Bewertung von Stammzelltherapien in einem bilateralen Patellasehne Verletzungen Modell bei Ratten

Summary

Dieses Papier beschreibt die Vorbereitung und Auswertung der Nabelschnur Matrix-mesenchymale Stammzellen Sphäroide mit einem bilateralen Patellasehne defekt-Modell in eine Ratte. Dieses Modell wurde wurde mit einer akzeptablen Morbidität verbunden festgestellt, dass die Unterschiede zwischen unbehandelten und behandelten sehnen erkennen und zwischen den beiden Behandlungen getestet.

Abstract

Regenerativer Medizin bietet neuartige Alternativen zu Bedingungen, die traditionelle Behandlungen herausfordern. Die Prävalenz und die Morbidität der Sehnenerkrankung Arten, kombiniert mit den begrenzten heilenden Eigenschaften dieses Gewebes, aufgefordert, die Suche nach Zelltherapien und trieb die Entwicklung der experimentellen Modellen, deren Wirksamkeit zu studieren. Nabelschnur Matrix mesenchymaler Stammzellen (UCM-MSC) sind ansprechende Kandidaten, weil sie sind reichlich vorhanden, leicht zu sammeln, zu umgehen, die ethische Bedenken und das Risiko von Teratom Bildung noch primitiven embryonalen Stammzellen mehr ähneln als Erwachsenen Gewebe abgeleitet MSCs. signifikante Interesse konzentriert sich auf Chitosan als Strategie, um die Eigenschaften des MSCs durch Sphäroid Bildung zu verbessern. Dieses Papier Details Techniken UCM-MSCs isolieren Sphäroide auf Chitosan Film vorzubereiten und analysieren die Wirkung der Sphäroid Bildung auf Surface Marker Ausdruck. Erstellung eines bilateralen Patellasehne Verletzungen Modells bei Ratten wird folglich für in Vivo Implantation der UCM-MSC Sphäroide auf Chitosan Film gebildet beschrieben. Ohne Komplikationen beobachtet wurde in der Studie in Bezug auf Morbidität, steigenden Effekte oder Gewebe Infektion zu betonen. Funktionale Gesamtpunktzahl der betriebenen Ratten nach 7 Tagen war niedriger als die von normalen Ratten, aber innerhalb von 28 Tagen nach der Operation zur Normalität zurückgekehrt. Histologischen Resultate von Heilung des Gewebes bestätigte das Vorhandensein eines Gerinnsels in behandelten Mängel 7 Tage ausgewertet aufgrund fehlender Fremdkörperreaktion und mit 28 Tagen Heilung voran. Dieses bilaterale Patella Sehne defekt Modell war steuert interindividuelle Variation durch Erstellung einer internen Kontrolle in jede Ratte mit akzeptablen Morbidität verbunden und erlaubt die Erkennung von Unterschieden zwischen unbehandelten Sehnen und Behandlungen.

Introduction

Sehnenverletzung ist eines der häufigsten Ursachen für erhebliche Schmerzen und Muskel-Atrophie Arten¹. In der Veterinärmedizin sind Sehnen und Bänder Verletzungen von besonderem Interesse bei Pferden, wie 82 % aller Verletzungen im Rennpferde des Muskel-Skelett-Systems einbeziehen, und 46 % der Befragten Einfluss auf Sehnen und Bänder^2,3. Bildung von Narbengewebe beeinflusst die biomechanischen Eigenschaften des geheilten Sehnen und erklärt die bewachte Prognose für Rückkehr zur sportlichen Nutzung nach Flexor Sehnenverletzungen; Re-Verletzung tritt innerhalb von 2 Jahren in bis zu 67 ....

Protocol

Alle hier beschriebene Methoden wurden von den institutionellen Animal Care und Nutzung Committee (IACUC) der Western University of Health Sciences genehmigt.

1. Isolierung und Ausbau der MSCs von Equine Nabelschnur Matrix

1. Erhalten Sie die Plazenta von einem Erwachsenen Mare (schwanger), nach dem Abfohlen beobachtet und aseptisch isolieren Sie die Nabelschnur aus der Plazenta. Halten Sie die Nabelschnur in Phosphat gepufferte Kochsalzlösung (PBS) mit 1 % Penicillin-Streptomycin (P/S) bei 4 ° C während der Übertragung bis zur Verarbeitung.
2. Waschen Sie die Nabelschnur zweimal mit Raumtemperatur PBS mit 1 % P/S in einem 50 ....

Results

In der aktuellen Studie werden Ergebnisse präsentiert, da ± SD (Standardabweichung) bedeuten. Zellen wurden isoliert von der Nabelschnur 6 Stuten und Prozentsatz der isolierten Zelllinien mit dem Ausdruck jeder Zelle Oberfläche Marker unter Standard- oder Chitosan Klimaanlage verglichen mit Friedman-Test als eine nicht-parametrische Varianzanalyse mit wiederholt Maßnahmen. Für die Sehne defekt Modellerstellung 8 Ratten dienten für 7 Tage nach der Operation Bewertung und 12 Ratten wurden f.......

Discussion

Equine Zellen wurden für dieses Projekt ausgewählt, weil wir wollen schließlich Kandidat Ansätze bei der Verwaltung der natürlichen Sehnenpathologien bei Pferden zu testen. In der Tat sind Sehnenverletzungen bei Pferden wegen der biologischen Ähnlichkeit zwischen dem equine oberflächlichen Beugesehne und Achillessehne Menschen⁴¹ansprechend als natürlichen Vorbildern der Sehnenerkrankung im Menschen. Die Zelle Oberflächenmarker CD44, CD90, CD105, CD34 und MHC-II wurden für die Immunphänotypisierung.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
PBS 10x	Hyclone	SH30258.01	Verbrauchsmaterial
Kollagenase Typ IA	Worthington	LS004197	Verbrauchsmaterial
DMEM Hyklon mit niedrigem Glukosegehalt		SH30021. FS	Verbrauchsmaterial
Fötales Rinderserum	Hyklon	SH30910.03	Verbrauchsmaterial
Penicillin/Streptomycin 100x	Hyklon	SV30010	Verbrauchsmaterial
Trypsin 0,25%	Hyklon	SH30042.01	Verbrauchsmaterial
Accutase	Innovative Cell Technologies	AT104	Verbrauchsmaterial
Trypanblau	Hyklon	SV30084.01	Verbrauchsmaterial
Dimethylsulfoxid	Sigma	D2650	Verbrauchsmaterial
Chitosan	Sigma	C3646	Verbrauchsmaterial
Natriumhydroxid	Sigma	S8045	Verbrauchsmaterial
Rinderserum Albumin Hyclone		SH30574.01	Verbrauchsmaterial
Polystyrolrohr mit rundem Boden	Corning	149591A	Verbrauchsmaterial
Maus Anti-Pferd CD44 (FITC)	AbD serotec	MCA1082F	Verbrauchsmaus
Anti-Ratte CD90 (FITC)	AbD serotec	MCA47FT	Verbrauchsmaus
Anti-Pferd MHC-II (FITC)	AbD serotec	MCA1085F	Verbrauchsmaus
IgG1 (FITC) - Isotyp Kontrolle	AbD serotec	MCA928F	Verbrauchsmaus
monoklonal [SN6] bis CD105 (FITC)	abcam	ab11415	Verbrauchsmaus
IgG1 (FITC) - Isotypsteuerung	abcam	ab91356	Verbrauchsmaus
anti-human CD34 (FITC)	BD	BDB560942	Verbrauchsmaus
IdG1 kappa (FITC)	BD	BDB555748	Verbrauchsmaterial
7-AAD	BD	BDB559925	Verbrauchsmaterial
BD Accuri C6 Durchflusszytometer	BD		Ausrüstung
Vacutainer 5 mL	Med Vet International	RED5.0	Verbrauchsmaterial
Säure-Citrat-Dextrose	Sigma	C3821	Verbrauchsmaterial
Calciumchlorid	Sigma	C5670	Verbrauchsmaterial
Sevofluran	JD Medical	60307-320-25	Verbrauchsmaterial
Ratten	Charles River	Stammcode: 400	Versuchstier
Chirurgisches Set für Ratten	Harvard Gerät	728942	Ausrüstung
Chirurgische Klinge #15	MEDLINE	MDS15115	Verbrauchsmaterial
Ratte MD's Baytril (2 mg/Tablette), Rimadyl (2 mg/Tablette)	Bio Serv	F06801	Verbrauchsmaterial
Polyglactin 910, 5-0	Ethicon	J436G	Verbrauchsmaterial
Eosin Alchol Shandon	Thermo wissenschaftliches	6766007	Verbrauchsmaterial
Harris Hämatoxylin	Thermo wissenschaftliches	143907	Verbrauchsmaterial