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Article de méthode

Évaluation des thérapies de cellules souches dans un modèle de blessure Tendon patellaire bilatérale chez le rat

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DOI :

10.3791/56810

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30 mars 2018

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Dans cet article

Résumé

Cet article décrit la préparation et l’évaluation des sphéroïdes matrice dérivées de cellules souches mésenchymateuses du cordon ombilical avec un modèle de défaut du tendon patellaire bilatérale chez un rat. Ce modèle a été associé à une morbidité acceptable et a été trouvé pour détecter les différences entre les tendons non traités et traités et entre les deux traitements testé.

Résumé

Médecine régénérative fournit des solutions de rechange aux conditions qui remettent en question les traitements traditionnels. La prévalence et la morbidité de tendinopathie diverses espèces, combinées avec les propriétés curatives limitées de ce tissu, ont incité la recherche de thérapies cellulaires et propulse le développement de modèles expérimentaux d’étudier leur efficacité. Cordon ombilical matrice mésenchymateuses cellules souches dérivées (Université Complutense de Madrid-SMC) sont candidats attrayants parce qu’ils sont abondants, facile à recueillir, contourner les préoccupations éthiques et le risque de formation de tératome, pourtant plus ressemblent beaucoup à des cellules souches embryonnaires primitives que adultes dérivés de tissus significatifs MSCs. intérêt vise le chitosan comme une stratégie pour améliorer les propriétés de MSCs, par le biais de la formation sphéroïde. Ce papier détails techniques pour isoler l’UCM-MSCs, préparer des sphéroïdes sur film de chitosan et analyser l’effet de formation sphéroïde sur l’expression du marqueur de surface. En conséquence, création d’un modèle de blessure tendon patellaire bilatérale chez le rat est décrite pour l’implantation de in vivo des sphéroïdes UCM-MSC formé sur le film de chitosan. Aucune complication n’a été observée dans l’étude en ce qui concerne la morbidité, soulignons hausse des effets, ou une infection des tissus. Le score fonctionnel des rats exploités à 7 jours est inférieur à celle des rats normaux, mais revenue à la normale dans les 28 jours après la chirurgie. Les scores histologiques des tissus de guérison ont confirmé la présence d’un caillot dans les défauts traités ont évalué à 7 jours, absence de réaction à corps étranger et progresse de guérison à 28 jours. Ce modèle de défaut du tendon patellaire bilatéral contrôle la variation inter-individuelle via la création d’un contrôle interne dans chaque rat, a été associé à une morbidité acceptable et a permis la détection des différences entre les tendons non traitées et les traitements.

Introduction

Blessure au tendon est l’une des causes plus fréquentes de l’atrophie importante douleur et muscle l’ensemble de l’espèce1. En médecine vétérinaire, lésions de tendons et ligaments sont d’un intérêt particulier chez les chevaux, que 82 % de toutes les blessures chez les chevaux de course implique le système musculo-squelettique, et 46 % de ceux qui affectent les tendons et les ligaments2,3. Formation de tissu cicatriciel affecte les propriétés biomécaniques des tendons cicatrisés et explique le pronostic surveillé pour retour à usage sportif après des blessures de tendon fléchisseur ; n....

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Protocole

Toutes les méthodes décrites ici ont été approuvés par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de Western University of Health Sciences.

1. isolement et Expansion de MSCs de matrice équine du cordon ombilical

  1. Obtenir le placenta d’une jument adulte (enceinte) après avoir observé le poulinage et isoler aseptiquement le cordon ombilical du placenta. Gardez le cordon ombilical dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avec 1 % de pénicilline-streptomycine (P/S) à 4 ° C pendant le transfert jusqu’au traitement.
  2. Lavez le cordon ombilical deux fois avec la température de la pièce PBS avec 1 % P/S d....

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Résultats

Dans la présente étude, les résultats sont présentés comme moyenne ± écart-type (écart-type). Les cellules ont été isolés dans les cordons ombilicaux de 6 juments et pourcentage des lignées de cellules isolées exprimant chaque marqueur de surface cellulaire sous conditionnement standard ou chitosan ont été comparés avec un test de Friedman, comme une analyse de variance non-paramétrique avec répété mesures. Pour la création de modèles de défaut de tendon, 8 rats ont été utilisés pour l’év.......

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Discussion

Cellules équines ont été choisis pour ce projet, parce que finalement, nous avons l’intention de tester des approches de candidat dans la gestion des tendinopathies naturel chez le cheval. En effet, les blessures de tendon chez les chevaux sont attrayants comme modèles naturels de tendinopathie chez l’homme en raison de la similitude biologique entre l’équine flexor digital superficiel et le tendon d’Achille dans les humains41. Les marqueurs de surface cellulaires CD44, CD90 CD105, CD34 et CMH II .......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêt à divulguer.

Remerciements

Les auteurs aimerait Su, Ph.d., pour son analyse statistique des données. Les auteurs remercient également m. McClure, D.M.V., Ph.d, DACLAM, pour ses conseils sur l’anesthésie et les protocoles de gestion de la douleur utilisées dans l’étude. Ce projet a été soutenu par des subventions de la Western University of Health Sciences Bureau du Vice Président de recherche (12678v) et Fonds USDA article 1433 (2090).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
PBS 10xHycloneSH30258.01Consommable
Collagénase type IAWorthingtonLS004197Consommable
DMEM faible teneur en glucoseHycloneSH30021. FSConsommable
Sérum fœtal bovinHycloneSH30910.03Consommable
Pénicilline/Streptomycine 100xHycloneSV30010Consommable
Trypsine 0.25 %HycloneSH30042.01Consommable
AccutaseInnovative Cell TechnologiesAT104Consommable
Trypan blueHycloneSV30084.01Consommable
Diméthyl SulfoxydeSigmaD2650Consommable
ChitosanSigmaC3646Consommable
Hydroxyde de sodiumSigmaS8045Consommable
Sérum bovin AlbumineHycloneSH30574.01Consommable
Tube en polystyrène à fond rondCorning149591AConsommable
Souris anti-cheval CD44 (FITC)AbD serotecMCA1082FConsommable
Souris anti-rat CD90 (FITC)AbD serotecMCA47FTConsommable
souris anti-cheval MHC-II (FITC)AbDserotecMCA1085FConsommable
souris IgG1 (FITC) - Contrôle d’isotypeAbD serotecMCA928FConsommable
Souris monoclonale [SN6] à CD105 (FITC)abcamab11415Consommable
Souris IgG1 (FITC) - Contrôle d’isotypeabcam ab91356Consommable
Souris anti-humaine CD34 (FITC)BDBDB560942Consommable
Souris IdG1 kappa (FITC)BDBDB555748Consommable
7-AADBDBDB559925Consommable
BD Accuri C6 Cytomètre en FluxBDEquipement
Vacutainer 5 mLMed Vet InternationalRED5.0Consommable
Acide-citrate-dextroseSigmaC3821Consommable
Chlorure de calciumSigmaC5670Consommable
SévofluraneJD Medical60307-320-25Consommable
RatsCharles RiverCode de souche : 400Animal de laboratoire
Kit chirurgical pour ratsAppareil Harvard728942
Équipement Lame chirurgicale #15MEDLINEMDS15115Consommable
Rat MD’s Baytril (2 mg/Comprimé),
Rimadyl (2 mg/Comprimé)
Bio ServF06801Consommable
Polyglactin 910, 5-0EthiconJ436GConsommable
Eosin alchol shandonThermo consommable6766007
scientifique Harris HematoxylinThermo scientific143907Consommable

Références

  1. Rossdale, P. D., Hopes, R., Digby, N. J., offord, K. Epidemiological study of wastage among racehorses 1982 and 1983. Vet Rec. 116 (3), 66-69 (1982).
  2. Black, D. A., Tucci, M., Puckett, A., Lawyer, T., Benghuzzi, H. Strength of a new method of achilles tendon repair in the rat - ....

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Réimpressions et autorisations

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