С высокой эффективностью, небольшое количество периферической крови и низкодозированные Ил-2 был разработан простой метод для получения клоны Т-клеток и NK CAEBV больных.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
С высокой эффективностью, небольшое количество периферической крови и низкодозированные Ил-2 был разработан простой метод для получения клоны Т-клеток и NK CAEBV больных.
Ряд методов были описаны установить НК/T клеточных линий от пациентов с лимфомой или лимфопролиферативных синдромом. Эти методы подачи клетки, очищенный НК или T клетки как 10 мл крови или высок дозы Ил-2. Это исследование представляет новый метод с мощной и простой стратегии учредить Т-клеток и NK линии путем культивирования периферической крови мононуклеаров (КСДОР) с добавлением рекомбинантный человеческий Ил-2 (rhIL-2) и использует как маленькое как 2 мл цельной крови. Клетки могут размножаться быстро в две недели и поддерживаться более 3 месяцев. С помощью этого метода были созданы 7 НК или Т-клеток линии с высокий уровень успеха. Этот метод является простым, надежным и применимым к созданию линии клетки от больше случаев CAEBV или НК/Т-клеточной лимфомы.
Вирус Эпштейна - Барр (EBV) повсеместно и заражает не только B-клетки, но также T и природных убийца (НК) клетки, что приводит ряд связанных EBV НК/T лимфопролиферативных заболеваний (LPD) и лимфома/лейкоз, например EBV-связанные гемофагоцитный лимфогистиоцитоз, hydroa vacciniforme как лимфома, экстранодальных НК/Т-клеточной лимфомы, носовой тип и агрессивным NK клеток лейкемии1,2,3. Среди них заболевание тяжелой хронической активных EBV (SCAEBV), который является инцидент, главным образом в Восточной Азии, и которая теперь считается LPD, вызванные клоновых расширения EBV-инф....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Это исследование был одобрен Комитетом по этике Института генетики и биологии развития, Китайская академия наук, и протокол следует институциональных руководящих принципов для благополучия человека.
Примечание: На рисунке 1 приведена схема рабочего процесса.
1. изоляция КСДОР от больных CAEBV
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
После 3 дней культуры во время создания клеточных линий, полиморфные клетки начинают появляться (рис. 2). После 7 дней клетки растут быстро, увеличением числа и жизнеспособность клеток на высокой скорости (рис. 3). После 10-14 дней, растет, когда концентрация клеток может превышать 3-6 × 106четко видны небольшие кластеры клеток. В этот период клетки должен быть расширен путем разделения на два или три скважины плиты ку.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
В этом протоколе был разработан Роман технику для создания НК/T клеточных линий из цельной крови больных CAEBV. По сравнению с существующими методами, основным преимуществом данного метода является его простота и его требование лишь небольшого количества крови, в то время как оно exhibits высокий уровень успеха и хорошие условия жизнеспособности клеток. Кроме того НК/T клеточных линий может устанавливаться путем культивирования КСДОР без определения типов клеток EBV латентно инфицированных заранее, как определение будет .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
D.Z., X.Z. и X.C. являются совместное изобретателей на патентных заявок, охватывающих потенциального использования данного метода для установления НК/T линии клеток и клеточных линий, установленных в настоящем исследовании. D.Z., X.Z. и X.C. объявить не конкурирующих финансовых интересов в этой работе. Остальные авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Эта работа была поддержана ключ проектов Китайской академии наук (KFZD-SW-205), стратегические биологических ресурсов технологии системы поддержки Китайской академии наук (CZBZX-1 и ZSSB-004) и субсидии от национального фонда науки Китая ( 81401640) и Шанхае фонда естественных наук (14ZR1434800).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Антитела Hu HLA-DR FITC | BD | антитела для FACS | |
| Hu CD4 FITC | BD | 555346 | антитела для FACS |
| Hu/NHP CD8 PE | BD | 557086 | антитела для FACS |
| Hu CD3 PE | BD | 555340 | антитела для FACS |
| Hu CD16 FITC 3G8 | BD | 555406 | антитела для FACS |
| Hu/NHP CD56 PE MY31 | BD | 556647 | антитело для FACS |
| hu/CD19 PE-Cy7 | BD | 560728 | антитело для FACS |
| человека IL-2 | Roche | 11147528001 | |
| сыворотки крови человека | MRC | CCC118-125 | |
| CO2 | SANYO | ||
| Centrifuge | Techcomp | CT6T | Центрифугационный |
| микроскоп | OLYMPUS CKX53 | CKX53 | |
| Автоматизированный счетчик клеток | Countstar | IC 1000 | Для подсчета клеток |
| 24 лунки кластер клеточных культур | Corning Incorporated | 3524 | Полистирольные пластины |
| 25см2 колба для клеточной культуры | Гнездо | 707001 | Полистирол |
| FBS | Gibco | 10270 | Компонент клеточной среды |
| RPMI Medium 1640 | срок службы | 22400089 | Для клеточной среды |
| L-глутамин | Amresco | 374 | Компонент клеточной среды |
| 100 x стрептомицина пенициллина раствор BioRoYeeBRY-2309 | BioRoYee | BRY-2309 | Компонент клеточной среды |
| Ficoll paque plus | GE Healthcare | 17-1440-03 | Для выделения in vitro лимфоцитов |
| DMSO Sigma | D2650 | Для замораживания клеток | |
| проточный цитометр | BD | BD FACSAria II | |
| программная посуда | BD | BD FACSДива программная посуда | FACS анализ |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.