Utilisation de Zinc synaptique histochimie pour révéler les différentes régions et les limbes dans le cerveau en développement et Adult

Résumé

Nous décrivons une procédure histochimique qui révèle des caractéristique zinc laminaire et areal coloration modèles dans différentes régions du cerveau. Le patron de coloration zinc peut servir en conjonction avec d’autres marqueurs anatomiques à fiable distinguer des couches et des régions du cerveau en développement et les adulte.

Résumé

Caractérisation de l’Organisation anatomique et fonctionnelle du cerveau et le développement nécessite une identification exacte des circuits neurones distincts et des régions dans le cerveau adulte et immature. Nous décrivons ici une méthode de coloration histochimique zinc qui révèle des différences dans les profils de coloration entre les différentes couches et les régions du cerveau. D’autres ont utilisé cette procédure non seulement pour révéler la distribution des neurones contenant du zinc et des circuits dans le cerveau, mais aussi de délimiter avec succès des limites areal et laminaires dans le cerveau en développement et adult dans plusieurs espèces. Ici, nous illustrons cela souillant le procédé avec des images des pays en développement et de la cervelle de furet adulte. Nous révèlent un modèle zinc-coloration qui sert comme un marqueur anatomique des zones et des couches et peut être utilisés de manière fiable pour distinguer les aires corticales visuelles dans le cortex visuel en développement et les adult. Le principal objectif du présent protocole est de présenter une méthode histochimique qui permet l’identification précise des couches et des régions dans le cerveau en développement et adulte où les autres méthodes ne parviennent pas à le faire. Secondairement, en conjonction avec l’analyse densitométrique image, cette méthode permet d’évaluer la distribution de zinc synaptique pour révéler des changements possibles au cours du développement. Ce protocole décrit en détail les réactifs, des outils et démarches nécessaires pour colorer successivement les sections du cerveau gelé. Bien que ce protocole est décrit à l’aide de tissus cérébraux de furet, il peut être facilement adapté pour être utilisé dans les rongeurs, les chats ou les singes ainsi que dans d’autres régions du cerveau.

Introduction

Taches histologiques ont été utilisées traditionnellement pour aider à l’identification des aires corticales chez diverses espèces de révéler des différences dans les caractéristiques architectoniques. L’utilisation combinée des techniques histochimiques telles que pour la substance Nissl, réactivité de la cytochrome oxydase (CO) ou la myéline peut se révéler fructueuse qu’ils révèlent des limites areal semblables dans le cerveau adulte. Cependant, ces taches histochimiques ne révèlent pas toujours bien des limites claires entre les aires corticales et les couches dans le cerveau immature.

Dans le système nerveux central, le zinc a plusieur....

Protocole

le protocole suivant suit les directives de santé animale institués par l’animalerie institutionnelle et utilisation Comité (IACUC) à The City College of New York, qui sont conformes à tous les état approprié et les lignes directrices fédérales. L’anesthésie est approprié pour les furets et devraient être modifiée en fonction des espèces étudiées.

figure 1 : organigramme décrivant les grandes étapes dans les 3 phases du présent protocole et le temps requis pour effectuer chaque é....

Résultats

Les grandes étapes de ce protocole pour colorer les sections du cerveau pour le zinc synaptique sont présentés dans un organigramme de la Figure 1. Le protocole peut être divisé en trois phases : 1) Perfusion et prélèvement tissulaire, préparation du tissu 2) et coloration et histochimie Zinc 3). En bref, au cours de la première phase du protocole, l’animal est anesthésié et la dose appropriée de sélénite de sodium injection IP. Après une période suffisamment.......

Discussion

La présente étude utilise une technique histochimique basée sur une version modifiée de la Danscher méthode (1982)¹⁰, auquel cas localisation synaptique de zinc peut-être être détectée et visualisée dans le cerveau. Cette méthode fonctionne essentiellement en injectant l’animal avec le sélénite de sodium chélateur de zinc (Na₂SeO₃) (15 mg/kg). Après l’injection, la sélénite se rend au cerveau et se lie au zinc gratuit qui est localisé dans les vésicules présynaptiques de zinc.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Euthasol (solution d’euthanasie)	Henry Schein	710101
Sélénite de sodium	Sigma-Aldrich	214485
Kétamine (Ketaved)	Henry Schein	48858	100 mg/ml injectables
Xylazine (Anased)	Henry Schein	33198	100 mg/ml injectables
Paraformaldéhyde	Sigma-Aldrich	F8775	Dilué à 4 %
Gomme arabique	Sigma-Aldrich	G9752-500G
Acide citrique	Sigma-Aldrich	C1909
Citrate de sodium	Sigma-Aldrich	W302600
Hydroquinone	Sigma-Aldrich	H9003
Lactate d’argent	Sigma-Aldrich	85210
Gélatine de poisson	Sigma-Aldrich	G7765
Cytochrome c	Sigma-Aldrich	C2506	(Type III, du cœur équin)
Catalse	Sigma-Aldrich	C10
Saccharose	Domino
Xylène	Fisher Scientific	X5P-1GAL
Permount	Fisher Scientific	SP15-500
100 % Ethanol	Fisher Scientific	A406-20	Utilisé pour la déshydratation avant le montage des lames
Brain	Research Laboratories	#3660-1
Lames dépolies non sous-titrées	Brain Research Laboratories	#3875-FR
Microtome	American Optical Company	860
Microscope	Olympus	BX-60
Adope Photoshop	Adobe Systems, San Jose, CA		Pour assembler des images
ImageJ	Un logiciel gratuit peut être téléchargé à l’adresse http://rsb.info.nih.gov/ij/		Pour les mesures densométriques
Plateau en plastique	Tout plateau en plastique standard peut être utilisé		pour immerger les lames dans la solution
de développement Plaque chauffante	N’importe quelle plaque chauffante standard peut être utilisée

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