Nieuwe toepassing van een atmosferische druk Plasma Jet als een Agent van de Neuro-beschermende tegen Glucose ontbering-geïnduceerde letsel van SH-SY5Y cellen

Samenvatting

Een protocol voor het neuroprotectieve toepassing van lage dosis luchtdruk plasma behandeling op glucose ontbering-geïnduceerde SH-SY5Y verwondingen.

Samenvatting

De atmosferische druk plasma jet (APPJ) heeft trok de aandacht van vele onderzoekers uit meerdere disciplines in de afgelopen jaren, omdat de uitstoot meerdere soorten reactieve stikstof soorten (RNS) en reactieve zuurstof soorten (ROS omvatten). Onze vorige studie blijkt het effect van de cytoprotective van de APPJ tegen oxidatieve stress-geïnduceerde verwondingen. Het doel van de huidige studie is bedoeld als een gedetailleerde in vitro behandeling protocol betreffende de toepassingen van de neuroprotectieve van helium APPJs op glucose ontbering-veroorzaakte schade in SH-SY5Y cellen. De SH-SY5Y menselijke neuroblastoma afkomstige cellijn werd gehandhaafd in RPMI 1640 medium aangevuld met 15% foetaal kalfsserum. Het kweekmedium werd vervolgens gewijzigd in RPMI 1640 zonder glucose vóór de APPJ behandeling. Na een incubatie van 1 uur in een cel incubator, was de levensvatbaarheid van cellen bepaald met behulp van cel tellen Kit 8. De resultaten toonden aan dat, in vergelijking met de glucose ontbering groep, cellen behandeld met APPJ tentoongesteld aanzienlijk verhoogde levensvatbaarheid op een dosis-afhankelijke manier, met 8 s/putje waargenomen als een optimale dosis. Ondertussen, helium stroom had geen effect op de schending van de ontbering-geïnduceerde cel glucose. Onze resultaten aangegeven dat de APPJ als een behandelingsmethode van de ziekten in het centrale zenuwstelsel aan deprivatie glucose gerelateerde potentieel gebruikt kan worden. Dit protocol kan ook worden gebruikt als een cytoprotective-applicatie voor andere cellen met verschillende afboekingen, maar de celcultuur en APPJ behandeling voorwaarden moeten worden aangepast, en de dosis behandeling moet relatief laag.

Inleiding

De volwassen hersenen gebruikt bijna uitsluitend glucose als substraat voor energiemetabolisme onder normale fysiologische omstandigheden. Het menselijk brein vormt slechts 2% van het lichaamsgewicht, maar verbruikt ongeveer 25% van de totale glucose binnen het lichaam¹. Het is goed gedocumenteerd dat glucose metabolisme dysfunctie is één van de belangrijkste pathologische veranderingen tijdens ischemische beroerte en diverse neurodegeneratieve ziekten, met inbegrip van de ziekte van Alzheimer (AD), de ziekte van Huntington (HD) en de ziekte van Parkinson (PD) ^2,3. Het gebrek aan glucos....

Protocol

1. voorbereiding van het APPJ-apparaat

Let op: Raadpleeg alle relevante veiligheidsinformatiebladen (MSDS) vóór gebruik. Gebruik de juiste veiligheidspraktijken bij het uitvoeren van alle experimenten, met inbegrip van het gebruik van een zuurkast en persoonlijke beschermingsmiddelen (veiligheidsbril, beschermende handschoenen, laboratoriumjas, enz.). Het protocol vereist standaard cel behandeling technieken (steriliseren, herstel van de cel, cel passaging, bevriezing van de cel, cel kleuring, etc.).

1. Kies een kwarts-buis met een inwendige diameter van 1 mm en een uitwendige diameter van 3 mm. de dwarsdoorsneden....

Resultaten

Gegevens worden uitgedrukt als de gemiddelde ± SD van ten minste drie onafhankelijke experimenten. Groepsresultaten werden geanalyseerd voor variantie met ANOVA. Alle analyses werden uitgevoerd met behulp van statistische analysesoftware Prism en p < 0.05 werd de drempel voor statistische significantie.

Levensvatbaarheid van de cellen werd gemeten na 4 uur van CCK-8 incubatie. Zoals blijkt uit Figuur 3, glucose ontbering verminderde de levensvatbaarheid van de.......

Discussie

SH-SY5Y cellen zijn een menselijke neuroblastoma afkomstige cellijn en worden veel gebruikt als een model van de juiste cel voor in vitro onderzoek naar neurotoxiciteit of neuroprotectie¹². De SH-SY5Y-cellijn was gevoelig voor glucose ontbering voorwaarden. Levensvatbaarheid van de cellen daalde tot bijna 50% na 1 h glucose ontbering, die de optimale cel levensvatbaarheid voorwaarde voor onderzoek van de farmacodynamica. Bovendien, CCK-8 reagens heeft geen cytotoxiciteit naar cellen en ce.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
SH-SY5Y cell line	China Center for Type Culture Collection	3111C0001CCC000026
RPMI 1640 medium	Thermo Scientific	21875091	bewaard bij 4 °C
RPMI 1640 medium geen glucose	Thermo Scientific	11879020	bewaard bij 4 °C
foetaal runder serum	Thermo Scientific	16000044	bewaard bij -20 °C
trypsine-EDTA oplossing	Solarbio	T1300	bewaard bij 4 °C
96 wells plate	corning	3599
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)	Dojindo Laboratories	CK04	bewaard bij 4 °C
microplate reader	Tecan	M200 Pro	voor het meten van de absorptie bij 450 nm
Hoge – voltage versterker	Trek	PD06087	voor het versterken van de macht
Functie Signaal Generator	MaZe Electronics Science&Technology	AT30120	voor het leveren van het specifieke signaal
Hoge – Voltage sonde	Tektronix	P6015A	voor het detecteren van hoge spanning
Digitaal Oscilloscoop	Tektronix	DPO4104B	voor het weergeven van het signaal