Summary
مطلوب تميع السائل المنوي للحيوانات المنوية أن يتحرر من هلام المنوي. وتوفر هذه الدراسة إجراءات جمع السائل المنوي من الجماع بعد انتهاء الأنثى التناسلي، وقياس الوقت تميع السائل المنوي.
Abstract
في الفئران، تودع أنزل المني في الرحم. يتغير السائل المنوي بعد القذف، الاتساق من جل تشبه إلى مائي، تسمى عملية تسييل. في هذه الدراسة، علينا إظهار كيفية جمع السائل المنوي بعد اجاكولاتيد من المسالك التناسلية الإناث في طراز ماوس. أولاً، الكبار الفئران الإناث في مرحلة السفاد داخل قفص الذكور بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، أكدت وجود المكونات كوبولاتوري في افتتاح المهبل الجماع. كانت الفئران الإناث مع المقابس copulatory euthanized، وجمعت كل التناسلي ككل (المهبل، الرحم، أوفيدوكتس، والمبايض)، ضمان نظام مغلق لاحتواء السائل المنوي. وضع المسالك التناسلية في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل، وانقطع المهبل بالإفراج عن السائل المنوي في الأنبوب. للتأكد من حجم السائل المنوي كحد أقصى للتحليل، استخدمت الملقط بلا أسنان للضغط على قرون الرحم من المبيض نهاية إلى نهاية المهبل طرد السائل المنوي المتبقية. ثم تم تجاهلها كلياً التناسلي. كان نسج الأنبوبة المحتوية على السائل المنوي بإيجاز إلى أسفل. ماصة شعرية 25 ميكروليتر وضعت في أنبوب بزاوية 180 درجة (موازية لجدار الأنبوبة). تم تسجيل مقدار الوقت المستخدم لملء الأنبوب الشعرية إلى السطر 25 ميكروليتر. وعادة ما يستغرق السائل المنوي من مربي ذكور ثبت حوالي 60-180 s لملء أنبوب شعري 25 ميكروليتر. يمكن أيضا استخدام هذا الأسلوب جمع السائل المنوي في التطبيقات الأخرى المتلقين للمعلومات مثل تحليل التصوير وحركية الحيوانات المنوية.
Introduction
وتتألف التناسلي الإناث المسالك العلوي والسفلي. ويشمل المسالك التناسلية العليا فالوب والرحم، واندوسيرفيكس. ويشمل التناسلي السفلي في اكتوسيرفيكس والمهبل. في البشر، وهو إيداع السائل المنوي اجاكولاتيد في الجدار الأمامي للمهبل، المتاخمة لل اكتوسيرفيكس1. في الفئران، ولكن السائل المنوي هو اجتاحت الرحم في غضون دقائق بعد التزاوج2.
السائل المنوي يحتوي على جل المنوي هو توطد في غضون ثوان قذف، مما تسبب في الحيوانات المنوية تكون شرك والمعطل تداولها3. تسييل النشرات الحيوانات المنوية المعطل تداولها بتغيير السائل المنوي من جل تشبه إلى اتساق مائي. هذه العملية ضروري لعدد الحيوانات المنوية الحركة واستنساخ الثدييات. معظمها يستند إلى المعرفة تميع السائل المنوي في المختبر الدراسات حيث يصبح المني المسال في صحن ثقافة. في البشر، والنشاط الأنزيمي مستضد البروستات محددة أو هيكل السلام والأمن (المعروف أيضا كاليكرين المتصلة peptidase 3 أو KLK3) هو المساهم الرئيسي لاسالة عن طريق التحلل المائي سيمينوجيلينس (هلام تشكيل البروتينات الموجودة في السائل المنوي)4 ،،من56. تدهور سيمينوجيلينس تحرر الحيوانات المنوية من coagulum المنوي، زيادة تنقل الحيوانات المنوية. أطلق سراح الحيوانات المنوية تسبح نحو قناة فالوب لتخصيب البويضة. تسييل (أو لزوجة السائل المنوي) الاختبارات واحدة من العروض الأولية القياسية لتحليل السائل المنوي في عيادات الخصوبة لتقييم خصوبة الذكور7.
مقال نشر مؤخرا تبين أن تحليل السائل المنوي التي جمعت من الماوس الأنثى التناسلي بعد التزاوج يمكن استخدامها لتوضيح قصورا في تسييل وبعد ذلك يمكن أن يسبب الخصوبة العيوب8. تسييل معيبة مثل هايبرفيسكوسيتي السائل المنوي يساهم 11.8-32.3 في المائة حالات العقم في الرجال9، مما يوحي بأن اسأله عادية لا غنى عنه لاستنساخ الثدييات. ومع ذلك، ركزت الدراسات وعلاج العيوب تسييل حصرا على الذكور7. لم تستكشف إمكانية أن الأنثى التناسلي يلعب دوراً في تميع السائل المنوي. ولذلك، سيوفر طرق جمع السائل المنوي وقياس الوقت تسييل الباحثين أداة تشخيصية جديدة لتحديد سواء تسييل يمكن أن يكون واحداً من أسباب العقم في الكائن الحي النموذجي للفائدة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
جميع الحيوانات والإجراءات المستخدمة في هذه الدراسة تم التعامل معها وفقا للمبادئ التوجيهية جامعة الدولة واشنطن (WSU) العناية بالحيوان واستخدام اللجنة ووفقا لبروتوكولات الحيوانية وافقت WSU #4702 و #4735.
1-الفئران
-
استخدام معيار C57BL/6J الفئران الذكور البالغين أو السلالات الأخرى ذات الاهتمام. الحفاظ على الحيوانات تحت بيئة تسيطر عليها درجة الحرارة والرطوبة، مع وصول libitum الإعلانية للماء والغذاء.
- استخدام مربي الذكور تتراوح بين 8 أسابيع من العمر 10 أشهر. استخدم فقط ثبت مربي في التجارب.
-
استخدام الفئران الإناث الكبار مع حذف انتقائي أنسجة من المسالك التناسلية الإستروجين مستقبلات α (المشفرة بواسطة الجين Esr1 ) في الخلايا الظهارية10 (Wnt7aCre/+؛ Esr1و/واو، يسمى خروج المغلوب أو "كو") والتحكم في ليتيرماتيس (Esr1f/f، تسمى "CTRL") في هذه الدراسة.
- استخدم 8 أسبوع الإناث. إعمار الإناث تختلف باختلاف هذه التجربة للفائدة.
- تحديد مراحل دورة الشبقية في الصباح في ح 08:00. استخدم فقط من الإناث في مرحلة الدورة السفاد. لطرق مفصلة لتلطيخ المهبلية وتحليل الخلوية، تشير إلى أن الإجراءات المنشورة سابقا11.
2-التزاوج وتقييم المقابس Copulatory
- في يوم السفاد (ح 16:00)، منزل الأنثى في قفص الذكور.
- في صباح اليوم التالي (08:00 h)، فصل الإناث عن الماوس الذكور.
- استخدم لتكيف من الأسلوب المنشورة سابقا12 للوصول إلى وجود أو عدم وجود المكونات المهبل أو كوبولاتوري كمؤشر للتزاوج.
- أمسك الماوس الإناث من قاعدة الذيل رفع أطرافه هند بإيجاز.
- البحث عن المكونات كوبولاتوري بوجود coagulum المنوي البيض في افتتاح المهبل باستخدام مسواك. إذا كان التوصيل copulatory الحالية، لن قادراً على إدراجها في القناة المهبلية المسواك.
3-إعداد قبل جمع الأنسجة
- إعداد 10 مل ليبوفيتش في L-15 وسائط الإعلام، وتستكمل مع 1% مصل بقرى الجنين (تسمى الوسائط L15 + 1% FBS) في أنبوب 15 مل. وسائل الإعلام في 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة في حمام مائي احتضانها.
- بغية المحافظة على استمرارية الأنسجة والحيوانات المنوية للتطبيقات المصب، الكوة 2 مل المعالجون مسبقاً وسائل الإعلام L15 + 1% FBS في ميكروسينتريفوجي 2 مل أنبوب لجمع الأنسجة.
- الحارة مرحلة ستيريوميكروسكوبي إلى 37 درجة مئوية. تعيين الحرارة-الكتلة إلى 37 درجة مئوية ووضع أنبوب ميكروسينتريفوجي مل 1.5 فارغة في الكتلة.
- إذا تتطلب التطبيقات المصب التصوير لعدد الحيوانات المنوية الحركة، الحارة الشريحة الزجاجية إلى 37 درجة مئوية.
4-الأنسجة جمع
- إحضار المعالجون مسبقاً L15 الوسائط + 1% FBS قاسمة لمنطقة جمع الأنسجة.
- Euthanize الأنثى (~ 08:30 ح) استخدام الخنق بغاز ثاني أكسيد الكربون متبوعاً بخلع عنق الرحم.
ملاحظة: هذا ما يقارب 8 ح بعد التزاوج، على افتراض أن التزاوج يحدث في منتصف الليل. - وضع الحيوان في موقف ضعيف لفضح منطقة البطن.
- رذاذ الكحول 70% في البطن قرب هند أطرافه.
- استخدام مقص تشريح لقطع صغيرة (~ 1 سم) على الجلد من أسفل البطن.
- استخدام اليد المهيمنة لسحب الذيل (واطرافهم هند إذا لزم الأمر) بينما تسحب اليد غير المهيمنة الجلد في الاتجاه المعاكس (نحو الرأس) لفضح عضلة البطن. يتم استخدام هذا الأسلوب لتقليل كمية التلوث الشعر إلى أجهزة الحشوي.
- قطع عضلة البطن في الخامس-شكل عند قاعدة البطن، المتاخمة للمهبل، للكشف عن أجهزة الحشوي.
- تحريك الأمعاء والدهون في منطقة البطن إلى الجانب لفضح المسالك التناسلية.
- تقليم قبالة الأنسجة الأخرى فوق منطقة المهبل والمثانة.
- قص العانة الارتفاق عن بعضها البعض للوصول إلى الأنسجة المهبلية.
- رفع الأنسجة المهبلية عند افتتاح المهبلي واستخدام المقص لفصل القناة المهبلية من أنسجة المستقيم.
- تقليم بعناية قبالة الدهون المساريقي العلوي من كلا الجانبين من الرحم باستخدام مقص الربيع.
تنبيه: هشة للغاية مع السائل المنوي داخل الرحم. يجب الحرص على عدم ثقب الرحم، وأﻻ فسوف تضيع السائل المنوي. - رفع التناسلي السفلي وقطع لوحة الدهون المبيض الخروج من كلا الجانبين.
- نقل كامل التناسلي في أنبوب L-15 وسائل الإعلام قبل حرارة ليبوفيتش + 1% FBS.
5-قياس تميع السائل المنوي (اللزوجة) من جمع المحتوى الرحم
- في مرحلة ساخنة ستيريوميكروسكوبي، نقل الأنسجة إلى طبق استنبات الأنسجة معقمة 35 ملم مليئة 3.5 مل استعد قبل الإعلام L-15 + 1% FBS لتنظيف أنسجة الدم والملوثات الأخرى.
تنبيه: أثناء الغسيل، انتزاع الأنسجة من الدهون، لا الرحم. عند هذه النقطة، من المتوقع السائل المنوي يكون سليمة داخل الرحم. - لطخة الأنسجة الزائدة الوسائط باستخدام مناديل المختبر.
- اضغط الأنسجة في نهاية المهبل أثناء وضع نهايات المبيض في أنبوب ميكروسينتريفوجي قبل ساخنة. حين عقد في نهاية المهبل، قص قرون الرحم في قاعدة الرحم، والسماح لقرون الرحم إلى الوقوع في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
- السائل المنوي واسمحوا تدفق من قرون الرحم إلى الأنبوب. استخدام الملقط بلا أسنان للضغط بلطف قرون الرحم من المبيض نهاية إلى نهاية المهبل، طرد من بقايا السائل المنوي.
- تجاهل الأنسجة في حقيبة واقية وحرقها.
- باختصار تدور أسفل السائل المنوي في مينيسينتريفوجي (~ 1-2 s).
- وضع الأنبوب، موازية لمرحلة ساخنة--سوف لا تسرب السائل المنوي خارجاً.
- جهاز ضبط الوقت جاهزة وتعيين 'العد'.
- إدراج أنبوب شعري 25 ميليلتر في عينة السائل المنوي بزاوية 180 درجة (موازية لجدار الأنبوبة). وهذا لتقليل التفاوت بين كل محقق من عقد الأنبوبة الشعرية في زوايا مختلفة.
- اضغط جهاز ضبط الوقت حالما الأنبوبة الشعرية يجعل الاتصال مع السائل المنوي.
- تسجيل الوقت (s) فإنه يأخذ للسائل المنوي الوصول إلى خط 25 ميليلتر.
- عند الانتهاء من القياس فورا الأنبوب الذي يحتوي على السائل المنوي مرة أخرى في كتلة الحرارة الجافة لمزيد من التحليل الوظيفي، مثل التصوير بالفيديو لعدد الحيوانات المنوية الحركة.
- تطهير الأنبوبة الشعرية التي تحتوي على السائل المنوي بغمر الأنبوب في حل التبييض 10% لمدة 20 دقيقة، وتجاهل الأنبوبة الشعرية في حاوية الأدوات الحادة.
6-فيديو تصوير لعدد الحيوانات المنوية الحركة
- قم بتشغيل المجهر وبرامج التصوير الفيديو.
- "الماصة؛" 20 ميليلتر من السائل المنوي المتبقية على شريحة الزجاج المعالجون مسبقاً، في حين يتم وضع الشريحة الزجاجية في مرحلة ساخنة.
- تغطية مع ساترة زجاج.
- ضع الجانب ساترة الشريحة إلى أسفل في المجهر.
- استخدام 20 X عدسة الهدف لإيجاد مجال الاهتمام.
- تغيير إلى 100 عدسة الهدف العاشر للتصوير بالفيديو.
- تسجيل الفيديو 12 الإطارات في الثانية (fps) لمدة 30 ثانية.
- سجل أشرطة الفيديو عشوائياً في مناطق مختلفة على الأقل 3 للحيوان الواحد.
- إجراء التصوير بسرعة وتقليل التعرض للضوء على الشريحة حفاظا على عدد الحيوانات المنوية الحركة وقدرتها على البقاء.
ملاحظة: هذا الإجراء التصوير، وينبغي أن يتم ضمن 2-3 دقيقة. - القيام بتحليل البيانات استخدام برنامج إيماجيج كما هو موضح سابقا8.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم جمع السائل المنوي من CTRL وكو ح الإناث حوالي 8 بعد التزاوج مع الذكور CTRL خصبة. تسييل (أو لزوجة السائل المنوي) هو كمياً بالوقت الذي يستغرقه لملء 25 ميكروليتر الأنبوبة الشعرية مع السائل المنوي. السائل المنوي التي جمعت من السيطرة التي استغرق 2.06 ±0.12 دقيقة (mean±S.E.M, n = 5) لملء الأنبوب الشعرية (الشكل 1). غير أن السائل المنوي التي جمعت من كو التي استغرق وقتاً أطول من 60 دقيقة (60.0 ±0.0، mean±S.E.M، ن = 5) من الوقت التجريبي. تشير هذه البيانات إلى أن السائل المنوي هو إلى حد كبير المسال أكثر أو أقل لزوجة في السيطرة بالمقارنة مع التي كو.
وقيمت عدد الحيوانات المنوية الحركة لتوضيح أحد التطبيقات المتلقين للمعلومات لجمع السائل المنوي من المسالك التناسلية الإناث، باستخدام التصوير بالفيديو. جمع السائل المنوي من يشكل CTRL أظهرت بحرية-سباحة الحيوانات المنوية داخل الحقل المجهري، ممثلة في اللقطة في الشكل 2A. السائل المنوي التي جمعت من يشكل كو أظهرت أن غالبية الحيوانات المنوية جمعت جنبا إلى جنب مع الحد الأدنى من التنقل (الشكل 2). تشير هذه النتائج إلى أن جمع السائل المنوي من الأنثى التناسلي ح 8 بعد التزاوج يمكن أن تستخدم لتحليل الحيوانات المنوية آخر.
الشكل 1 : جمع وقت تسييل (اللزوجة السائل المنوي) من السائل المنوي من الماوس التي. تمثيل رسومي لتسييل الوقت (دقيقة) للسائل المنوي التي تم جمعها من CTRL وكو يشكل حوالي 8 ح بعد التزاوج. وتمثل البيانات mean±S.E.M., n = 5 إناث/النمط الوراثي. ف < مزاوج 0.001، اختبار ستيودنت t-. مقتبس من النتائج المنشورة سابقا8 مع الإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 : جمع صور الممثل للحيوانات المنوية داخل السائل المنوي من الماوس التي. جمعت لقطات تمثيلية من تصوير الفيديو المتخذة في 1000 X التكبير للحيوانات المنوية في السائل المنوي من يشكل كو CTRL (أ) و (ب) . مقتبس من النتائج المنشورة سابقا8 مع الإذن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
جمع السائل المنوي من الماوس التي يمكن أن توفر مزايا أكثر من السائل المنوي تحليل في المختبر كما السابق ويمكن توضيح التفاعلات الفسيولوجية بين السائل المنوي والإفرازات من الأنثى التناسلي. تسمح التقنيات المعروضة في هذه الدراسة الباحثين لتحديد نوعية السائل المنوي وكذلك بقاء الحيوانات المنوية وحركية في الظروف الفسيولوجية المثالية. وعلاوة على ذلك، هناك مختلف التحليلات المتلقين للمعلومات التي يمكن أن يؤديها باستخدام السائل المنوي التي جمعت من يشكل، على سبيل المثال، يمكن أن تحسب الحيوانات المنوية لتحديد العدد الفعلي من الحيوانات المنوية تدخل الرحم والحيوانات المنوية يمكن تصويرها أيضا لفحوصات حركية. ينبغي أن تكون نقطة الوقت المثالي لجمع السائل المنوي للقدرة على الإخصاب داخل ح 1 إلى 2 بعد التزاوج1.
بالإضافة إلى التطبيقات المتلقين للمعلومات المذكورة سابقا، يمكن أيضا تقييم المحققين آثار مثبطات/المركبات ذات الأهمية في نقل الحيوانات المنوية العمليات، مثل تميع السائل المنوي (أو لزوجة السائل المنوي)، عدد الحيوانات المنوية في المسالك، الحيوانات المنوية حركية، أو الحيوانات المنوية الهجرة إلى مناطق مختلفة من المسالك التناسلية الأنثى. يمكن تطبيقها المركبات في المسالك التناسلية الأنثى قبل التزاوج8. بعد ذلك، يمكن تقييم تأثير تلك الموانع/المركبات من عينة السائل المنوي بعد التزاوج. هذه الطرق يمكن أن تكون مفيدة لاختبار إمكانية التطبيق العملي لوسائل منع الحمل من العقاقير التي تحول دون نقل الحيوانات المنوية.
النقاط الهامة للنظر للقياسات جمع وتسييل/لزوجة السائل المنوي هي حساسية الحيوانات المنوية وزاوية الأنبوبة الشعرية. الحيوانات المنوية حساسة لتغير درجات الحرارة. إذا كان التحليل المصب وظيفة الحيوانات المنوية وحركية ضروري للنتائج التجريبية، والأنسجة والمنى بحاجة إلى أن يبقى على 37 درجة مئوية في جميع الأوقات، مع الحد الأدنى من التعرض للضوء. إذا كان هناك عدة عينات لجمع من الإناث متعددة، euthanize الحيوانات واحد في وقت واحد للتقليل من الانتظار. لقياس تسييل، إنشاء زوايا مختلفة من الأنبوب الشعرية التناقضات في وقت تسييل. ولذلك، يلزم أن المحققين عقد الأنبوبة الشعرية موازية لجدار الأنبوبة (بزاوية 180°) لتقليل التقلبات التي تم إنشاؤها بواسطة كل محقق. وينبغي عدم جمع عينة السائل المنوي يتجاوز 09:00 ح، وهذا سبب إعادة استيعاب السوائل في الرحم. لا يجوز المحقق من الحصول على مادة السوائل كافية لقياس تسييل.
ومن الثابت أن تميع السائل المنوي هو أساسا بوساطة من النشاط الأنزيمي من بسا يفرز من غدة البروستاتا13. ومع ذلك، هناك دراسات محدودة لتحديد أدوار الأنثى التناسلي خلال في فيفو تسييل العملية8. ولذلك، جمع السائل المنوي من المسالك التناسلية النسائية يوفر ميزة حاسمة لدراسة التميع العمليات في فيفو، بعد أن تعرضت السائل المنوي لافرازات من الأنثى التناسلي14. وفي الختام، يسمح قياس تسييل/لزوجة السائل المنوي بعد أنزل الباحثون فك التداخل بين السائل المنوي والأنثى التناسلي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
ويدعم هذا العمل كلية الطب البيطري (WSU) بدء الصندوق إلى WW. يشكر المؤلفون سييرا أولسن (WSU) لقراءة نقدية لهذه المخطوطة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Toothpick | Diamond | 750-Flat | Autoclaved sterile, use blunted toothpick. Do not use point-ended |
| Dissecting scissors | Fisher | 08-940 | |
| Spring scissors | Roboz | RS-5600 | |
| Fine forceps | Roboz | RS-5045 | |
| 25-μL glass capillary tube | VWR | 53432-761 | |
| Leibovitz’s L-15 media | Life Technologies | 11415064 | Supplement with 1% FBS |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gemini Bio-Products | 100-106 | |
| 1.5-mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-150-C | |
| 2-mL microcentrifuge tube | Axygen | MCT-200-A | |
| Digital dry block heater | VWR | 13259-052 | For warming the microcentrifuge tube prior to semen collection |
| Minicentrifuge | Corning | LSE 6765 | |
| 35-mm culture dish | VWR | 10861-656 | |
| 15-mL polypropylene centrifuge tube | VWR | 10025-686 | |
| Waterbath | Precision | TSGP05 | |
| Heated stage stereomicroscope | Leica Microsystems | MZ10F | To keep the tissue warm prior to semen collection |
| Brightfield microscope | Leica Microsystems | DMi8 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Camera | Leica Microsystems | DMC2900 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Glass slides | Fisher | 12-552-3 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Coverslip | VWR | 48393-059 | Optional. For video imaging of the sperm motility |
| Bleach | Dilute in dH2O to 10% concentration |
References
- Suarez, S. S., Pacey, A. A. Sperm transport in the female reproductive tract. Hum Reprod Update. 12 (1), 23-37 (2006).
- Bedford, J. M., Yanagimachi, R. Initiation of sperm motility after mating in the rat and hamster. J Androl. 13 (5), 444-449 (1992).
- Lilja, H. Cell biology of semenogelin. Andrologia. 22 Suppl 1, 132-141 (1990).
- Lilja, H., Abrahamsson, P. A., Lundwall, A. Semenogelin, the predominant protein in human semen. Primary structure and identification of closely related proteins in the male accessory sex glands and on the spermatozoa. J Biol Chem. 264 (3), 1894-1900 (1989).
- Veveris-Lowe, T. L., Kruger, S. J., Walsh, T., Gardiner, R. A., Clements, J. A. Seminal fluid characterization for male fertility and prostate cancer: kallikrein-related serine proteases and whole proteome approaches. Semin Thromb Hemost. (33), 87-99 (2007).
- Emami, N., Deperthes, D., Malm, J., Diamandis, E. P. Major role of human KLK14 in seminal clot liquefaction. J Biol Chem. 283 (28), 19561-19569 (2008).
- Gerhard, I., Roth, B., Eggert-Kruse, W., Runnebaum, B. Effects of kallikrein on sperm motility, capillary tube test, and pregnancy rate in an AIH program. Arch Androl. 24 (2), 129-145 (1990).
- Li, S., Garcia, M., Gewiss, R. L., Winuthayanon, W. Crucial role of estrogen for the mammalian female in regulating semen coagulation and liquefaction in vivo. PLoS Genet. 13 (4), e1006743 (2017).
- Elia, J., et al. Human semen hyperviscosity: prevalence, pathogenesis and therapeutic aspects. Asian J Androl. 11 (5), 609-615 (2009).
- Winuthayanon, W., Hewitt, S. C., Orvis, G. D., Behringer, R. R., Korach, K. S. Uterine epithelial estrogen receptor alpha is dispensable for proliferation but essential for complete biological and biochemical responses. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (45), 19272-19277 (2010).
- McLean, A. C., Valenzuela, N., Fai, S., Bennett, S. A. Performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification. J Vis Exp. (67), e4389 (2012).
- JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Fundamentals of Breeding and Weaning. JoVE. , Cambridge, MA (2017).
- Prassas, I., Eissa, A., Poda, G., Diamandis, E. P. Unleashing the therapeutic potential of human kallikrein-related serine proteases. Nat Rev Drug Discov. 14 (3), 183-202 (2015).
- Muytjens, C. M., Vasiliou, S. K., Oikonomopoulou, K., Prassas, I., Diamandis, E. P. Putative functions of tissue kallikrein-related peptidases in vaginal fluid. Nat Rev Urol. 13 (10), 596-607 (2016).
