Burada, sistemik olarak ve direkt olarak sıçan yaşlanmasına bağlı laringeal kasların yeniden şekillendirilmesi için nevrotropin 4'ü (NTF4) tanımlamak için bir protokol sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Osmotik Pompalar veya Doğrudan Kas Enjeksiyonu Kullanılarak Subkutanöz Neurotrophin 4 İnfüzyonu, Yaşlanan Farenin Larinks Kaslarını Arttırır
Bu makalede
Özet
Özet
Yaşlılarda laringeal işlev bozukluğu, ses bozukluklarından disfajiye ve hava yolu koruyucu reflekslerde azalmaya neden olan önemli bir sakatlık nedenidir. Yaşa bağlı laringeal kas disfonksiyonunu hedef alan az sayıda, varsa, terapiler mevcuttur. Nörotrofinler, kas innervasyonu ve nöromüsküler kavşakların (NMJ'lerin) farklılaşmasına katılırlar. Nörotrofinlerin nörotransmitter salınımını arttırarak nöromüsküler iletimi arttırdığı düşünülmektedir. Nöromusküler kavşaklar (NMJ'ler) fonksiyonel denervasyon bulguları ile sıçan laringeal kas yaşlanmasında daha küçük ve daha az miktarda bulunur. İnsanın laringeal kas yaşlanmasında fonksiyon geliştirmek için NTF4'ün ileride klinik kullanıma yönelik terapötik olarak etkilerini araştırdık. Burada, sıçan laringeal kasının yaşlanması NTF4 uygulamasına tepki olarak yeniden şekillenme yeteneğini araştırmak için sistemik uygulama ve doğrudan NTF4 enjeksiyonu için ayrıntılı protokolü sunuyoruz. Bu yöntemde, sıçanlar NTF4'ü ya sistemik olarak oSmotik pompa veya vokal kıvrımlar yoluyla doğrudan enjeksiyon yoluyla uygulanabilir. Larinks kasları ayrıldı ve morfolojinin histolojik incelenmesi ve yaşla ilişkili denervasyon için kullanıldı.
Giriş
Larinks kasları hızla ve sürekli olarak kasılır ve yaşlanmanın olumsuz etkilerine karşı savunmasızdır. Bu sabit etkinliğin, 65 yaş üzerindeki 1 , 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 numaralı kişilerde görülen ses problemlerine veya disfajiye katkıda bulunduğu düşünülmektedir. Birkaç moleküler ve patofizyolojik mekanizma bu yaşla ilişkili disfonksiyona katkıda bulunmaktadır. Bu mekanizmalar laringeal mukozanın yeniden şekillendirilmesi, kas lifi atrofi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu protokol için 6 ve 30 aylıkken erkek Fischer 344-Brown Norveç sıçanları kullanın. Sıçanlar Ulusal Yaşlanma Enstitüsü'nden kemirgen koloni elde edildi. Bu çalışma için sıçanlar kullandık, çünkü sıçan larenksinin yapısı, havayolu koruması ve türe özgü seslendirme işlevini yerine getiren işlevsel olarak insandakine benzerdi. Bu çalışma, PHS İnsan Gücü Bakımı ve Laboratuar Hayvanları Kullanımı, Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için NIH Rehberi ve Hayvan Refahı Yasası (7 USC ve ark.); Hayvan kullanımı protokolü, Kentucky Üniversitesi'nin Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Sıçan....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Sıçanlar, 2 hafta ozmotik pompa infüzyonundan sonra veya NTF4'ün doğrudan enjeksiyonundan 1 hafta sonra ötenazi yapıldı. Larenjler hasat edildi, kriyoprotektan (% 30 sükroz ve% 70 fosfat tamponlu salin) içine yerleştirildi ve daha sonra bir kriyostat ile 10 um'lik genişlikte kesit olarak kesildi. Yaşlanma laringeal kasları, NTF4 25'in uygulanmasından etkilenir. Genç ve yaşlı sıçanın yanısıra, tiroidenoid kasların enjekte edilen ve enjekte edilmeyen tar.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Larinks kasları yaşlanmanın olumsuz etkilerine karşı savunmasızdır. Önceki çalışmalar, kontraktil fonksi- yon ve miyozin izoform değişikliklerine ek olarak lif boyutu, toplam lif sayısı, rejeneratif yeteneği, NMJ boyutu ve miktarı değişikliklerini içeren yaşlanma laringeal kaslarında değişiklikler olduğunu göstermiştir 4 , 11 , 27 , 30 , 31 . Yaşlanma laringe.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Ulusal Sağırlık ve Diğer İletişim Bozuklukları Enstitüsünün (R21DC010806'dan CAM ve JCS'ye ve R01DC011285'den CAM'e) hibeleriyle desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Nörotrofin 4 | Pepro Tech | 450-04 | 50 &mu'da 200 ng; L |
| Alzet Ozmotik Pompa | DURECT Corporation | 2001D | |
| 30 & deg; endoskop | Stoltz | 61029D | |
| 50 mm 30 ölçer 100-μ L şırınga | Hamilton | 84850 ve 201812 | |
| salin (sodyum klorür çözeltisi) | Sigma-Aldrich | S8776 | |
| ketamin hidroklorür | Henry Schein | 56344 | |
| ksilazin hidroklorür | Henry Schein | 33198 | |
| 25 G 5/8 iğne | Becton-Dickinson | 305901 | |
| 1 mL şırınga | Becton-Dickinson | ||
| oftalmik merhem | Henry Schein | 8897 | |
| makası | Oster | 44-018 | |
| etanol | Decon | 2716 | |
| iyot (Betadine) | Purdue Pharma LP | ||
| ısıtma yastığı | Sunbeam | 731-5 | |
| 5-0 naylon sütür ipliği | AD Cerrahi | PMN-518R6 | |
| kıvrım kanama | durdurucu Güzel Bilim Araçları | 13005-14 | |
| hassas sütür bağlama forseps | Güzel Bilim Araçları | 11063-07 | |
| meloksikam | Henry Schein | 49756 | |
| carprofen | Merritt Veteriner Malzemeleri | 148700 | |
| antibiyotik merhem | Henry Schein | 57110 | |
| asepromizin Aceproject | Henry Schein | 3845 | |
| izofluran İzotezi | Henry Schein | 50033 | |
| indüksiyon kutusu (anestezi kutusu) | Harvard Aparatı | 50-0116 | |
| oksijen sıkıştırılmış tank | Scott Brüt | UN1072 | |
| pleksiglas platform | Small Parts Inc (Amazon) | ||
| kauçuk uçlu forseps | İnce bilim araçları kauçuk | 11075-00 | |
| Lowe's | 42518 | üzerindeki forseps için sıvı kauçuk | |
| (BD şırınga boyuna kesilmiş) | Becton-Dickinson | 309659 | |
| halojen ışık kaynağı gergedan stroboskop | Kay-Pentax | RLS 9100 B | |
| video kaydedici | Kay-Pentax | ||
| sükroz | Sigma-Aldrich | S0389-500G | |
| fosfat tamponlu salin | Sigma-Aldrich | P4417-100TAB | |
| kriyostat Mictotom HM525 | Thermo Scientific | HM 525 | |
| Solungaç 1 hematoksilen | VWR | 10143-142 | |
| Sigma-Aldrich | S0819'da | anti-sodyum kanalı Nav1.5 antikoru | |
| makine | Smiths Medikal | CDS 9000 |
Kaynaklar
- Trupe, E. H., et al. Correlates and consequences of eating dependency in institutionalized elderly. J. Am. Geriatrics Society. 34 (3), 192-198 (1986).
- Ward, P. H., Colton, R., McConnell, F., Malmgren, L., Kashima, H., Woodson, G. Aging of the voice and swallowing. Otolaryngol. Head Neck Surg. 100 (4), 283-286 (1989).
- Gay, E. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
