Dit artikel demonstreert een lymfkliertest model voor het bestuderen van de ontwikkeling van myointimal hyperplasie (MH) na de ballon van de aorta blessure.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Ballon gebaseerde letsel ertoe Myointimal Hyperplasia in de muis abdominale Aorta
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Het gebruik van diermodellen is essentieel voor een beter begrip van MH, een belangrijke oorzaak voor arteriële stenose. In dit artikel tonen we een lymfkliertest ballon denudatie model, dat vergelijkbaar is met gevestigde schip schade modellen in grote dieren. De aorta denudatie model met ballon katheters bootst de klinische setting en leidt tot vergelijkbare pathobiological en fysiologische veranderingen. Kort na het uitvoeren van een horizontale snede in de aorta abdominalis, zal een katheter met ballon worden ingevoegd in het schip, opgeblazen en retrogradely ingevoerd. Inflatie van de ballon zal leiden tot intima letsel en overdistension van het schip. Na het verwijderen van de katheter wordt de aorta incisie afgesloten met enkele hechtingen zette. Het model weergegeven in dit artikel is reproduceerbaar, gemakkelijk uit te voeren, en snel en betrouwbaar kan worden vastgesteld. Het is vooral geschikt voor de beoordeling van dure experimentele therapeutische agenten, die kunnen worden toegepast op een economische manier. Met behulp van verschillende stammen van de knock-out-muis, kan de impact van verschillende genen op MH ontwikkeling worden beoordeeld.
Inleiding
Arteriële stenose in coronaire en perifere bloedvaten heeft een groot effect op de morbiditeit en mortaliteit voor patiënten1. Een onderliggende pathologische mechanisme is myointima hyperplasie (MH), dat wordt gekenmerkt door toenemende proliferatie, migratie en synthese van de extracellulaire matrix eiwitten van vasculaire vlotte spier cellen (SMC)2. SMC bevinden zich in de laag van de media van het vaartuig en migreren op stimulatie op het oppervlak van de lumen. Stimulerend signalen zijn groeifactoren, cytokines, cel-cel contact, lipiden, componenten van de extracellulaire matrix en mechanische schuintrekken en strek....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
Dieren ontvangen van humane zorg met inachtneming van de gids voor de beginselen van de proefdieren, opgesteld door het Instituut van laboratorium dierlijke hulpbronnen en gepubliceerd door de National Institutes of Health. Alle dierlijke protocollen werden goedgekeurd door de verantwoordelijke lokale autoriteit ('' Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, (Bureau voor gezondheid en consumentenbescherming) Hansestadt Hamburg'').
1. de katheter voorbereiding
Nota: Verwijs naar de Tabel van materialen voor informatie over de katheter.
- Neem katheter uit de houder van de katheter.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
Ballon denudatie is een geschikt model te bestuderen voor de ontwikkeling van MH in muizen. Dieren herstellen goed van de operatie en een uitstekende conditie na bewerking weergeven. We vastgesteld dit model in 50 muizen met minder dan 3% sterftecijfer als gevolg van de chirurgische procedure. Cijfers 1B -C tonen de belangrijkste chirurgische stappen. Na een huid incisie langs de linea alba, identificeren van de aorta abdominalis.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Dit artikel toont een lymfkliertest model voor het bestuderen van de ontwikkeling van myointimal hyperplasie en laat de verkenning van de onderliggende pathologische processen en het testen van nieuwe geneesmiddelen of een therapeutische opties.
De meest kritische stap in dit protocol is de ontbossing van de aorta. Speciale aandacht moet worden besteed tijdens deze stap, zoals overdreven ontbossing tot aneurysma vorming en model falen leiden zal. Aan de andere kant, als denudatie onvoldoende w.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te onthullen.
Dankbetuigingen
De auteurs bedanken Christiane Pahrmann voor haar technische bijstand.
D.W. werd gesteund door de Max Kade Foundation. T.D. ontvangen subsidies uit het anders Kröner Fondation (2012_EKES.04) en de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. ontvangen onderzoekssubsidies van de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL Syringe | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 prolene suture | Ethicon | 8706H | |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Antigen retrieval solution | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
| Betadine Solution | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Stock number 000664 | |
| Clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | JAW DIMS: 4 x 0.75 mm LENGTH: 13 mm |
| Collagen 3 | abcam | ab7778 | Antibody |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Donkey anti-Goat IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Secondary antibody |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | Antibody |
| Forceps fine | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Forceps standard | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| High temperature cautery kit | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Blocking solution |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - 4mm |
| MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Primary antibody diluent | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Mounting solution | Thermo Fischer | P36930 | Mounting solution for immunofluorescence stained slides |
| Replaceable Fine Tip | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome staining |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Scissors Vannas-style | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Secondary antibody diluent | Dako | S0809 | |
| Fast acting Adhesive MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Cyanoacrylate |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| SM22 | abcam | ab10135 | Antibody |
| SMA | abcam | ab21027 | Antibody |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Surgical microscope | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | Absorbable hemostat |
| Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Insulin syringe | BD Medical | 324825 | |
| Vessel Dilator | Fine Science Tools | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 |
Referenties
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
- Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal prol....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
