Grand Dauphin (Tursiops truncatus) spermatozoïdes : Collection, cryoconservation et la fécondation In Vitro hétérologue

María Jesús Sánchez-Calabuig; Francisco Alberto García-Vázquez; Ricardo Laguna-Barraza; Carlos Barros-García; Daniel García-Parraga; Dimitrios Rizos; Alfonso Gutiérrez Adan; José Félix Pérez-Gutíerrez

doi:10.3791/55237

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Article de méthode

Grand Dauphin (Tursiops truncatus) spermatozoïdes : Collection, cryoconservation et la fécondation In Vitro hétérologue

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DOI :

10.3791/55237

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21 août 2017

María Jesús Sánchez-Calabuig¹^,² , Francisco Alberto García-Vázquez³ , Ricardo Laguna-Barraza¹ , Carlos Barros-García⁴ , Daniel García-Parraga⁵ , Dimitrios Rizos¹ , Alfonso Gutiérrez Adan¹ , José Félix Pérez-Gutíerrez²

¹Department of Animal Reproduction, Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria (INIA), ²Department of Animal Medicine and Surgery, School of Veterinary Medicine, Universidad Complutense de Madrid, ³Department of Physiology, Faculty of Veterinary Science, University of Murcia, Campus Mare Nostrum, ⁴Mundomar, Benidorm, ⁵Veterinary Services, L'Oceanográfic, Ciudad de las Artes y las Ciencias, Junta de Murs i Vals, s/n, 46013

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici les protocoles qui ont été utilisées avec succès pour la collection de spermatozoïdes de Dauphin, cryoconservation et les performances FIV hétérologue ovocytes bovines.

Résumé

L’utilisation de spermatozoïdes cryoconservés Dauphin facilite l’échange de matériel génétique entre les parcs aquatiques et rend les spermatozoïdes accessible aux laboratoires d’études afin d’améliorer nos connaissances de la reproduction des mammifères marins. FIV hétérologue, un remplacement pour une FIV homologue, pourrait fournir un moyen de tester la fertilité du sperme potentielle ; pour étudier la physiologie des gamètes et début du développement embryonnaire ; et d’éviter l’utilisation d’ovocytes Dauphin précieux, qui sont difficiles à obtenir. Nous présentons ici les protocoles qui ont été utilisées avec succès pour recueillir et cryopréserver des spermatozoïdes de Dauphin. La collecte de sperme s’effectue par stimulation manuelle des dauphins formés. Cryoconservation s’effectue à l’aide d’un extenseur de jaune d’oeuf-basée de TRIS avec le glycérol. En outre, nous présentons un protocole décrivant les FIV hétérologue utilisant Dauphin spermatozoïdes et les ovocytes bovines et qui vérifie la nature hybride de l’embryon qui en résulte, à l’aide de la PCR. La fécondation hétérologue soulève des questions sur la fécondation et peut servir comme un outil pour étudier la physiologie des gamètes et début du développement embryonnaire. En outre, le succès de la FIV hétérologue démontre le potentiel de cette technique pour tester le sperme Dauphin fertilisation de capacité, qui mérite un examen plus poussé.

Introduction

Techniques de procréation assistée sont peu développés chez les animaux sauvages, y compris les mammifères marins. L’absence de méthodes sensibles pour évaluer la réussite fécondante du sperme contribue au développement lent des technologies de la reproduction chez les espèces comme les dauphins. Il n’était pas jusqu'à une date récente que les paramètres fondamentaux séminales du grand dauphin (Tursiops truncatus) ont été signalés¹^,². Toutefois, des variables telles que la motilité et la morphologie, bien que largement utilisé, donnent des informations limitées sur l’efficacité reproductive. Le meille....