Yöntem makalesi

Diriliş uyuyan Daphnia magna: Protokolü ve uygulamaları

22.7K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/56637

⸱

19 Ocak 2018

 , 
1Environmental Genomics Group, School of Biosciences, University of Birmingham

Bu makalede

Özet

Uzun vadeli çalışmalar evrim süreci ve adaptasyon mekanizmaları anlamak için gerekli. Genel olarak, bu çalışmalar araştırmacıların ömür boyu ötesinde taahhütleri gerektirir. Burada, güçlü bir yöntem büyük ölçüde doğal sistemlerinde boyuna verileri oluşturmak için state-of--art veri toplama gelişmeler açıklanmıştır.

Özet

Uzun vadeli çalışmalar uzun süreler içinde oluşan Eko-evrimsel süreçleri tanımlaması etkinleştirin. Buna ek olarak, onlar akıllı modelleme evrimsel doğal ekosistemlerin yanıt-e doğru gelecekteki çevresel değişiklikler tahmin etmek için kullanılan önemli ampirik veri sağlar. Ancak, birkaç istisnai durumlar, uzun vadeli çalışmalar zamansal örnekleri erişme ile ilgili lojistik zorluklar nedeniyle azdır. Zamansal dinamiği sık vahşi doğal nüfus evrimi yeniden olağanüstü çalışmaları ile laboratuvar veya kontrollü mesocosm deneyler incelenmektedir.

Burada, Standart prosedür (SOP) canlandırmak veya önemli ölçüde state-of--art boyuna veri koleksiyonunda ilerlemek için uyuyan Daphnia magna, sucul ekosistemler, bir yaygın plankton kilittaşı türler diriltmek için sağlanmıştır. doğal sistemlerin. İlk diapausing plankton yumurta tarihe geri 1980'lerin kuluçkalık çalışır halde diriliş ekoloji alanında Kerfoot ve iş arkadaşları tarafından 1999 yılında tanımlanmıştır. Kerfoot'ın seminal gazeteden beri plankton türler resurrecting metodoloji giderek daha sık, doğrudan bilgi transferi yoluyla sadece laboratuvarlar arasında yayılır rağmen uygulanmıştır. Burada, bir SOP uyuyan Daphnia magna resurrecting uygulaması üzerinde adım adım bir protokol sağlayan anlatılan yumurta.

Hangi fitness tepki Daphnia magna nüfus için yeniden canlandırmak olarak ısınma ölçülür, iki anahtar çalışma tarihi ve modern nüfus aynı ayarları çalışma yeteneği üzerinde sermaye sağlanmaktadır. Son olarak, sonraki nesil sıralama teknolojileri uygulamaya canlandı veya hala atıl aşamaları ele alınmıştır. Bu teknolojiler süreçleri ve seçim basınç değişiklikleri zaman içinde yaşamış nüfus uyguladıysanız evrim mekanizmaları dissekan benzeri görülmemiş güç sağlar.

Giriş

Uzun vadeli çalışmalar doğada ve ne tür yanıt ve çevresel değişimin1sırasında kalıcı değerlendirirken ekolojik ve evrimsel süreçleri anlamak için kritik öneme sahiptir. Eko-evrimsel süreçleri nesiller boyunca oldu ve uzun zaman açıklıklı üzerinde ortamındaki değişiklikler meydana olmasıdır. Ayrıca, uzun vadeli çalışmalar evrimsel doğal ekosistemlerin yanıt-e doğru çevre değişiklikleri2tahmin etmek için akıllı modelleme doğruluğunun geliştirilmesine önemli ampirik veriler sağlar. Bu modeller doğruluğunu biyolojik çeşitlilik ve ekosistem hizmetleri korumak için yönetimi ve koruma stratejileri uygulamak için çok önemlidir.

Birkaç istisnai durumlar (örneğin, Galapagos Darwin ispinozları3 ve yosun4), uzun vadeli çalışmalar büyük ölçüde türe laboratuvar5,6 ' türetilebilecek kısa oluşturma süresi ile sınırlıdır , 7 , 8. bu nedenle, evrimsel dynamics destek süreçleri zor kalır. Zamansal örnekleri erişme ile ilgili lojistik zorluklar nedeniyle ampirik veri daha sık olarak bir uzamsal-zamansal bir bağlamda incelendiği ve zamansal Eko-evrimsel süreçleri anlaşılmaktadır veya uzamsal verilerden modellenmiştir. Bu yaklaşım 'uzay-için-zaman' ikame9sayede alanı zamansal evrimsel dynamics eğitim için bir vekil olarak kabul edilen, olarak bilinir. 'Uzay-için-zaman' ikame ana sınırlandırılması kayma farklı ölçeklerde uyum oranları aynı nüfus zamansal değişim farklı olduğunu; Bu nedenle, yedek zaman alanı olan temel çıkarımlar önyargılı10vardır.

Zaman içinde doğal ekosistemler evrimsel dinamiklerini eğitim sağlayan güçlü bir alternatif uyuyan aşamaları11üreten türlerin ekolojik ve genetik değişimler analizidir. Uyuyan bu aşamaların doğru tarihli olabilir tabakalı form biyolojik arşive birikir ve12,13paleolimnologically ile karakterizedir. Önemlisi, bu uyuyan aşamaları resüsite ve nerede çevre değişim evrimsel onların yanıt doğrudan ölçülebilir laboratuvar deneylerinde kullanılan. Tarihsel nüfus fitness değişiklikleri ve adım çevresel değişimin14,15,16ile gelişen genlerin fonksiyonun çalışmaya modern gelişmiş torunları karşı yarıştı.

Uyuyan aşamaları dahil tohumları, kistler, sporlar ve bankalar yumurta. Her ne kadar geç 1980'lerde17ve çalışmalar bir avuç geri yaşama uyuyan yumurta tarihleri üzerinde ilk çalışmalar erken 1990'larda18,19Bu teknikte uygulamış, diriliş ekoloji alanında resmen olmuştur Kerfoot ve iş arkadaşları 199920seminal kağıt tarafından kuruldu. Bu uygulama içinde ağırlıklı olarak rekonstrüksiyonlar paleolimnological tatlı türler17,21,22uygulanmıştır. Ancak, bir SOP henüz kullanılabilir değil. Burada, plankton türlerinin Daphnia magna uyuyan yumurta uygulanan diriliş protokolü, adım adım açıklamasını, yavru üzerinden klonal kültürler kurulması için tortu örnekleme üzerinden sağlanır. Daphniadiğer türler için kolayca transfer edilebilir SOP adımlardan yanı sıra ek optimizasyon, gerektirebilir adımları ele alınmıştır.

Daphnia tatlı su zooplankters lotic habitatları23 çoğunda mevcut vardır. Daphnia türü ya da zorunlu aseksüel veya döngüsel parthenogens bulunmaktadır. D. magna clonally uygun çevre koşulları24altında üretir döngüsel bir parthenogen var. Çevre koşullarının bozulmasına, erkek üretim oluşur ve cinsel rekombinasyon uyuşukluk çevreden ephippium denilen bir kitin durumunda tarafından korunan bir devlet girin döllenmiş yumurta oluşumu yol açar. Bir kısmı atıl bu yumurta yumurtadan uygun çevre koşulları döndüğünüzde. Ancak, uyuyan yumurta banka büyük bir kısmı hiç yumurtadan ve böylece biyolojik Arşivler kurmak zaman içinde oluşturmak için bir şansı var. Uyuyan aşamaları göller ve göletler tortu gömülü kalır ve evrimsel dinamikler çalışma için uzun süreler içinde yeniden canlandırmak. D. magna uyuyan yumurta cinsel rekombinasyon sonucudur çünkü türler25doğal genetik çeşitliliğin iyi bir temsil vardır. Ayrıca, laboratuvarda klonal üreme yoluyla korunabilir. Bu özellikleri doğal genetik çeşitlilik koruyarak isogenic canlılar, benzersiz avantaj sağlarlar.

İki önemli çalışmalar çevre seçimi basınç zaman içinde yaşıyor doğrudan karşılaştırma D. magna aynı nüfus tarihi ve modern torunları avantajları göstermek için sunulmaktadır. D. magna numuneler Gölü yüzüğünden (Danimarka), sığ bir yeniden canlandırmak (5 m Derinlik; yüzey 22 ha) Zaman içinde ortalama sıcaklık ve ısı dalgaları oluşumu bir artış yaşanmıştır karışık gölet. D. magna (alt) nüfus 60 yıl (1960-2005) kapsayan bu zamansal degrade yeniden canlandırmak ve evrimsel yanıt-e doğru sıcaklık ısınma araştırmak için okudu. Ortak bir bahçe deneyi ilk çalışmada,'hayat Tarih fitness bağlantılı özellikleri değişiklikleri yanıt predictions Hükümetlerarası Panel iklim değişikliği için yaklaşan 100 yıl doğrultusunda 6 ° c sıcaklık artışı olarak ölçüldü 26. ikinci çalışmada, mesocosm deney üç rekabetçi yeteneklerini ölçmek için kullanılan ısınma altında (alt) nüfus. Kombine bu deneyler huzurunda, sadece stres ısınma tüm yaşam öyküsü özellikleri ve nüfus plastisite yüksek düzeyde göstermek ve eşit rekabet yetenekleri olduğunu göstermektedir. Bu bulgular tavsiye ederim tek bir stres önemli fitness maliyeti, en azından kalabalıkta empoze etmez gibi ısınma burada okudu.

Protokol

Aşağıdaki SOP Daphnia magna diriltmek için kullanılan iletişim kuralı, adım adım açıklamasını uyuyan yumurta, örnekleme, yalıtım ephippia tortu ve klonal kültürler ( kurulması, ayrıntılı bir açıklama da dahil olmak üzere sağlar. Şekil 1).

Tortu çekirdek örnekleme diyagramı; göl karot kurulumu, stratigrafi, tarihlendirme ve biyolojik analiz.
Şekil 1: adım adım kılavuzu diriliş Daphnia magna. Tortu doğal tatlı su ortamına(a)üzerinden bir piston corer (B) ile örneklenir. Tortu çekirdek (C) 1 veya 0.5 cm (D) artımlı katmanlar halinde dilimlenmiş. Tortu her katman bir örnek zip kilit torba (E) içinde karanlık ve soğuk koşullarda (4 ° C) depolanır. Tortu her tabakası ağırlığında ve jeolojik elekler (1 mm ve 125 µm kafes boyutları, F) kullanarak elenmiş. Beyaz arka plan tepsiler Daphnia magna ephippia (G) izole etmek için kullanılır. Decapsulated uyuyan yumurta (H) Petri yemekler için transfer ve damızlık ikna etmek için ışık ve sıcaklık uyaranlara maruz. Yavru isoclonal satırları oluşturmak üzere kavanozlar (Ben) ayırmak için transfer edilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

1. örnekleme tortu çekirdek

  1. Göl ve göletler piston corer kullanarak üzerinden örnek tortu. Big Ben27bu protokolü kullanılan, yaklaşık 1.5 m uzunluğunda bir iç boru çapları, 14 cm. Big Ben ile bir çekirdek tüp bir piston bir ip ve çubuklar tüp tortu sürücüye bağlı bir corer kafa oluşur. Bir çekirdek alıcı çekirdek tüp zaman tam destek yardımları, tortu. Tortu Yükselt için bir çerçeve çekirdek tüp dik ve sabit tutar ve değiştirilmiş şişe jack pistonu yukarı ekstrüzyon sürecinde (ek Video 1) itmek için kullanılır.
    1. İçin sığ gölet az 1 m derinlemesine bir pleksiglas yerçekimi corer en fazla 6 cm çapında el ile tortu itti kullanın.
    2. Derin göl için (> 6 m Derinlik), Livingston piston soyucular28 veya tek sürücülü Griffith tortu soyucular bir bağlantılı duba tekne AIDS ile kullanın. Livingstone tipi sürücü çubuk piston corer yaklaşık 30 m kadar su derin birbirini izleyen bir metrelik götürmek-in yumuşak konsolide Gölü tortu toplamak için kullanılabilir. Livingstone sürücü çubuklar için standart polikarbonat borular bağlayan bir basit ama güçlü çekirdek kafa, tek sürücülü Griffith corer oluşur. Soyucular tortu çubuklar ile içine itilir ve bir piston tortu (Şekil 2) kurtarma için gerekli emiş gücü sağlar.
    3. Rahatsız edilmeden çekirdek, sürekli almak için vibracoring kullanın. Bu soyucular su derinlikleri çeşitli üzerinde çalışmak ve çekirdek örnekleri, tortu lithology bağlı olarak farklı uzunlukta alabilirsiniz. Vibracore baş aşağı ekli varil veya çekirdek tüp yoluyla aktarıldığı düşük genlik titreşim çökeller, sıvılaştırılmış çökeller nüfuz vibracore birimine bağlı çekirdek namlu etkinleştirme liquefies. Bazı vibracorers küçük, hafif ve taşınabilir, diğerleri yalnızca büyük gemilerin dağıtılabilir büyük ağır birimleri vardır. Soyucular seçim tortu lithology üzerinde bağlıdır.
  2. Çekirdek yatay olarak 1 cm veya daha az düz metal yüzeylere (ek Video 1) kullanarak artımlı katmanlarında dilim. Burada kullanılan bir tortu soyucular ekstrüzyon, rahatsızlık sediman katmanların azaltılması, hidrostatik basıncı azaltmak için tasarlanmıştır. Diğer soyucular kullanıldığında, dış kabuğu her tortu katmanın katmanlar arasında kirlenme sınırlamak için bıçak bir çerez kesici tür kaldırılmış olabilir.
  3. Her bir ayrı örnekleme çanta (ek Video 1) tortu katmanda toplar ve karanlık ve soğuk (4 ° C) koşulları saklarız.
  4. Radyometrik tarihleme için tüm katmanlardan en az 5 g tortu toplamak. Radyometrik çıkıyor uzanan tahlil ayrıntılı bir açıklaması için oluşturulmuş protokol için varolan yayınlar12,13bakın.

Sediment karot alma proses diyagramı; piston tahrikli sistem, karot çıkarma, jeolojik örnekleme.
Şekil 2: yordam Asitleme piston karikatür. Piston corer, zayıf bir vakum oluşturur bir iç sürgülü mühür (piston) ile içi boş bir tüp. Piston tortu-su arabirimi dokunduğunda, ağırlığı iter ve çekirdek namlu tortu ve vakum girin ve sediman katmanların bozmadan tüp taşımak için özlü tortu neden olur. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

2. eleme sediman katmanların

  1. Bir duyarlılık ölçeği kullanarak, her bir tortu katman ileride başvurmak için tartmak. Yüzey alanı ve ağırlık göl türler dansitesi hesaplamak için kullanın.
  2. Birbiri üstüne yığılmış iki jeolojik elekler kullanarak her tortu katman elek. İlk elek bir kafes boyutu 1 mm ve kil, büyük omurgasızlar ve Partiküler madde, örneğin tohumlar, bitkiler ve böcekler, tortu kalan ayırır. İkinci elek 125 µm örgü vardır ve D. manga ephippia ve küçük partikül tortu (ek Video 2) kalan ayırır.
  3. Küçük aliquots 125 µm mesh elek toplanan tortu fraksiyonunun bir beyaz arka plan tepsiye aktarın. Tortu türüne bağlı olarak, tortu, küçük veya büyük aliquots her zaman transfer edilebilir.
    1. Küçük birimleri ekleyin (ilâ 200 mL) orta transfer edilen tortu kesir yeniden askıya almak ve göz ephippia (şekil 3) lekelenme kolaylaştırmak için örnekleme beyaz tepsi için. Tortu resuspend için kullanılan orta dechlorinated musluk suyu, sondaj su, açılan29veya ADaM orta (Aachener Daphnien)30olabilir. Bundan sonra terim 'orta' ya da tüm listelenen çözümleri için başvurmak için kullanılır.

500 μm ölçeğinde iç yapıları gösteren, AC etiketli tohum kesitlerinin mikroskobik görüntüsü.
Şekil 3: Daphnia magna ephippium. Uyuyan Daphnia magna yumurta hemen sonra kapsülden çıkarma. Ephippium(a), (B) iç yumurta membran ve uyuyan yumurta (C). gösterilir Ölçek çubuğu 500 µm =.

3. Ephippia ve damızlık kapsülden çıkarma

  1. Bir tek kullanımlık Pasteur pipet veya mikrodiseksiyon forseps kullanarak transfer bireysel ephippia Petri yemekler için orta 10 mL ile dolu. En az bir petri çökelti tabakası başına kullanın.
  2. Stereo mikroskop, decapsulate altında mikrodiseksiyon forseps açık zorlayarak kitin durum (ek Video 3) kullanarak her ephippia. Dinlenme yumurta iç zarı ince kaldırmak için değil yumurta bozabilir ve Petri kabına aktarmak için dikkat ile Pasteur pipet kullanarak ortam dolu. Kapsülden çıkarma D. magna; tarama başarı ancak artırır, bu gerekli olmayabilir veya daha küçük ephippia üreten diğer Daphnia türler için zor olabilir.
  3. Decapsulated yumurta tam spektrum uzun gün photoperiod ışık (16:8 ışık: karanlık) ve damızlık ikna etmek için yüksek sıcaklık (20 ± 1 ° C) için bir ısı kontrollü aygıt (kuluçka) veya oda içinde maruz. 48 h ve (en fazla dört; birkaç hafta arasında damızlık olur Takıma giren Video 4). Kapsülden çıkarma yokluğunda, doğrudan uyaranlara (uzun gün photoperiod ışık (16:8 ışık: karanlık) ve yüksek sıcaklık (20 ± 1 ° C)) çıkım için ephippia ortaya çıkarmak.

4. Daphnia magna Isoclonal satırları oluşturma

  1. Tek yavru satırlarından isoclonal adım 3.3 200 mL tek kullanımlık Pasteur pipet kullanarak orta ile dolu kavanoz ayırmak için bireysel D. magna aktararak kurmak. Her bireyin genetik olarak cinsel rekombinasyon sonucu olarak farklıdır.
  2. İsoclonal satırları süresiz olarak hisse senedi koşullarında oluşan 10 ± 1 ° C, 16:8 ışık: karanlık rejimi, haftalık 0.2 mg C/M Chlorella vulgaris veya diğer yeşil algler (örneğin, Scenedesmus obliquus) ile beslenen korumak. Orta üçüncü haftada yenilemek. Hisse senedi koşullarında beslenme rejimleri ve türler sıcaklık ile değişebilir.

5. anahtar çalışmalar

Not: Hangi dirilen D.magna içinde (alt) tortul Arşiv veri gruplarından Gölü halka (Danimarka) ısınma için evrimsel yanıtı değerlendirmek için kullanılan iki temel çalışmalar için bir açıklama sağlanmıştır. Üç (alt) nüfus aşağıdaki süreler yeniden canlandırmak: 1960-1970, 1970-1985, ve > 1999. 11 ile X (şekil 4) arasında değişmekteydi tortul Arşivi'nden başarı kuluçkalık D. magna . Her timeperiod elde edilen yavru rastgele bir alt burada açıklanan iki anahtar çalışmalar için seçildi. Bu çalışmalar (alt) nüfus dönemleri boyunca sıcaklık değişimi üzerinden yeniden canlandırmak fitness bağlı yaşam öyküsü özellikleri (5.1) farklılıkları gösterdi ve onlar farklı rekabetçi yetenek (5.2) vardı değerlendirmek için tasarlanmıştır ısınmaya maruz kaldıktan sonra.

Çubuk grafik, 1958-2004 yılları arasında kuluçka yüzdesi, ekolojik popülasyon çalışması, veri analizi.
Şekil 4: başarı Gölü yüzüğünden örneklenmiş bir tortul arşivindeki kuluçkalık. Göl anahtar çalışmalarda kullanılan yüzük tortul Arşiv boyunca başarılı yavru oranı. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

  1. Ortak Bahçe deneyler
    1. On yavru (alt) nüfus başına hisse senedi kültürleri ortak Bahçe koşulları için transfer: 16 ° C; uzun photoperiod (16:8 ışık: karanlık rejimi); Her gün 0,8 mg C/L Chlorella vulgarisile besleme ve orta iki günde yenilemek. En az iki kuşak (ca. 45 gün) için ortak Bahçe koşullarında yavru korumak. Ortak Bahçe koşulları anne etkisi müdahalelerden azaltmak ve üreme yavru arasında eşitleyin.
    2. İkinci damızlık damızlık odasına serbest bırakılmasıyla yetişkin kadın gençlere ikinci damızlık bırakana orta ile dolu 500 mL kavanoz için ikinci nesilden aktarın.
    3. Rastgele 24-48 h, orta ile dolu ve aşağıdaki deneysel koşullar için maruz 100 mL kavanoz ikinci nesil kuluçka ikinci dünyaya bireysel gençlere aktarım: 18 ° C (göl geçerli sıcaklık) ve (ısınma, sıcaklığı 24 ° C IPCC 26 tarafından yaklaşan 100 yıldır tahmini), 16:8 ışık: karanlık rejimi ve besleme günlük 0,8 mg C/L Chlorellavulgaris.
    4. Her deneysel hayvan üzerinde baş ve omurganın kuyruk (şekil 5) arasındaki mesafe olarak bir stereomicroscope ile Vadesinde boyutunu ölçmek. Her hayvan fotoğraf ve daha sonra boyutuna uygun görüntü yazılımı kullanarak çözümleyebilirsiniz.
    5. Olgunluk yaşta ölçmek: içinde yumurta ilk defa kuluçka odasında günü kutlanan.
    6. Ölüm ölçmek: deney sırasında soyu tükenmiş sayisi.
    7. Verimlilik ölçmek: birinci ve ikinci klonal üreme yayımlanan yavru toplam sayısı.
    8. Euler denklem (1) kullanarak tahmini nüfus artış hızı tedbir:
      Statik denge formülü Σe^(-rx)lxbx=1 matematiksel denklemler bağlamında.(1)
      Lx yaş xhayatta kalma oranı, bx Yenidoğan Bebeklerin sayısı yaş xhayatta kalan tek tek başına üretilen ve r iç doğal artış oranıdır nerede.
    9. Piyasada bulunan yazılım kullanarak istatistiksel çözümleme gerçekleştirme. Burada, R31 tepki normları (ortamlar arasında tek bir genotip fenotipik ifade) ggplot2 paketi kullanarak her hayat Tarih özelliği için çizmek için kullanın. Mortalite oranları Sağkalım analizi (R paket rms; https://cran.r-project.org/web/packages/rms/rms.pdf) üzerinden başına hesaplayın. Son olarak, sıcaklık etkisi özellikleri (nüfus arasında farklılıklar), evrim tarafından açıklanabilir olup olmadığını değerlendirmek için R31 yılında bir Varyans analizi (ANOVA, Tablo 2) gerçekleştirmek plastisite (tedaviye yanıt) veya evrimi plastisite (nüfus tedavi x).
  2. Yarışma deneme
    1. Nüfus başına on yavru hisse senedi kültürleri ortak Bahçe koşulları için transfer: 20 ° C, uzun photoperiod (16:8 ışık: karanlık rejimi), günlük 0,8 mg C/L Chlorella vulgaris, yem ve orta iki günde yenilemek. Ortak Bahçe koşulları müdahalelerden anne etkileri azaltmak en az iki kuşak (ca. 45 gün) için korumak.
    2. Rastgele beş gençlere 24-48 h 10 hayvanlar/L. yoğunluğu, triplicates içinde deneysel mesocosms 20 L (plastik aquaria), orta ile dolu her yavru ikinci nesil ikinci damızlık atama
    3. 24 ° c, 16:8 L:D rejimi, mesocosms ortaya çıkarmak ve günlük 0,8 mg C/L Chlorellavulgaris ısı kontrollü odası veya en az dört hafta için kuluçka makinesi ile besleme (> 3 klonal nesiller).
    4. Her mesocosm haftalık, Daphnia Doğal ortamında karşılaşabileceğiniz bir nüfus dinamik benzetimi yapmak için orta yüzde 10'u yenileme itlaf. Bilinen hacmi orta ve her akvaryum (Bu durumda 1.2 L) hayvanlardan kaldırma ve toplandılar birim ile taze orta yerine itlaf empoze. Deneysel hayvan olgunluğa (10 gün) sonra culling rejimi başlatın.
    5. Dördüncü haftanın sonunda, vardiya ile karşılaştırıldığında ilk inoculum genotypic bileşiminde değerlendirmek için her mesocosm 32 hayvanlardan örnek.
      1. Bireysel Daphnia microcentrifuge tüplerde yerleştirin ve aşırı sıvı Pasteur pipet yardımıyla kaldırın.
      2. Flaş dondurma bireysel tüpler sıvı azot ve-80 ° C'de store
      3. Genomik DNA kullanılabilir iletişim kurallarını kullanarak ve üreticinin yönergeleri izleyerek tek bireylerin ayıklayın.
      4. Ayıklanan DNA genetik işaretler civciv başına benzersiz bir multilocus genotip sağlamak için yeterli sayıda kullanarak yükseltmek. Burada, tek bir multiplex (M01, Tablo 1) düzenlenmiş 8 mikrosatelit kurulan iletişim kuralları32,33takip kullanılmıştır.
      5. Genotip bir parçası analyzer parçaları güçlendirilmiş.
      6. Parça analizi uygun boyutu standart kullanarak ticari veya serbestçe elde edilebilir ile a bilgisayar yazılımı yapmak.
      7. Genotypic düzenleme microsatellite loci bir dizi deney Genotipleme 32 bireyler tarafından sonunda açıklanan33ve deney ile karşılaştırıldığında ilk inoculum sonunda her genotip sıklığı hesaplama olarak değerlendirmek.

500 μm ölçek ile etiketlenmiş, vurgulanmış embriyo ile Daphnia'nın mikroskop görüntüsü.
Şekil 5: yetişkin kadın Daphnia magna. Yetişkin kadın Daphnia magna parthenogenetic yumurta kuluçka odasında. Baş ve kuyruk omurganın arasındaki mesafe hayvan boyutunu ölçmek için kullanılır. Kırmızı çizgiler, boyut ölçümleri gösteriyor. Ölçek çubuğu 500 µm =.

Sonuçlar

Uzun vadeli ampirik veri anlama evrimsel dinamikler ve sebat doğal nüfus için kritik öneme sahiptir. Bu gibi veriler geçici örnekleri ve veri toplama için uzun vadeli taahhütte bulunmadan şartı erişme ile ilgili lojistik zorluklar nedeniyle elde etmek için genellikle zor. Burada sunulan iki önemli çalışmalarda temiz su ekosistemleri içinde merkezi bir zooplankter sıcaklığını yanıt ampirik kanıtlar üzerinde evrimsel kez sağlanır. Bu tarihsel nüfus ve modern torunları cevaben ortak deneysel ayarlarında çevresel stres çalışma fırsatı sağlar katmanlı uyuyan yumurta bankalar kullanılarak etkinleştirilir.

Ortak Bahçe deney
Tüm yaşam öyküsü özellikleri sıcaklık için yanıt ortak Bahçe deneme gösterdi (şekil 6 ve Şekil 7). ANOVA çözümleme tüm (alt) örneğin alınma olasılığını yanıt vermeyen ölüm dışında yanıt sıcaklığa plastisite (Tablo 2), üzerinden ortaya. Evrimsel değişiklikler ((alt) nüfus arasındaki farklar) kanıtı iki üç önemli ölçüde artış sadece nüfus artış hızı (Tablo 2), içinde gözlenen (alt) nüfus 24 ° c (şekil 6).

Büyüme hızı, olgunluk, doğurganlık ve sıcaklık; dört panelli grafik; ekolojik çalışma analizi.
Şekil 6: ortak Bahçe deney. Reaksiyon normları yaşam öyküsü özellikleri (verimlilik, boyutu ve yaş Vadesinde) ve nüfus artış hızı (r) için ortak Bahçe ve geçerli sıcaklık rejimi (18 ° C) ile karşılaştırıldığında (24 ° C) ısınma sıcaklık altında her (alt) nüfus için gösterilir. Nüfus artış hızı 'r' (1) Eulerian Denklem kullanılarak hesaplanır. Güven aralıkları gösterilmiştir. (Sub) nüfus are renk kodlu: (i) mavi: 1960-1970; (ii) yeşil: 1970-1985; (iii) kırmızı: > 1999. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Zaman içinde yok olma oranları; Farklı zaman dilimlerinde soyu tükenmiş bireylerin yüzdesini karşılaştıran grafik.
Şekil 7: ölüm. Mortalite oranları (alt) nüfus başına (1960-1970; 1970-1985; > 1999) ısınma (24 ° C altında) modern sıcaklık rejimleri (18 ° C) ile karşılaştırıldığında gösterilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Mesocosm deneyi
Seçimin dört hafta sonra temsil 24 ° C, frekans üç ısınma tarafından (alt) nüfus değişmedi (χ2 0,55, P = 0,76 =) ile karşılaştırıldığında ilk inoculum (şekil 8). Mesocosm deneyde aşısını 30 genotip arasında çoğunluk seçim (Şekil 9) dört hafta sonra tespit edilmiştir. Özellikle, p inoculated genotip kurtarılan, her bir örnek 32 bireylerin genotip en az bir temsilcisi kurtarma Poissonian beklenti ile uyumlu idi.

Popülasyon frekans çubuk grafiği, farklı yıllar, deney koşulları, yüzde analizi.
Şekil 8: yarışma deneme - nüfus sıklığı. Nüfus ortalama medyan ve Dörttebirlikler (25inci ve 75inci), üç için gösterilen D. magna (alt) nüfus mesocosm rekabet deneyler (24 ° C), bir başlangıç eşit frekansta (karşılaştırıldığında seçimde dört hafta sonra başlangıç). (Sub) nüfus renk şekil 6' da gösterildiği gibi kodlarına sahiptir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Genotip frekans çubuk grafiği; hata çubukları ile dönemler arasında genotip kimlik dağılımını gösterir.
Şekil 9: yarışma deneme - genotip sıklığı. Genotip Frekanslar — ortalama medyan ve Dörttebirlikler (25inci ve 75inci), ısınma (24 ° C) ile karşılaştırıldığında genotip (noktalı çizgi) bir başlangıç eşit sıklığını maruz dört hafta sonra gösterilir. X ekseni üzerinde isimleri (alt) nüfus gruplandırılmış aşısını genotip kimliği (mavi, 1960-1970; yeşil, 1970-1985; kırmızı, > 1999). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

OdağıBİRBoyut aralığı (bp)Astar (5' - 3')Boya etiketTekrar motifiTM
B008HQ234154150-170F: TGGGATCACAACGTTACACAAVIC(TC) 9 56
BİLGİ: GCTGCTCGAGTCCTGAAATC
B030HQ234160154-172F: CCAGCACACAAAGACGAAEVDE BESLENEN HAYVAN(GA) 11 56
BİLGİ: ACCATTTCTCTCCCCCAACT
B045HQ234168118-126F: GCTCATCATCCCTCTGCTTCNED(TG) 8 56
BİLGİ: ATAGTTTCAGCAACGCGTCA
B050HQ234170234-248F: TTTCAAAAATCGCTCCCATC6FAM(GAA) 6 56
BİLGİ: TATGGCGTGGAATGTTTCAG
B064HQ234172135-151F: CTCCTTAGCAACCGAATCCA6FAM(TC) 8 56
BİLGİ: CAAACGCGTTCGATTAAAGA
B074HQ234174196-204F: TCTTTCAGCGCACAATGAATNED(GT) 9 56
BİLGİ: TGTGTTCCTTGTCAACTGTCG
B096HQ234181234-240F: GGATCTGGCAGGAAGTGGTAVIC(AC) 15 56
BİLGİ: TTGAACCACGTCGAGGATTT
B107HQ234184250-274F: GGGGTGAAGCATCAAAGAAAEVDE BESLENEN HAYVAN(CT) 8 56
BİLGİ: TGTGACCAGGATAAGAGAAGAGG

Tablo 1: Microsatellite multiplex. NCBI katılım numarası (AN), çok katmanlı bilgi, PCR astar dizileri, PCR boyutu aralığı, tekrar motifi, ileri astar ve tavlama sıcaklığı (Tm) gösterilen etiket için kullanılan boya.

Pop büyüme oranı (r)DFFP
Evrim (Pop)230.309< 0,001
Plastisite (Temp)1531.546< 0,001
Evol. Plastisite (Pop x Temp)265.137< 0,001
MortaliteDFFP
Evrim (Pop)22.2340.1162
Plastisite (Temp)12.6790.1071
Evol. Plastisite (Pop x Temp)21.86570.164
VerimlilikDFFP
Evrim (Pop)21.88520.1633
Plastisite (Temp)16.89340.0117
Evol. Plastisite (Pop x Temp)21.65110,203
Vadesinde boyutuDFFP
Evrim (Pop)20,2110.8106
Plastisite (Temp)111.13610.0017
Evol. Plastisite (Pop x Temp)20.65860.5225
Vade sonunda yaşDFFP
Evrim (Pop)20.78110.4637
Plastisite (Temp)18.07640.0066
Evol. Plastisite (Pop x Temp)20.0880.9159

Tablo 2: Varyans analizi (ANOVA). Hayat Tarih özellikleri ve nüfus artış hızı ısınmaya maruz dirilen (alt) örneğin alınma olasılığını değişiklikler evrimsel adaptasyon (nüfus), plastisite (sıcaklık tedavi), tarafından açıklanmıştır mi test Varyans analizi ve onların etkileşim dönem (plastisite evrimi). Önemli p-değerleri (p< 0,05) kalın olarak gösterilir.

Ek Video 1: tortu çekirdek örnekleme. Big Ben corer kullanımı gösterilmiştir. Big Ben 14 cm bir iç tüp çapı yaklaşık 1,5 m uzunluğunda bir çekirdek boru var. Bir ip ve çubuklar tüp tortu sürücüye bağlı bir corer kafa, bir piston oluşur. Bir çekirdek alıcı küçük bir gemi dağıtılan çekirdek tüp desteklemek için kullanılır. Piston yerçekimi basıncı ile tortu aşağı itti. Bir çerçeve çekirdek tüp pistonu yukarı doğru iter bir değiştirilmiş şişe jack kullanarak yapılan ekstrüzyon işlemi sırasında desteklemek için kullanılır. Her tortu katmanı düz metal bir yüzeye dokunarak toplanan ve uzun süreli depolama için şeffaf örnekleme çanta transfer [karanlık ve soğuk (4 ° C) koşulları]. Bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.

Ek Video 2: Sediment eleme. Sediment eleme için gerekli duyarlılık ölçeği, beyaz örnekleme tepsiler ve jeolojik elekler cihazıdır. Her tortu katmandan en az 5 g radyometrik flört için korunur. Tortu kalan ephippia izole etmek için kullanılır. Tortu ile iki jeolojik elekler, 1 mm ile bir ve ikinci birbiri üstüne yığılmış 125 µm Kafes boyutu ile elenmiş. Orta kil, büyük omurgasızlar ve Partiküler madde ayırmak için 1 mm mesh elek dökülür. 125 µm fileli ikinci elek üzerine döküp orta D. magna ephippia ve küçük partikül madde ayırır. Tortu aliquots sonra bir beyaz örnekleme tepsiye aktarılır. D. magna ephippia göz beyaz arka plan tepsisinde tarafından farkedildi. Ephippia her katmandan ayrı Petri yemeklerinde toplanır. Bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.

Ek Video 3: kapsülden çıkarma. Bir stereomicroscope altında D. magna ephippia açılan mikrodiseksiyon Forseps ile kitin durumda omurga üzerinde basınç uygulayarak. İç yumurta membran ince kaldırılır ve yumurta hafifçe dinlenme Pasteur pipet ile orta 10 mL içeren bir Petri kabına aktarılır. Bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.

Ek Video 4: çıkım. Uzun photoperiod ve 20 ° C maruz kaldıktan sonra embriyo gelişimi 48 h ile birkaç hafta arasında devam eder. Geliştirme tamamlandığında, embriyo yumurta kabuğu'arın ve serbestçe ortamda yüz. Bu dosyayı indirmek için buraya tıklayınız.

Tartışma

Nedeniyle yüksek ısı iletkenliği su, temiz su ekosistemleri küresel karşısında karasal ekosistemler daha biyolojik çeşitlilik kaybı daha yüksek risk altındadır34ısınma. Bu, bu nedenle, bu ekosistemleri içinde kilit taşı tür yanıt anlamak ve termal stres hayatta kalmak için başa çıkma mekanizmaları belirlemek için önemlidir. Bu mekanizmalar, türler ve topluluk düzeyde anlayış nasıl tür küresel ısınma tarafından etkilenen ve nasıl bireysel türler üzerinde etkisi diğer trophic seviyelere basamaklandırır tahmin yardımcı olabilir. Sonuçta, küresel ısınma yanıt-e doğru mekanizmaları anlama yok olma azaltmak için düzeltme stratejilerini tanımlamasını sağlar.

Burada sunulan örnek çalışmalar D. magna cevaben sıcaklık artışı pervasively plastisite'hayat Tarih özellikleri tarafından aracılık ettiği ve yanıt-e doğru sıcaklık artışı yalnız açık fitness maliyeti, empoze etmez göstermek en az olarak nüfus burada okudu. ' Hayat Tarih özellikleri yüksek plastisite ısınma varlığında (alt) örneğin alınma olasılığını rakip yeteneklerine önemli olmayan farklılıklar tarafından desteklenmektedir. Ancak, birden fazla nüfus üzerinde uzun vadeli rekabet deneyler bu bulgular genelleştirmek gerekli olabilir.

Uyuyan aşamaları dirilişi adaptasyon mekanizmaları ve yörüngeleri ile saat10bir tür evrim çalışmaya benzeri görülmemiş bir kaynak sağlar. Plankton tür bir hızlı oluşturma süresi (yaklaşık 2 hafta) ve bir üst headtohead kendi alt öğelerin karşı rekabet etmek veya çeşitli geçmiş Amerika'dan başlar evrim ' yeniden ' sağlayan uyuyan aşamaları, canlılığı yararlanın. Diriliş ekoloji aslında belirli bir evrimsel sonuca bazı önceki olayda şarta olup araştırma sağlar. Evrim genetik unsurları kimlik laboratuvar deneyleri için 'atalarının lines' donmuş ve resüsite mikroorganizmaların onların Gelişmiş alt6ile karşılaştırmalı analizi için kullanma içinde şu anda mümkün değildir. Ancak, bir laboratuvar organizmalar ile çalışmanın ana sınırlamaları 'atalarının devlet' zaten değiştirdi bir temel olmasıdır. Uyuyan aşamaları çalışma örneklerin zaman herhangi bir stres olay (örneğin, bozulmamış çevre koşulları) öncesine ve çeşitli son durumları için bozulmamış çevre koşullarından evrimsel yörüngeleri ölçmek için örnekleme sağlar Modern zamanlara kadar. Son yıllarda, bugünkü nüfusu14 genetik katkıda bulunmuştur son demografik ve edinilmiş süreçleri önemli anlayışlar dirilen veya hala atıl plankton aşamaları DNA polimorfizmi çalışmanın sağlamıştır , 16 , 25 , 33 , 35 , 36. yüksek işlem hacmi sıralama teknolojileri daha yüksek erişilebilirlik ile genom ve dirilen veya hala atıl etap transcriptome sıralı ve genetik değişiklik sayısını ve türünü birikmiş nüfus üzerinde gelişen süre ölçülür.

Diriliş burada sunulan SOP iki düzeyde multi-omics alanında önemli uygulamaları vardır. Multi-omics teknolojileri dirilen numuneler, moleküler öğeleri ayrıntılı bir analizini çevresel seçim basınç adaptif yanıt katılan izin uygulanabilir. Buna ek olarak, omics teknolojileri decapsulated ama hala atıl aşamaları için uygulanabilir. Şimdiye kadar yüksek işlem hacmi sıralama teknolojilerinin uygulanması aşamalarında istirahat için giriş malzeme büyük miktarda ihtiyaç tarafından sınırlıdır. Bu sınırlamalar kaldırdı37davranıyorsun. Giriş malzeme ve nanofluidics devam eden düşürücü gereksinimleri ile tüm genom sıralama (WGS) Şimdi mümkün olduğunca az 1 ng veya malzeme38başlayan bir kaç pg. Tüm genom amplifikasyon (WGA) ve tüm transcriptome güçlendirme (WTA) teknikleri, DNA ve RNA doku, çok küçük tutarlar üzerinden zenginleştirme sağlayan kullanımı metagenomics39,40 ve tıp devrim yarattı 41araştırma. Decapsulated uyuyan yumurta için uygulanan bu teknolojiler uyuyan aşamaları canlılığı ve Genişletilmiş zaman dönemleri (örneğin, yüzyıllar) soruşturma ile ilgili sınırlamaları aşan etkinleştirin.

Omurgasız topluluklar dinlenme aşamaları üreten dirilişi topluluk geçmişleri bilinen doğal manzara değişimler ya da çevresel değişiklikler çökeller orsoils2analizleri anlaşılmaktadır hizalamasını sağlar. Topluluk değişiklikleri yanıt olarak çevresel değişimin analizi bize yeteneği önemli sonuçlara yol nüfus sebat43at, trofik etkileşimleri44 Eko-evrimsel yorumlarından42 ölçmek için sağlar , toplum derleme45ve ekosistem işlevleri ve Hizmetleri46değişimler. Son olarak, çevresel değişimin biyolojik yanıt hakkında doğru Öngörüler biyolojik çeşitlilik47korunması rehberlik olağanüstü vardır. Geçerli tahmin modelleri bu açıdan yanlış olduklarından onlar hesap önemli biyolojik mekanizmaları demografi, dağılma, evrim ve tür etkileşimleri gibi içine almayın. Nasıl bu işlemlerin zaman içinde değişim anlama ve tahmin modelleme içinde bir rahip olarak bu bilgileri kullanarak tür tahmin yeteneğimizi artıracak ve topluluk sebat karşısında çevre değiştirmek2.

Burada sunulan SOP uygulama zorlukları değildir. Uyuyan aşamaları resurrecting birincil sınırlaması örnekleme için özel ekipman ihtiyacı var. Ayrıca, tortu klonal kültürlerin kurulması için eleme üzerinden tüm süreci önemli bir uygulamalı zaman gerektirir.

Burada sunulan SOP adımlardan bazıları diğer Daphnia türler için kolayca transfer edilebilir. Bunlar: örnekleme, klonal hatları ve deneysel tasarım kurulması. Ancak, SOP diğer adımları daha fazla en iyi duruma getirme türü altında eğitim için özel olarak tasarlanmış gereken. Kapsülden çıkarma kez tarama başarı geliştirmek için D. magna numuneler için uygulanır. Ancak, bu yaklaşım küçük örnekler için uygun olmayabilir. Uyaranlara yumurtadan da türler48 ve conspecific numune49arasında değişebilir. Bu nedenle, SOP çıkım adımlardan geçici bir optimizasyon uygulamaları diğer kabuklular için önce gerekli olabilir. Önceki sonuçları49doğrultusunda tarama başarıdır Gölü yüzük (tortul Arşiv genelinde %30,5) üzerinden yeniden canlandırmak D. magna nüfusunun iken başarı kuluçkalık tortu, türler koruma durumu ile değişir 50,51ve tortu48coğrafi kökeni. Giriş ve ilerleme diapause aşamalarında düzenleyen mekanizmalar gelecekteki çalışmaları farklı türler için özel olarak tasarlanmış en iyi damızlık uyaranlara tanımlamak için gereklidir.

Son olarak, bilgi eğitim sisteminin arka plan, özellikle ilgi zamanla, türlerin varlığı tavsiye. Bu tarihi yazmak yolu ile elde edilebilir. Tarihsel kayıtlar mevcut değilse, yalnızca en son tarih bilgileri sağlayabilir, ancak örnekleme ve göl tortu çekirdek örnekleme önce yüzey kat eleme, önerilir.

Açıklamalar

Yazarlar ifşa yoktur

Teşekkürler

Bu eser NERC parlak nokta hibe (NE/N016777/1) tarafından desteklenmiştir. Sis Ltd, çevre bilimsel Hizmetleri, çevre değişikliği Araştırma Merkezi, University College London'dan örneklenmiş ve tortu çekirdek tarihli.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
numune alma torbalarıFisher Scientific11542783Numune alma torbası yuvarlak teller döner kapatma sistemi ve güvenlik tırnakları steril polietilen yazı alanı ile şeffaf 89 & m kalınlık 140mm x 229mm, 720mL Fisherbrand
pistonlu corerENSIS ltdna Çamurtortusu örneklerini çıkarmak için denize, göle, gölet tabanına uzun, ağır tüp daldırıldı. Piston çekirdekleri uygun bir çapa sahiptir ve genellikle PVC
hassas terazidebulunur Veritas-M124ATLP-50Analitik Terazi
jeolojik elekUKGE limitedSV7521200 mm çaplı jeolojik elek - 1 mm gözenekli
jeolojik elekUKGE limitedSV7525200 mm çaplı jeolojik elek - 0,125 mm gözenekli
beyaz numune alma tepsisiNHBShttp://www.nhbs.com/title/view/159614?ad_id=1509Standart çok amaçlı laboratuvar tepsileri,
pastör pipetiGlobe Scientific, inc.138020BTransfer Pipeti, 1,7 mL, Genel Amaçlı, 87 mm, Ampul Çekme - 0,9 mL
stereo mikroskopNikonSMZ800Büyütme aralığı 1x -8x olan mikroskop, bir kamera kontrol ünitesine bağlı
petri kabı EduLab153-533Steril 90mm çaplı plastik petri kabı
cam kavanozlarcompakYuvarlak Reçel Kavanozları 4oz100 mL kavanozlar
cam kavanozlarcompakAtum Kavanozlar / Bonta Kavanoz 10oz200 mL kavanozlar
cam kavanozlarşişecompanysouth500ml Bükümlü Kapaklı Gıda Reçeli Kavanozu500 mL kavanozlar
istatistiksel yazılım Rhttps://cran.r-project.org/naÜcretsiz çevrimiçi GNU  istatistiksel hesaplama ve grafik
mikrodiseksiyon forsepsFisher Scientific41122405İnce nokta paslanmaz çelik forseps mikrodiseksiyon
görüntü yazılımıhttps://imagej.nih.gov/ij/index.htmlveile yazılmış açık kaynaklı ImageJ görüntü işleme araç seti
Nobby Fauna-Box III, 41 x 23 x 29 cm, 20.0 Litre
mirosantrifüj tüpleriSigma_Aldrick - MerckZ606340birinci sınıf mikrosantrifüj tüpleri 1.5 mL
AGENCOURT DNAdvanceBeckman CoulterA48705DNA ekstraksiyon kiti
boyut standardıThermo Fisher Scientific4322682LIZ500 - Boyut standardı ABI dizileyicilerle uyumlu
ABI3032 dizileyiciABInaSequencer, parça analizi veya sanger dizileme yapmak için kullanılır
, için dil ve çevre Java mezocosm amazon na

Kaynaklar

  1. Lindenmayer, D. B., et al. Value of long-term ecological studies. Austral Ecol. 37 (7), 745-757 (2012).
  2. Orsini, L., et al. The evolutionary time machine: using dormant propagules to forecast how populations can adapt to changing environments. TREE. 28, 274-282 (2013).
  3. Grant, P. R., Grant, B. R. Unpredictable evolution in a 30- year study of Darwin's finches. Science. 296, 707-711 (2002).
  4. Lohbeck, K. T., Riebesell, U., Reusch, T. B. H. Adaptive evolution of a key phytoplankton species to ocean acidification. Nature Biosci. 5, 346-351 (2012).
  5. Barrick, J. E., et al. Genome evolution and adaptation in a long-term experiment with Escherichia coli. Nature. 461 (7268), 1243-1247 (2009).
  6. Barrick, J. E., Lenki, R. Genome dynamics during experimental evolution. Nat Rev Genet. 14, 827-839 (2013).
  7. Blount, Z. D., Barrick, J. E., Davidson, C. J., Lenski, R. E. Genomic analysis of a key innovation in an experimental Escherichia coli population. Nature. 489 (7417), 513-518 (2012).
  8. Kawecki, T. J., et al. Experimental evolution. TREE. 27, 547-560 (2012).
  9. Fukami, T., Wardle, D. A. Long-term ecological dynamics: reciprocal insights from natural and anthropogenic gradients. P Roy Soc B-Biol Sci. 272, 2105-2115 (2005).
  10. Merila, J., Hendry, A. P. Climate change, adaptation, and phenotypic plasticity: the problem and the evidence. Evol Appl. 7 (1), 1-14 (2014).
  11. Evans, M. E., Dennehy, J. J. Germ banking: bet-hedging and variable release from egg and seed dormancy. Q Rev Biol. 80 (4), 431-451 (2005).
  12. Appleby, P. G. Chronostratigraphic techniques in recent sediments. 1, Kluwer Academic Publisher. (2001).
  13. Appleby, P. G., et al. PB-210 dating by low background gamma-counting. Hydrobiologia. 143, 21-27 (1986).
  14. Bidle, K. D., Lee, S. H., Marchant, D. R., Falkowski, P. G. Fossil genes and microbes in the oldest ice on Earth. PNAS. 104, 13455-13460 (2007).
  15. Geerts, A. N., et al. Rapid evolution of thermal tolerance in the water flea Daphnia. Nat Clim Change. 5, 665-668 (2015).
  16. Jansen, M., et al. Thermal tolerance in the keystone species Daphnia magna-a candidate gene and an outlier analysis approach. Mol Ecol. 26 (8), 2291-2305 (2017).
  17. Hairston, N. G. Jr, De Stasio, B. T. Jr Rate of evolution slowed by a dormant propagule pool. Nature. 336, 239-242 (1988).
  18. Hairston, N. G. Jr, et al. Lake ecosystems: Rapid evolution revealed by dormant eggs. Nature. 401, 446(1999).
  19. Weider, L. J., Lampert, W., Wessel, M., Colbourne, J. K., Limburg, P. Long-term genetic shifts in a microcrustacean egg bank associated with anthropogenic changes in the Lake Constance ecosystem. Proc. R. Soc. Lond. B. 264, 1613-1618 (1997).
  20. Kerfoot, W. C., Robbins, J. A., Weider, L. J. A new approach to historical reconstruction: Combining descriptive and experimental paleolimnology. Limnol Oceanogr. 44 (5), 1232-1247 (1999).
  21. Cousyn, C., et al. Rapid, local adaptation of zooplankton behavior to changes in predation pressure in the absence of neutral genetic changes. PNAS. 98, 6256-6260 (2001).
  22. Decaestecker, E., et al. Host-parasite Red Queen dynamics archived in pond sediment. Nature. 450, 870-874 (2007).
  23. Miner, B. E., De Meester, L., Pfrender, M. E., Lampert, W., Hairston, N. G. Linking genes to communities and ecosystems: Daphnia as an ecogenomic model. P Roy Soc B-Biol Sci. 279 (1735), 1873-1882 (2012).
  24. Ebert, D. Ecology, epidemiology, and evolution of parasitism in Daphnia. , National Library of Medicine (US), National Center for Biotechnology. (2005).
  25. Orsini, L., et al. Temporal genetic stability in natural populations of the waterflea Daphnia magna in response to strong selection pressure. Mol Ecol. 25, 6024-6038 (2016).
  26. IPCC. Summary for policymakers. , Cambridge, United Kingdom and New York, NY, USA. 1-32 (2014).
  27. Patmore, I. R., et al. Big Ben: a new wide-bore piston corer for multi-proxy palaeolimnology. J Paleolimnol. 51 (1), 79-86 (2014).
  28. Wright, H. E. Jr A square-rod piston sampler for lake sediments. J Sedimentary Petrology. 37, 975-976 (1967).
  29. Kilham, S. S., Kreeger, D. A., Lynn, S. G., Goulden, C. E., Herrera, L. COMBO: a defined freshwater culture medium for algae and zooplankton. Hydrobiologia. 377, 147-159 (1998).
  30. Klüttgen, B., Kuntz, N. orbert, Ratte, H. T. Combined effects of 3,4-dichloroaniune and food concentration on life-table data of two related cladocerans, Daphnia magna and Ceriodaphnia quadrangula. Chemosphere. 32, 2015-2028 (1996).
  31. R: A language and environment for statistical computing. , Vienna, Austria. (2017).
  32. Jansen, B., Geldof, S., De Meester, L., Orsini, L. Isolation and characterization of microsatellite markers in the waterflea Daphnia magna. Mol Ecol Res. 11, 418-421 (2011).
  33. Orsini, L., Spanier, K. I., De Meester, L. Genomic signature of natural and anthropogenic stress in wild populations of the waterflea Daphnia magna: validation in space, time and experimental evolution. Mol Ecol. 21, 2160-2175 (2012).
  34. Verberk, W. C. E. P., et al. Does oxygen limit thermal tolerance in arthropods? A critical review of current evidence. Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 192, 64-78 (2016).
  35. Frisch, D., et al. A millennial-scale chronicle of evolutionary responses to cultural eutrophication in Daphnia. Ecol Lett. 17 (3), 360-368 (2014).
  36. Yashina, S., et al. Regeneration of whole fertile plants from 30,000-y-old fruit tissue buried in Siberian permafrost. PNAS. 109, 4008-4013 (2012).
  37. Southam, A. D., Weber, R. J. M., Engel, J., Jones, M. R., Viant, M. R. A complete workflow for high-resolution spectral-stitching nanoelectrospray direct-infusion mass-spectrometry-based metabolomics and lipidomics. Nat Protoc. 12 (2), 310-328 (2017).
  38. Rhodes, J., Beale, M. A., Fisher, M. C. Illuminating Choices for Library Prep: A Comparison of Library Preparation Methods for Whole Genome Sequencing of Cryptococcus neoformans Using Illumina HiSeq. Plos One. 9 (11), (2014).
  39. Baym, M., et al. Inexpensive Multiplexed Library Preparation for Megabase-Sized Genomes. Plos One. 10 (5), 6(2015).
  40. Bourcy, C. F. A., et al. A Quantitative Comparison of Single-Cell Whole Genome Amplification Methods. Plos One. 9 (8), (2014).
  41. Hasmats, J., et al. Assessment of whole genome amplification for sequence capture and massively parallel sequencing. PLoS One. 9 (1), e84785(2014).
  42. Becks, L., Ellner, S. P., Jones, L. E., Hairston, N. G. Jr The functional genomics of an eco-evolutionary feedback loop: linking gene expression, trait evolution, and community dynamics. Ecol Lett. 15 (5), 492-501 (2012).
  43. Ellner, S. P., Geber, M. A., Hairston, N. G. Does rapid evolution matter? Measuring the rate of contemporary evolution and its impacts on ecological dynamics. Ecol Lett. 14 (6), 603-614 (2011).
  44. Yoshida, T., Jones, L. E., Ellner, S. P., Fussmann, G. F., Hairston, N. G. Jr Rapid evolution drives ecological dynamics in a predator-prey system. Nature. 424 (6946), 303-306 (2003).
  45. Urban, M., et al. The evolutionary ecology of metacommunities. TREE. 23, 311-317 (2008).
  46. Dokulil, M. T. Eutrophication: Causes, Consequences and Control. , Springer. Netherlands. 81-88 (2014).
  47. Urban, M. C., et al. Improving the forecast for biodiversity under climate change. Science. 353 (6304), (2016).
  48. Schwartz, S. S., Hebert, P. D. N. Methods for the activation of the resting eggs of Daphnia. Freshwater Biol. 17, 373-379 (1987).
  49. Vanderkerhove, J., et al. Hatching of cladoceran resting eggs: temperature and photoperiod. Freshwater Biol. 50, 96-104 (2005).
  50. Caceres, C. E. Temporal variation, dormancy, and coexistence: a field test of the storage effect. PNAS. 94 (17), 9171-9175 (1997).
  51. Caceres, C. E. Interspecific variation in the abundance, production, and emergence of Daphnia diapausing eggs. Ecology. 79 (5), 1699-1710 (1998).

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Diriliş EkolojisiEphippia İzolasyonuSediman TabakalaşmasıMikrodiseksiyon PensleriSondaj SuyuKuluçka İndüksiyonuYeni Nesil DizilemeEvrimsel YanıtPopülasyon Büyüme Hızı
Diriliş uyuyan Daphnia magna: Protokolü ve uygulamaları
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.