruta som förbehandlats med heparin. Placera musen på rygg med nosen i noskonen för fortsatt anestesi och lokalisera xiphoid processen på djuret.
- Sätt en 25 G nål, något till vänster om djurets mittlinje under xiphoid processen, vid en 20 ° vinkel. För in nålen, och långsamt dra tillbaka kolven för att se blod i nålnavet om hjärtat punkterades. Något justera nålen samtidigt som du håller kolven vid behov, att punktera hjärtat. Långsamt dra blod in i sprutan.
- Avliva djuret genom cervikal dislokation, medan under anestesi.
- Placera varje djur i en plastpåse och använda en doskalibrator (99mTc inställning) för att mäta hela kroppen aktivitetsnivå.
- Samla följande vävnader och vätskor i pre-vägaed räknar rör: blod, ben (knä och axlar), gallblåsa, njurar, lever, mage (med innehåll), tunntarmen (med innehåll), tjocktarm och caecum (med innehåll), sköldkörtel och luftstrupe, urinblåsa med urin och svans.
- Skölj lämpliga vävnader (utom blod, gallblåsa och urinblåsan) hos PBS för att avlägsna blod och torka innan du placerar vävnaderna i lämpliga räkna rör.
- Placera djurkropp i en plastpåse och mäta återstående hela kroppen aktivitet med hjälp av en doskalibrator.
- Väg varje rör innehållande ett vävnadsprov. Subtrahera begynnelsevikt av röret för att erhålla massan av vävnaden.
- Använda en doskalibrator (99mTc inställning) för att mäta mängden av aktivitet i ett testprov (100 | il) vid tidpunkten för injektion för varje mus.
OBS: Detta testprov är lika med injektionsvolym, vilket ger aktivitetsräkning vid tidpunkten för injektion. - Vid tidpunkten för vävnads mätning, enliquot 5 mikroliter av provet används tidigare test. Använda en multi-detektor gammaräknare (99mTc inställning) och räkna för att erhålla den talet per minut (CPM) för testprovet 5 mikroliter.
- Använd de båda värdena i 2.2.9 och 2.2.10 för att beräkna aktivitet och CPM relation med ekvation 1 för att erhålla en omvandlingsfaktor (CPM pCi -1).
(1)
- Använda gammaräknare för att mäta mängden radioaktivitet i varje vävnad eller vätskeprov.
- Använd ekvation 1 för att beräkna mängden aktivitet i varje vävnad eller vätska vid mättillfället förhållande till den totala injicerade dosen. Detta värde används sedan normaliseras genom organvikt och rapporteras som procent injicerad dos per gram (dvs.,% ID / g) av vävnad.
- Följ stegen 2.1.2 till 2.2.13 för att genomföra en negativ kontrollexperiment med hjälp av 99m Tc-märkt tetrazin ligander i absence av TCO-BP. Offer möss (n = 3) vid 0,5, 1, 4 och 6 h efter injektion och erhålla vävnad eller vätska såsom beskrivits ovan.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ligandema syntetiserades med olika linkers och kelatorer via en enkel reducerande aminering strategi (Figur 2), följt av koppling av produkten till en kommersiellt tillgänglig tetrazin 22, 23. Radiomärkning utfördes med användning av samma metod för alla föreningar och var mycket reproducerbar. Processen optimerades genom att variera pH, mängden ligand, reaktionstid och temperatur, varefter den 99m Tc-radiomärkt föreningarna 1-5 erhölls i måttlig till hög radiokemiska utbytet: 83% (1), 45% (2), 31% (3), 42% (4), och 54% (5). Följande HPLC-rening från oreagerat ligand och indunstning med användning av en indunstare, erhölls föreningarna formuleras i PBS innehållande 0,5% BSA och 0,01% Tween 80 före injektion. Den specifika aktiviteten hos den p urified 99m Tc-märkta tetrazin var ~ 1,48 MBq / pg. Studier genomfördes för att utvärdera stabiliteten hos 99m Tc-märkta tetrazin ligander före in vivo-studier. Stabiliteten övervakades genom HPLC vid 1, 4 och 6 h utan synlig nedbrytning över 6 h (Rt = 14 min), såsom framgår av fig 3 för förening 4 som ett exempel.
Figur 2: Föreningarna 1-5 framställdes med olika länkar (Y) och kelatorer (X) som visas (botten). Alla föreningar radioaktivt med [99mTc (CO) 3 (H2O) 3] + med användning av samma reaktionsbetingelser (överst), med undantag av ett, som inte krävde steg (ii).
"Figur 3" src = "/ filer / ftp_upload / 55188 / 55188fig3.jpg" />
Figur 3: Stabilitet testresultat med användning av förening 4. γ-HPLC-spår av 4 inkuberade i PBS vid 37 ° C under 1, 4 och 6 h.
För testningen in vivo, var friska Balb / c-möss användes. I korthet, för varje förening, grupper av möss (n = 3) injicerades med TCO-BP (100 | il, 20 mg / kg), vilket följdes av administrering av de 99m Tc-märkta föreningar 1 h senare. Vid 6 timmar efter injektion av de 99m Tc-komplex, avlivades djuren och de aktivitetskoncentrationer i olika vävnader och vätskor bestämmas. Resulterande data rapporteras som procent injicerad dos per gram vävnad (% ID / g) och visas i figur 4. Representativa förhållanden av ben (knä eller axel) till blod för var och en av de fem 99m Tc-märkta Tz föreningar visas i tabell 1. Dessa data indikerar cltidigt att förening 3 förutsatt optimal inriktning i kombination med godkännande från blod, och att det fanns betydande variation bland 99m Tc-märkta föreningar i fråga om off-target vävnadslokalisering. En negativ kontrollstudie med hjälp av CD 1-möss (n = 3) genomfördes, där möss injicerades med 99m Tc-tetrazin ligander i frånvaro av TCO-BP. Möss avlivades vid 0,5, 1, 4 och 6 h och% ID / g bestämdes för alla vävnader och vätskor. För alla testade föreningar, där data för förening 2 är som presenteras i Figur 5, var ingen signifikant upptag ses i ben eller andra vävnader (hjärta, lungor, mjälte, skelettmuskel) som inte visas i figur 4.
Figur 4. Bio-distributions resultat 99m Tc-märkta tetrazin derivat 1-5 (barer indicated). Visade data erhölls från utvalda vävnader och vätskor tas 6 timmar efter injektion av de radiomärkta derivat, och aktivitet normaliserades till vävnad eller vätska i vikt, som medelvärde procent injicerad dos per gram vävnad eller vätska (% ID / g) ± SEM. Bone mål indikeras med •. OBS: Alla återstående vävnader inte visas hade medel% ID / g som var mindre än 1%. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. Bio-distributions resultat kontrollstudie med hjälp av 99m Tc-märkta tetrazin (2) utan föregående injektion av TCO-BP. Visade data erhölls från utvalda vävnader och vätskor som tagits från 3 möss vid 0,5, 1, 4, och 6 h efter injektion av 2. Aktivitet normaliserades till vävnad ellervätskevikt, som medelvärde procent injicerad dos per gram vävnad eller vätska (% ID / g) ± SEM. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Förening | |||||
| Förhållande | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Skuldra: Blood | 3,5: 1 | 3,5: 1 | 21: 1 | 7,8: 1 | 0,8: 1 |
| Knä: Blood | 6,9: 1 | 5,6: 1 | 26: 1 | 12: 1 | 1,3: 1 |
Tabell 1. benvävnad: blodförhållanden bestäms från studier bio-distribution.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
En samling av tetrazin bunden tretandade kelat av varierande polariteter framställdes och nyttan av sina 99m Tc-komplex i IEDDA reaktion med en TCO-derivat in vivo bedömdes. En effektiv och reproducerbar 99m Tc märkningsmetod har utvecklats för fem tetrazin-kelat, där ligandkoncentrationen var 10 -3 M. steg märkning följdes av avlägsnande av T- butylgrupper (för föreningarna 2-5). Den höga koncentrationen av ligand användes för att förbättra den radiokemiska utbytet och reducera reaktionstider som minimerade nedbrytning av tetrazin 21. Produkten isolerades och separerades från omärkt ligand och eventuella radiokemiska föroreningar med hjälp av HPLC, vilket resulterar i radiokemiska utbyten som sträcker sig från 31 till 83%, med alla har> 99% radiokemisk renhet och en hög specifik aktivitet av ~ 1,48 MBq / pg. Alla föreningar visat sig vara stabil i PBS innehållande 0.5% BSA och 0,01% Tween 80 för upp till 6 timmar (Figur 3).
Bisfosfonatföreningar, som TCO-BP, lokalisera regioner av aktiv benmetabolism eller skada, som omfattar knä- och axelleder i möss. TCO-BP ger därför en enkel sätt att bedöma effektiviteten av nya radiomärkta tetrazines att leverera isotoper in vivo. Utvärdering av den biologiska distributionen av alla fem 99m Tc-tetrazines visade upptag i knä- och axellederna sex timmar efter injektion, vilket visar framgångsrik pre-targeting till ben in vivo (Figur 4). Tidigare studier har bekräftat att radiomärkt TCO-BP ackumuleras på benet 18, medan 99m Tc-tetrazin konstruktion (2) ges ensamt inte (Figur 5). Detta gör att man kan dra slutsatsen att benupptaget berodde på IEDDA reaktionen.
Av de mera lipofila konstruktionerna 1 och 2 (1); 7,6 ± 2,7 (2)) och ansatsen (4,6 ± 1,4 (1); 4,8 ± 1,9 (2)). Hög radioaktivitetskoncentrationer sågs också i gallblåsan, levern och tarmarna, vilket överensstämmer med fördelningen av den lipofila 99m Tc-tetrazin förening 2 i frånvaro av TCO-BP (fig 5). Andra icke-målvävnader och organ såsom skelettmuskel och mjälte visade inte någon signifikant upptag (<1%) när studier bio-distributions utfördes på 99m Tc-tetrazines i frånvaro av TCO-BP (Figur 5) , så dessa organ togs inte för pre-targeting experiment. Dessutom, bio-distributionsexperiment med 99m Tc-tetrazines enbart visade bra avslut från icke-målvävnader på 6 timmar efter injektion. Följaktligen this tidpunkt, som ligger inom en halveringstid av isotopen, valdes som tidpunkt för att jämföra de olika radiomärkta tetrazin ligander.
Den mer polära 99m Tc-tetrazin förening 3 som bär en PEG 5 länk visade mycket hög knä och axlar upptag (16,2 ± 4,8 och 20,7 ± 4,9 respektive). Det fanns också lägre aktivitet observerades i levern och tarmarna. Motsvarande PEG 10-derivat visade också binda till benet och reducerat upptag i levern jämfört med föreningarna 1 och 2. Den mest polära derivat 5 visade lägre ben bindning än alla andra konstruktioner som är sannolikt på grund av dess snabba clearance.
Den höga ben upptag och bone: blod-förhållanden (Tabell 1) i synnerhet för föreningarna 3 och 4 visar att pre-målinriktning och den IEDDA reaktionen kan användas för att localize 99m Tc-märkta föreningar in vivo. De metoder som rapporteras här kan användas för att utvärdera eventuell radiomärkt tetrazin inklusive nästa generation av Tc (I) -tetrazine ligander. Det bör noteras att för den klass av ligander som användes i denna studie, de strukturer kan lätt varieras genom att ändra karaktären på donatorgrupper och linkers mellan metallkomplexet och tetrazin, utan någon väsentlig ändring liganden syntesmetoden 21. När en ledande molekyl identifieras, en omedelbar kit metod, vilket sannolikt kommer att innefatta fastfasmetoder renings, kan utvecklas för att stödja den kliniska översättning.
TC (I) komplex som redovisas här skapar möjlighet att förbereda nya 99m Tc radioaktiva läkemedel med hjälp av ett brett spektrum av olika TCO-derived målsökande molekyler inklusive antikroppar. Antikroppar, trots deras utmärkta inriktningsegenskaper före skapandet av teknetium märkta tetrazines, skulle inte typically användas med 99mTc på grund av deras långsamma clearance (dagar), vilket är mycket längre än halveringstiden för isotopen (~ 6 h). En ytterligare tillämpning av kemin rapporteras här är att samma klass av ligander kan framställas med beta emitterande radionuklider 186 Re och 188 Re. De isostrukturell Re (I) analoger av Tc (I) medel när de kombineras med tumörsökande egenskaper TCO-BP kan användas för att behandla skelettmetastaser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Argon gas | Alphagaz | --- | --- |
| Na2CO3 | EMD Millipore | 106395 | --- |
| Na2B4O7·10H2O | Anachemia | S9640 | --- |
| KNaC4H4O6·4H2O | Anachemia | 217255 | --- |
| Technelite 99mTc generator | Lantheus medical imaging | --- | Source of 99mTcO4- |
| 0.9% Saline | Lantheus medical imaging | --- | To elute generator |
| 1 M HCl | Lab Chem | --- | --- |
| MeOH | Caledon | --- | --- |
| ACN | Caledon | --- | HPLC grade |
| Millipore H2O | Thermo Fisher Scientific | Barnstead Nanopure | --- |
| DCM | Caledon | --- | --- |
| TFA | Caledon | --- | --- |
| PBS | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | pH 7.4 1x |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | --- |
| Tween80 | Sigma Aldrich | P8047 | --- |
| Isoflurane | CDMV | 108737 | Supplier: Fresenius Kabi Animal Health |
| HPLC | Waters | 1525 Binary Pump, 2998 Photodiodde Array Detector, E-SAT/IN, Bioscan Flowcount PMT detector (item # 15590) | --- |
| HPLC column for analysis and purification of compounds 2-4 | Phenomenex | 00G-4435-E0 | Gemini® 5 µm C18 110 Å, LC Column 250 x 4.6 mm |
| HPLC column for analysis and purification of compounds 1 and 5 | Waters | 186003115 | XBridge BEH C18 Column, 130 Å, 5 µm, 4.6 mm x 100 mm |
| Microwave Reactor | Biotage | Initiator 8 | --- |
| Biotage V10 Evaporator | Biotage | Serial # V1041 | --- |
| Dose calibrator | Capintec, Inc. | CRC-25R | --- |
| Gamma counter | Perkin Elmer | Wizard 1470 Automatic Gamma Counter | --- |
| Animal room scale | Mettler Toledo | XP105 Delta Range | --- |
| Microwave vials | Biotage | 355629 | 0.5-2 mL |
References
- Jurisson, S. S., Lydon, J. D. Potential Technetium Small Molecule Radiopharmaceuticals. Chem. Rev. 99 (9), 2205-2218 (1999).
- Kluba, C. A., Mindt, T. L. Click-to-chelate: Development of Technetium and Rhenium-Tricarbonyl Labeled Radiopharmaceuticals. Molecules. 18, 3206-3226 (2013).
- Amato, I. Nuclear Medicines Conundrum. Chem. Eng. News. 87 (36), 58-70 (2009).
- Hnatowich, D. J., Virzi, F., Rusckowski, M. Investigations of Avidin and Biotin for Imaging Applications. J. Nucl. Med. 28 (8), 1294-1302 (1987).
- Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. Tetrazine Ligation: Fast Bioconjugation Based on Inverse-Electron-Demand Diels-Alder Reactivity. J. Am. Chem. Soc. 130 (41), 13518-13519 (2008).
- Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. Tetrazine-Based Cycloadditions: Application to Pretargeted Live Cell Imaging. Bioconjugate Chem. 19 (12), 2297-2299 (2008).
- Rossin, R., et al. In Vivo Chemistry for Pretargeted Tumor Imaging in Live Mice. Angew. Chem., Int. Ed. 49 (19), 3375-3378 (2010).
- Zeglis, B. M., et al. Optimization of a Pretargeted Strategy for the PET Imaging of Colorectal Carcinoma via the Modulation of Radioligand Pharmacokinetics. Mol. Pharmaceutics. 12 (10), 3575-3587 (2015).
- Rossin, R., et al. Highly Reactive trans-Cyclooctene Tags with Improved Stability for Diels-Alder Chemistry in Living Systems. Bioconjugate Chem. 24 (7), 1210-1217 (2013).
- Rossin, R., Robillard, M. S. Pretargeted Imaging Using Bioorthogonal Chemistry in Mice. Curr. Opin. Chem. Biol. 21, 161-169 (2014).
- Denk, C., et al. Development of a 18F-Labeled Tetrazine with Favorable Pharmacokinetics for Bioorthogonal PET Imaging. Angew. Chem., Int. Ed. 53 (36), 9655-9659 (2014).
- Herth, M. M., Andersen, V. L., Lehel, S., Madsen, J., Knudsen, G. M., Kristensen, J. L. Development of a 11C-labeled Tetrazine for Rapid Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation. Chem. Commun. 49 (36), 3805-3807 (2013).
- Li, Z., et al. Tetrazine-Trans-Cyclooctene Ligation for the Rapid Construction of 18F Labeled Probes. Chem. Commun. 46 (42), 8043 (2010).
- Nichols, B., Qin, Z., Yang, J., Vera, D. R., Devaraj, N. K. 68Ga Chelating Bioorthogonal Tetrazine Polymers for the Multistep Labeling of Cancer Biomarkers. Chem. Commun. 50 (40), 5215-5217 (2014).
- Zeglis, B. M., et al. A Pretargeted PET Imaging Strategy Based on Bioorthogonal Diels-Alder Click Chemistry. J. Nucl. Med. 54 (8), 1389-1396 (2013).
- García, M. F., et al. 99mTc-Bioorthogonal Click Chemistry Reagent for In Vivo Pretargeted Imaging. Bioorg. Med. Chem. 24 (6), 1209-1215 (2016).
- Russell, R. G. G. Bisphosphonates: The First 40 Years. Bone. 49 (1), 2-19 (2011).
- Yazdani, A., et al. A Bone-Seeking Trans-Cyclooctene for Pretargeting and Bioorthogonal Chemistry: A Proof of Concept Study Using 99mTc and 177Lu-Labeled Tetrazines. J. Med. Chem. , (2016).
- Alberto, R., et al. A Novel Organometallic Aqua Complex of Technetium for the Labeling of Biomolecules: Synthesis of [99mTc(OH2)3(CO)3]+ from [99mTcO4]- in Aqueous Solution and its Reaction with a Bifunctional Ligand. J. Am. Chem. Soc. 120 (31), 7987-7988 (1998).
- Alberto, R., Ortner, K., Wheatley, N., Schibli, R., Schubiger, A. P. Synthesis and properties of boranocarbonate: A convenient in situ CO source for the aqueous preparation of [99mTc(OH2)3(CO)3. J. Am. Chem. Soc. 123 (13), 3135-3136 (2001).
- Lu, G., et al. Synthesis and SAR of 99mTc/Re-labeled Small Molecule Prostate Specific Membrane Antigen Inhibitors with Novel Polar Chelates. Bioorg. Med. Chem. Lett. 23 (5), 1557-1563 (2013).
- Maresca, K. P., et al. Small Molecule Inhibitors of PSMA Incorporating Technetium-99m for Imaging Prostate Cancer: Effects of Chelate Design on Pharmacokinetics. Inorg. Chim. Acta. 389, 168-175 (2012).
- Bartholomä, M. D., et al. Insight into the Mode of Action of Re(CO)3 Thymidine Complexes. ChemMedChem. 5 (9), 1513-1529 (2010).
